科技部科研院所技术开发研究专项(2009EG150293)
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
- 相关作者：王晓英闫琳郭云昌余东敏裴晓燕更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心国家食品安全风险评估中心中国动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：科技部科研院所技术开发研究专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PCR-ELISA技术及其在生物医学领域中的应用被引量：10
- 2011年
- 聚合酶链反应-酶联免疫吸附(PCR-ELISA)技术是利用PCR的高敏感性、核酸探针的特异性、酶标仪直接读取结果的客观性等优点创建的一项技术,自建立以来得到了广泛的关注。本文对这项技术做了基本介绍,并重点对近些年来其在生物医学领域中的应用进行综述。
- 闫琳王晓英郭云昌
- 关键词：PCR-ELISA生物检测生物医学
- 两种选择性培养基HE、CAS检测沙门菌效果的比较被引量：3
- 2011年
- 目的比较两种沙门菌选择性培养基HE和CAS在食物样本检测中的敏感性、准确性和时效性。方法观察典型沙门菌和非沙门菌在两种选择培养基上的生长状况和菌落形态。通过人工染菌实验,比较两种选择性培养基分离沙门菌的检测效果。采集16份市售整鸡样本,进一步比较两种培养基沙门菌的阳性检出率。结果沙门菌在HE平板上为绿色菌落,大多有黑心;在CAS平板上为紫色菌落。含菌量为10 CFU/25 g鸡肉样本,经SC增菌液增菌培养8 h,可用CAS检出沙门菌;而采用HE则需增菌18 h才可检出。16份整鸡样本,增菌8、12和18 h,采用CAS的阳性检出率分别为43.75%、31.25%和37.5%,相应时间下采用HE的阳性检出率分别为18.75%、25%和18.75%。8份新鲜整鸡样本,检出4份阳性;8份冷冻整鸡样本,检出3份阳性。结论 CAS选择性平板可抑制大多杂菌生长,沙门菌在其上菌落形态较易鉴别。CAS分离沙门菌的检出时限和检测灵敏度都明显优于HE,建议在食物样本检测沙门菌时应首选CAS。
- 闫琳王晓英郭云昌裴晓燕余东敏
- 关键词：沙门菌
- 增菌-PCR法与传统方法检测禽肉中沙门菌的比较研究被引量：2
- 2011年
- 目的比较增菌-PCR法与传统方法检测禽肉中沙门菌的敏感性、特异性和时效性。方法以沙门菌invA基因为基础,选择特异性引物,采用30株沙门氏菌和18株非沙门菌建立并验证PCR法的特异性。选用肠炎沙门菌CMCC50041,参照GB4789.4—2010进行人工染菌实验,染菌量分别为每25g样本1、10、102、103、104、105和106 CFU。分别在增菌0、4、8、12和18h取1ml培养液,提取DNA进行PCR检测,并同时划线接种选择性平板,用传统方法进行分离鉴定,比较两种方法检测的敏感性和特异性。采集16份市售整鸡样本,用这两种方法进行检测,进一步比较两者的阳性检出率。结果 30株沙门菌都检出阳性,而非沙门菌都检测为阴性,说明本研究建立的PCR法特异性好。人工染菌的样本在增菌12h后,PCR法检出限可达每25g禽肉样本1CFU,传统方法检出限为每25g禽肉样本10CFU。增菌-PCR法整个流程只需要1天,比传统方法需时提前4～6天。16份市售样本,增菌-PCR法的阳性率为43.75%(7/16),高于传统方法31.25%(5/16)。结论增菌-PCR法具有快速简便、敏感特异等优点,较传统方法大大缩短了检出时限,提高了沙门菌的检出率。
- 闫琳王晓英郭云昌裴晓燕余东敏
- 关键词：禽肉沙门菌
- 应用Taqman实时PCR法检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌被引量：6
- 2014年
- 目的建立敏感快速的检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌的实时PCR方法。方法以hlyA基因为靶标,建立并验证实时PCR法的特异性。选用单核细胞增生李斯特菌CMCC 54004,制备不同浓度的纯菌液,用实时PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率。进行人工染菌实验,染菌量分别为每25g猪肉样本1.3×100、1.3×101、1.3×102、1.3×103、1.3×104、1.3×105和1.3×106CFU。分别在增菌0、4、8、12、18、24、30、36和46 h取1 ml培养液,提取DNA进行实时PCR检测,并用PCR和传统方法进行检测,比较3种方法检测的敏感性和特异性。采集24份市售猪肉样本,用这3种方法进行检测,进一步比较三者的阳性检出率。结果建立的实时PCR法特异性好,对纯菌液的检出限为1.3×103CFU/ml。人工染菌样本增菌24 h后,实时PCR检出限1.3 CFU/25 g,PCR及传统方法达到这一检出限需要增菌46 h。根据增菌24 h的检测结果,建立实时PCR样本标准曲线。24份猪肉样本,实时PCR检出17份阳性,阳性率70.83%(17/24),与PCR和传统方法的阳性率一致。根据所得的样本标准曲线,对检测样本进行定量分析,确定了阳性样本中初始含量菌。结论所建立的实时PCR具有快速简便、敏感特异等优点,整个操作可在27 h内完成,适用于猪肉中单核细胞增生李斯特菌的快速定量检测。
- 闫琳王晓英郭云昌裴晓燕余东敏杨大进
- 关键词：实时PCR单核细胞增生李斯特菌猪肉
- 应用Taqman实时PCR法检测禽肉中沙门菌的研究被引量：4
- 2014年
- 目的 建立敏感快速的检测禽肉中沙门菌的实时PCR法.方法 以invA基因为基础,建立RT-PCR法并验证其特异性.选用肠炎沙门菌CMCC 50041,制备不同浓度的纯菌液,用RT-PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率.进行人工染菌实验,染菌量分别为每25 g鸡肉样本1、10、102、103、104、105和106 CFU.分别在增菌0、4、8、12、18 h取1 ml培养液,提取DNA进行RT-PCR检测,并同时用PCR和传统方法进行检测,比较3种方法检测的敏感性和特异性.采集16份市售整鸡样本,用这3种方法进行检测,进一步比较三者的阳性检出情况.结果 建立的RT-PCR法特异性好,对纯菌液的最低检测限为5.2×103 CFU/ml,在5.2×103～ 5.2×1010 CFU/ml范围内,菌浓度的对数值和检测结果的Ct值线性关系良好,R2=0.999.人工染菌样本在增菌12 h后,RT-PCR法检出限可达l CFU/25 g,与PCR检测的敏感性一致,比传统方法的检出限敏感10倍.根据增菌12 h的检测结果,建立了RT-PCR样本标准曲线.采用RT-PCR检测16份禽肉样本,检出7份阳性,与PCR一致,高于传统方法（5份阳性）.根据样本标准曲线,对检测样本进行定量分析,确定了阳性样本中初始含量菌.结论 所建立的RT-PCR具有快速简便、敏感特异等优点,适用于禽肉中沙门菌的快速定量检测.
- 闫琳王晓英郭云昌裴晓燕余东敏杨大进
- 关键词：聚合酶链反应食品检查
