北京市自然科学基金(5072038)
- 作品数：3 被引量：38H指数：3
- 相关作者：王伟孔建强郑晓东程克棣朱平更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院黑龙江中医药大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 中国红豆杉细胞色素P450还原酶的基因克隆、表达与活性分析被引量：17
- 2010年
- 细胞色素P450还原酶(Cytochrome P450 reductase,CPR)是细胞色素P450羟基化酶电子传递链的组成部分,在生物体内起着重要的电子传递作用。文章从中国红豆杉(Taxuswallichiana var. Chinensis)愈伤组织细胞中克隆CPR基因(TchCPR),TchCPR含有一个2154bp碱基的阅读框,编码717个氨基酸残基;在氨基酸水平上它与裸子植物细胞色素P450还原酶的同源性(>82%)高于其他被子植物的细胞色素P450还原酶(<74%)。在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达了全长和从N-端截短不同数目氨基酸残基的6个融合肽段,经亲和层析纯化,分析了表达的不同长度融合蛋白的电子传递效率。结果表明截短长度大于61个氨基酸残基肽段的胞色素P450还原酶都能够诱导表达,在表达水平上无显著差异,而截短61个氨基酸的CPR融合蛋白电子传递的催化活性(1.6057nmol Cyt Cred/min/μg TchCPR融合蛋白)高于其他4个融合蛋白。
- 阮仁余孔建强郑晓东张书香秦成蕴程克棣王建明王伟
- 关键词：中国红豆杉
- HMG-CoA还原酶和FPP合酶基因拷贝数对紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌产量的影响被引量：12
- 2007年
- 从青蒿中克隆了紫穗槐-4,11-二烯合酶基因(ADS),从酿酒酵母中克隆了HMG-CoA还原酶(HMGR)催化结构域和FPP合酶(FPPS)基因。构建含ADS基因的酿酒酵母表达载体pYeDP60/G/AS,将其转入酿酒酵母,获得能产生紫穗槐-4,11-二烯的酵母工程菌,以朱栾倍半萜为参照,产量为10μg.L-1。另外构建了含HMGR和FPPS基因的酵母表达载体pGBT9/A/HMG/G/FPP,将该载体和pYeDP60/G/AS共转入酿酒酵母,得到第二个能产生紫穗槐-4,11-二烯的酵母工程菌,产量为23.6 mg.L-1,结果表明增加HMG-CoA还原酶和FPP合酶基因的拷贝数能显著增加酵母工程菌的紫穗槐-4,11-二烯产量。
- 孔建强程克棣王丽娜郑晓东戴均贵朱平王伟
- 关键词：HMG-COA还原酶
- 青蒿P450 cDNA基因的克隆及生物信息学分析被引量：9
- 2007年
- 目的:对青蒿P450 cDNA基因进行克隆和生物信息学分析。方法:通过RT-PCR,从青蒿cDNA中克隆了1个P450基因;通过生物信息学方法,对其结构特点进行分析。结果:该P450 cDNA基因ORF为1 464 bp,编码488个氨基酸,该序列在GenBank上的登录号为DQ667171。编码蛋白是一个中等大小的A型P450,相对分子质量54.992 kDa;等电点8.83,定位于线粒体,和CYP71AV1具有很高的同源性。结论:该青蒿P450和CYP71AV1在进化和性质上很接近,可能在青蒿中执行类似功能。
- 孔建强王伟郑晓东朱平程克棣
- 关键词：青蒿P450生物信息学分析
