国家科技攻关计划(2003BA712A05-03)
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
- 相关作者：何君端青朱虹苏裕心王争强更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 鹦鹉热衣原体HSP60基因克隆及其表达产物抗原性的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的验证新获得的鹦鹉热衣原体HSP60基因在E.coli中高效表达的产物是否具有足够的抗原活性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的应用奠定基础。方法根据GenBank鹦鹉热衣原体Hsp60基因序列X51404,设计一对特异性引物,扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,克隆入pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,表达产物分子量约为68kD,经Western blotting和胶体金免疫层析技术检测,表明表达产物具有较好的抗原性。结论扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,并对其表达产物的抗原性进行免疫印记分析和免疫层析初步检测,表明具有较好的抗原性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的意义打下了基础。
- 裴杰萍朱虹何君檀华张美玲端青
- 关键词：鹦鹉热衣原体HSP60克隆
- 一种基于momp基因的衣原体分子生物学甄别技术的初步建立被引量：1
- 2006年
- 目的利用PCR方法建立一种基于momp基因的衣原体分子甄别方法。方法根据衣原体momp基因的恒定区和可变区分别设计衣原体科特异性引物和种特异性引物,利用PCR方法对本实验室保存的衣原体进行扩增,以达到甄别的目的。利用限制性片段长度多态性(RFLP)分析科特异性PCR扩增产物,研究momp基因的多态性。结果利用建立的PCR方法对本实验室保存的九株衣原体进行了研究,结果表明八株衣原体都是鹦鹉热嗜衣原体,一株为沙眼衣原体。利用限制性片段长度多态性(RFLP)分析科特异性PCR扩增产物,分析了D34、B11001、CW2和CP12四株衣原体,结果可以产生两种不同的带型。结论利用建立的PCR方法可以达到检测甄别衣原体的目的,并可以通过RFLP分析衣原体的侵袭性。
- 朱虹王争强何君苏裕心端青
- 关键词：衣原体限制性片段长度多态性
- 鹦鹉热嗜衣原体实时定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2006年
- 目的建立一种简便、快速、特异的荧光定量PCR检测方法,用于鹦鹉热嗜衣原体的快速检测。方法以主要外膜蛋白(MOMP)基因为靶序列设计特异性引物,采用SYBR GreenⅠ随机渗入法建立实时定量PCR检测方法。结果循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0×102-1.0×107拷贝/μl浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.989。该方法用于鹦鹉热嗜衣原体的检测具有很高的特异性,其敏感性与常规PCR相比可以提高100倍。结论本研究建立的检测鹦鹉热嗜衣原体的实时定量PCR检测方法具有很高的特异性和敏感性,可以用于鹦鹉热嗜衣原体的检测。
- 王争强朱虹苏裕心何君端青
- 关键词：实时定量PCR熔解曲线
- 突发疫情中炭疽芽孢杆菌的分离及鉴定被引量：3
- 2006年
- 对疑似炭疽感染病牛牛肉标本和牛血污染土壤标本进行了病原菌分离,经菌落形态和菌体形态观察、血清学实验和生化鉴定,证明分离到的细菌为炭疽芽孢杆菌。为进一步了解其特性,分别用保护性抗原、水肿因子和荚膜基因特异性引物对2株菌进行PCR扩增。结果显示,这两株菌有两个毒力相关质粒pX01和pX02,为有毒株。序列测定表明,这两株菌基因间同源性达99%,这两株菌与GenBank中炭疽芽孢杆菌A2012株、Ames Ancestor株和A16R疫苗株同源性达99%。
- 王争强何君苏裕心朱虹端青宋立华
- 关键词：炭疽芽孢杆菌生化鉴定基因克隆PCR扩增
- 支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用被引量：2
- 2006年
- 目的研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,以诊断肺炎支原体感染。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A；用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜；组装成免疫色层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测。结果用该试纸检测了88份肺炎患者血清标本和80份正常人血清标本,结果与两个国外公司、一个国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致。结论该诊断试纸具有较好的特异性和敏感性,简便快速,适合基层单位使用。
- 张美玲檀华朱虹何君端青
- 关键词：肺炎支原体支原体肺炎胶体金免疫层析技术
- 支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用被引量：3
- 2008年
- 目的研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,从而诊断肺炎支原体感染。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A;用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜;组装成免疫层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测。结果用该试纸检测了88份肺炎血清标本,与两家国外公司、1家国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致。结论该试纸具有较好的特异性和敏感性,并且更简便快速,适合基层单位使用等特点。
- 张美玲檀华朱虹何君端青李艳
- 关键词：肺炎支原体支原体肺炎胶体金免疫层析技术
