“十一五”国家科技攻关计划(2006BAD4A16-4)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：刘艳琴吴树清海岩吴杰更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学内蒙古自治区疾病预防控制中心更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛布鲁氏菌OMP25的原核表达及表达产物的免疫学特性被引量：1
- 2011年
- 目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP25的克隆、测序和表达,并对其进行免疫特性检测。方法采用PCR技术对牛布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因进行了扩增和克隆测序,并成功构建了原核表达质粒pGEX-OMP25。将其转入E.coliBL21,经IPTG诱导表达,用电洗脱纯化后获得了高纯度的目的蛋白。纯化后的蛋白与弗氏佐剂乳化后免疫家兔得到了较高效价的抗血清。结论通过ELISA、Western-blotting分析及特异性检测试验,证明目的蛋白不仅具有抗原性且有良好的免疫反性。
- 刘艳琴海岩吴树清
- 关键词：流产布鲁氏菌免疫特性
- 布鲁菌外膜蛋白OMP25的原核表达
- 2011年
- 为了克隆布鲁菌外膜蛋白OMP25基因并构建基因的原核表达系统,试验采用聚合酶链反应(PCR)扩增得到布鲁菌基因组OMP25基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列,将目的基因定向插入原核表达载体pET-32a,经双酶切和DNA测序,再将构建的重组质粒转化到E.coilDH5α、Rosetta,经IPTG诱导后用SDS-PAGE检测重组蛋白pET32a-OMP25的表达情况。结果表明:经DNA测序显示OMP25基因序列和插入位点正确,成功构建了重组质粒pET32a-OMP25,经IPTG诱导表达出以包涵体形式存在的长为43 ku的OMP25融合蛋白;经Western-blot检测,OMP25融合蛋白与布鲁菌阳性血清发生特异性反应,说明重组蛋白具有良好的反应原性。
- 刘艳琴吴树清吴杰
- 关键词：布鲁菌分离株重组质粒蛋白纯化
