国家高技术研究发展计划(2007AA100604)
- 作品数：6 被引量：223H指数：3
- 相关作者：刘进元董志扬严泽民李甜段明星更多>>
- 相关机构：清华大学中国科学院江苏隆力奇生物科技股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 超氧化物歧化酶(SOD)的应用研究进展被引量：211
- 2013年
- 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,简称SOD)是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的酶。它广泛存在于各类动物、植物、微生物中,是一种重要的抗氧化剂,保护暴露于氧气中的细胞。近年来,SOD在农业和医药等多个领域都展现出了巨大的应用价值和开发前景。对SOD的功能、抗氧化机制、类型以及生产方式等进行了概述,并重点综述了SOD在工业(医药工业,食品和日化工业)和农业上的的应用情况及发展潜力,以期为我国SOD产品的深入开发和利用提供参考。
- 董亮何永志王远亮董志扬
- 关键词：超氧化物歧化酶活性氧自由基
- 云南洱源牛街热泉原核微生物多样性分析被引量：6
- 2010年
- 【目的】通过分析富含高分子有机物的云南洱源牛街热泉原核微生物16SrRNA基因克隆文库,丰富对高温热泉原核微生物多样性的认识,为进一步开发和利用该热泉微生物资源奠定基础。【方法】构建洱源牛街高温热泉原核微生物16SrRNA基因克隆文库,通过测序和序列相似性比对以及聚类分析研究该热泉原核微生物的多样性。【结果】该热泉原核微生物以细菌为主,包括变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、梭杆菌门(Fusobacteria)等在内的约10个细菌类群,其中变形菌门中的β-变形菌纲(β-Proteobacteria)为优势菌群,其次为拟杆菌门(Bacteroidetes)、绿菌门(Chlorobi);古菌的生物量和丰度较细菌少,分属广古菌(Euryarchaeota)和泉古菌(Crenarchaeota)两个类群,以广古菌为优势类群。
- 孙盼顾淳任菲戴欣董志扬
- 关键词：RRNA基因热泉
- 原核表达的萝卜PHGPx和谷胱甘肽对NIH3T3细胞氧化损伤的联合保护作用被引量：1
- 2010年
- 将大肠杆菌中高效表达的萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)及其底物还原型谷胱甘肽(GSH)联合作用于H2O2、过氧化叔丁基(t-BHP)以及磷脂氢过氧化物(PLPCOOH)损伤的小鼠NIH3T3成纤维细胞,研究其对于细胞过氧化损伤的保护作用。发现单独加入10μg/ml RsPHGPx并不能明显保护细胞应对过氧化损伤,但是10μg/ml RsPHGPx与3mg/mlGSH共同作用,可显著提高GSH对细胞过氧化损伤的保护效果,提高细胞存活率,降低细胞膜脂质过氧化水平和胞内活性氧(ROS)水平,保护细胞维持形态完整和抑制细胞凋亡。这一联合作用结果说明RsPHGPx的催化作用可以快速清除细胞内多种过氧化物,高效地保护细胞免受过氧化损伤,为RsPHGPx的应用提供了实验依据。
- 刘冠兰李甜刘进元严泽民段明星
- 关键词：谷胱甘肽
- 重组萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在毕赤酵母优化表达初步纯化与鉴定被引量：2
- 2010年
- 将萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)基因插入到分泌表达载体pPIC9K中,转化巴斯德毕赤酵母GS115细胞,筛选具有G418抗性的单拷贝转化子。经过优化表达条件,RsPHGPx在1%甲醇、pH6.0、28℃条件下诱导60h后得到最大表达量,产率约为102mg/L。通过硫酸铵分级沉淀、脱盐柱脱盐、凝胶过滤等纯化步骤,得到了90%以上纯度的RsPHGPx.活性分析显示纯化获得的RsPHGPx具有依赖于GSH的还原活性,比活性为4.2μmol/min.mg,为获得大量RsPHGPx而用于应用开发研究奠定了基础。
- 李洋李晖祝建波刘进元
- 关键词：分泌表达蛋白纯化质谱鉴定活性检测
- N末端缺失萝卜谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的表达、纯化及结构预测被引量：1
- 2008年
- 将N末端定位信号缺失萝卜PHGPx(RsPHGPx)的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化至大肠杆菌内进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了用于晶体学研究的RsPHGPx.其浓度约为10 g/L,纯度超过95%,具有PHGPx活性.三维结构同源建模显示RsPHGPx的结构为典型的硫氧还蛋白折叠形式.
- 王丰刘进元
- 关键词：萝卜谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶纯化
- 原核表达的萝卜PHGPx对黑色素瘤B16细胞紫外辐射损伤的恢复作用被引量：3
- 2010年
- 将大肠杆菌中高效表达的萝卜PHGPx(RsPHGPx)和突变的RsPHGPx(mRsPHGPx)融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B柱亲和纯化和PreScission蛋白酶柱上酶切,获得了不含GST标签的RsPHGPx和mRsPHGPx重组蛋白,纯度在90%以上。酶活测定验证了活性中心Cys突变的mRsPHGPx的活性显著低于RsPHGPx。考察RsPHGPx和mRsPHGPx对紫外辐射损伤后的黑色素瘤B16细胞的恢复作用,发现活性较高的RsPHGPx能有效提高细胞存活率,降低细胞膜脂质过氧化水平,而活性极低的mRsPHGPx则几乎没有效果,提示由于RsPHGPx能快速清除多种脂类过氧化物,可能主要通过抑制紫外辐射造成的细胞膜脂质过氧化损伤起作用。
- 李甜刘冠兰段明星余世实刘进元严泽民徐之伟
- 关键词：定点突变紫外辐射
