公共文化服务平台

共 4 条记录，以下是 1-4

全选清除导出

排序方式：

慢病毒介导白介素IL15在人树突状细胞中表达研究被引量：3: 2014年; 目的本研究建立了表达人白细胞介素15的重组慢病毒，验证其在人树突状细胞中的表达，希望以此用于疫苗佐剂或基因免疫治疗。方法从人PBMC中扩增IL15基因，克隆至慢病毒表达质粒中，用plvx．ILl5-Ires—gfp包装出重组慢病毒，感染293T细胞用以验证目的基因IL15表达。结果抗生素筛选获得表达IL15的细胞系，目的基因能够在体外稳定的表达。结论构建的慢病毒能够在人未成熟树突状细胞中稳定的表达IL15，可以进一步作为疫苗佐剂或基因免疫治疗使用。; 徐柯冯霞余双庆曾毅胥少华; 关键词：白细胞介素15 基因树突细胞

HIV-1特异性单抗2G12单价抗体的构建及活性分析: 2015年; 目的构建单价抗体并与IgG比较结合活性及中和活性的差异。方法对IgG1抗体重链恒定区基因进行改造,分别构建N端截短型的IgG1重链恒定区基因IgG1-tH和去除绞链区二硫键及CH2、CH3区的稳定非共价键的2G12重链基因2G12-HM。将IgG1-tH与2G12抗体重链和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达含有完整Fc的单价抗体;将2G12-HM和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达半分子型的单价抗体。通过非还原SDS-PAGE对表达抗体的大小进行鉴定,并用ELISA和微量中和实验比较原型2G12抗体和单价抗体的结合活性及中和活性。结果以HIV-1中和抗体2G12为模型通过基因改造成功表达了两种单价抗体,一种为完整的重链、轻链以及N端截短型的重链分子组成的包含1个Fab和1个Fc的单价抗体2G12-tH;另一种为1条重链和1条轻链组成的半分子型单价抗体2G12-HM。两种抗体均可与抗原有效结合,且与IgG分子相比差异无统计学意义。中和实验结果发现IgG抗体能中和的,病毒两种单价抗体也均能中和。结论成功构建了两种单价抗体,与IgG相比其结合活性和中和活性无明显变化。; 冯一帆刘雪徐柯冯霞曾毅余双庆; 关键词：人类免疫缺陷病毒中和活性

HIV-1中和抗体2G12真核表达载体的构建及活性检测: 2017年; 目的构建HIV-1中和抗体全基因共表达真核质粒载体,观察其在293T细胞中的表达并检测其活性.方法合成HIV-1中和抗体2G12轻链可变区（VL）和重链可变区（VH）,与含人IgG轻、重链恒定区的载体分别连接,构建出完整的2G12轻链和重链的载体,通过PCR扩增与连接将2G12轻、重链全长构建到真核表达载体pVR中,同时将内部核糖体进入位点（Internal ribosome entry site,IRES）插入到此载体中构建双基因表达系统,重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,ELISA检测抗体表达效果,通过结合实验及中和实验检测细胞上清的结合活性和中和活性.结果获得可表达人IgG的重组双基因真核表达载体,转染后上清的抗体表达量为6.43 μg/ml,并且抗体保留了原来的结合活性和中和活性.结论所构建的载体可表达具有较好的结合活性和中和活性的抗体,本研究为真核表达载体表达人HIV中和抗体全基因方面提供了可选择的平台.; 王晓菲贾润清周玉柏管永军曾毅; 关键词：HIV 中和抗体

带有标记基因自删除系统的穿梭载体的构建与功能鉴定: 2015年; 构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA(rMVA)。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两侧插入TKL的同源序列。pZL-EGFP与MVA病毒共转染BHK-21细胞后经10代传代,一次噬斑筛选以获得携带有外源基因且EGFP已被删除的rMVA。最终获得的rMVA通过PCR和Western Blot方法对pZL-EGFP的功能进行鉴定。成功构建出具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,包装获得的重组痘苗病毒可在传代过程中自动删除标记基因EGFP。基因删除未影响重组病毒的活力,外源蛋白的表达具有良好的稳定性。pZL-EGFP能与MVA病毒在BHK-21细胞内发生同源重组并包装出rMVA,其携带的标记基因可在病毒传代过程中通过分子内同源重组被自动删除,基因删除不影响重组病毒的活力及外源基因的表达,这为进一步的研究奠定了坚实的基础。; 李莉莉王湛周玉柏张芳沈思嗣李泽琳曾毅; 关键词：穿梭质粒 MVA 标记基因同源重组

全选清除导出

共1页<1>

国家科技重大专项(2012ZX10001005)