四川省重点科学建设项目(SZD0241)
- 作品数：23 被引量：110H指数：6
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- 相关机构：泸州医学院附属医院重庆医科大学附属第二医院成都中医药大学附属医院更多>>
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- 耐多药大肠埃希菌AmpC酶基因型及耐药性被引量：5
- 2013年
- 目的探讨临床分离耐多药大肠埃希菌(E.coli)产AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)现状。方法初筛试验及三维试验:检测产AmpC酶菌株;纸片扩散法(K-B法):测定临床分离71株大肠埃希菌对头孢噻肟(CTX)等10种抗菌药物的抗菌活性;PCR技术检测三维实验阳性菌株的AmpC酶基因。阳性扩增片段送上海生工生物技术公司进行基因测序。结果在71株大肠埃希菌中粗筛阳性产AmpC酶菌株共11株,通过头孢西丁三维试验分离出产AmpC酶的菌株8株,占总菌株数11.27%。药敏结果显示对亚胺培南全敏感,对阿米卡星等9种抗菌药物均有不同程度耐药;耐药模式中以耐多药菌株24株(33.80%);产AmpC酶菌株对多种常用抗生素的耐药率明显高于非产AmpC酶菌株(P<0.05);检测发现2株质粒AmpC酶基因阳性。结论大肠埃希菌的多重耐药的现象突出;产AmpC酶菌株的耐药率明显高于非产AmpC酶菌株;质粒介导的AmpC酶的基因型表现为DHA-1。
- 邹永胜龚强黄永茂陈枫钟利陈庄
- 关键词：大肠埃希菌质粒AMPC酶基因多重耐药
- 产ESBLs大肠埃希菌耐药性及基因型分析被引量：16
- 2013年
- 目的了解川南地区医院感染产β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌基因型特征和临床耐药情况。方法收集2010年10月～2011年9月期间本院住院患者分离的大肠埃希菌,双纸片协同试验确定产ESBLs大肠埃希菌,PCR扩增技术进行基因分型,K-B法比较产ESBLs阳性株与阴性株耐药率。结果 77株大肠埃希菌双纸片协同试验确认28为株产ESBLs菌株;PCR扩增显示,28株产ESBLs大肠埃希菌中TEM型11株(39.29%),SHV型6株(21.43%),TEM、SHV双基因型2株(7.14%),非TEM、非SHV型9株(32.14%)。K-B法测定ESBLs阳性株对多种抗生素的耐药率(亚胺培南除外)高于ESBLs阴性株。结论川南地区产ESBLs大肠埃希菌以TEM型为主,对常用抗菌药物耐药率高于ESBLs阴性菌株。
- 陈枫黄永茂曹勇唐小平林雁陈庄
- 关键词：大肠埃希菌超广谱Β-内酰胺酶基因型
- 结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12表达质粒联合免疫的细胞免疫应答观察被引量：3
- 2007年
- 目的观察结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠所诱导的细胞免疫应答。方法15只C57BL/6N小鼠随机分为Mtb8.4基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组)、Mtb8.4基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组,基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106CFUBCG免疫1次。ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ和IL-2水平(分别为1493.340±8.128pg/ml、747.489±48.676pg/ml)显著高于Mtb8.4基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少,特异性CTL杀伤活性增强。结论hIL-12表达质粒能够增强Mtb8.4基因疫苗所诱导的细胞免疫应答。
- 李晖李强钟森任红邓存良
- 关键词：MTB8.4白细胞介素12联合免疫
- 含信号肽的Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒的构建及在COS-7细胞中的表达
- 2007年
- [目的]克隆结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4(MS)/hIL12嵌合基因,导入真核表达载体pCI-neo,并在COS-7细胞中进行表达。[方法]首先以pcDNA3.1(+)-含信号肽的Mtb8.4(pMS)为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增出MS-linker基因,与pCI-neo载体进行连接重组,构建成pCI-neo-MS-linker(pMSL)重组质粒,然后以pORF-hIL12质粒为模板,经PCR扩增出hIL-12基因,将hIL-12基因与pMSL质粒进行连接重组,构建成MS/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定;重组嵌合质粒转染COS-7细胞后,用RT-PCR方法鉴定MS/hIL12嵌合基因在转录水平的表达情况。[结果]MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功;转染COS-7细胞后,MS/hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。[结论]MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建及在COS-7细胞中的成功表达,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病MS/hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础。
- 李榕李晖钟森任红
- 关键词：MS嵌合基因
- Ⅰ类整合子在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的分布探讨被引量：6
- 2012年
- 目的了解耐多药产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带情况。方法纸片扩散法(K-B法)测定大肠埃希菌对6种3类抗生素的敏感性并筛选出产ESBLs酶菌株;聚合酶链反应(PCR)检测整合子遗传标记qacE△1sul1。结果 71株大肠埃希菌中QacE△1-sul1共检出阳性菌株55株(74.46%),其中多耐模式检出率最高为88.89%(40株)。不同耐药模式中遗传标记基因的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);产酶菌株在不同耐药模式中检出差异有统计学意义(P<0.05);非产酶菌株中检出差异无统计学意义(P>0.05)。结论耐多药产ESBLs大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带率高。
- 李佩波蔡敏泓黄永茂林雁邹永胜钟利陈枫陈庄向成玉
- 关键词：整合子类Β内酰胺酶类大肠埃希菌耐多药
- 糖尿病大鼠内毒素和氧化应激水平变化对诱发肝纤维化的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察糖尿病大鼠肝纤维化发生情况,探讨内毒素和氧化应激水平在其中的作用。方法 60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型3个月组、6个月组和8个月组。一次性注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型。实验结束后处死大鼠,全自动生化分析仪检测肝功能、放射免疫法检测透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(4C)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ),比色法检测内毒素(LPS)、游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧力。肝组织HE、V-G染色观察病理改变。结果 3月组各检测指标与正常对照组比较没有显著变化,HE染色见肝细胞肿胀。6月组ALT、AST、LPS、MDA、SOD、总抗氧力与正常对照组;ALT、AST、MDA、SOD、总抗氧力与3月组比较差异有显著性。HA出现升高,细胞有脂肪变性。8月组除PCⅢ外各项指标与正常对照组、3月组比较差异有显著性,LPS、MDA、SOD、HA、LN与6月组比较差异有显著性,且内毒素水平与HA、4C显著相关,V-G染色出现纤维化。结论糖尿病有促肝纤维化发生趋势,内毒素和氧化应激代谢异常可能对其产生影响。
- 陈枫唐小平唐利李燕王晓燕陈庄
- 关键词：糖尿病链脲佐菌素内毒素氧化应激
- 含信号肽的结核分枝杆菌8.4/白细胞介素12嵌合基因真核表达质粒的构建、表达及免疫原性研究
- 2006年
- 目的构建和表达含信号肽的结核分枝杆菌8.4(MS)/人白细胞介素12(hIL-12)嵌合基因,并研究嵌合基因疫苗的免疫原性。方法克隆 MS/hIL12嵌合基因,导入真核表达载体 pCI-neo,构建成 MS/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、聚合酶链反应(PCR)及 DNA 序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定;重组嵌合质粒转染 COS-7细胞后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)鉴定 MS/hIL12嵌合基因的表达情况。将 MS/hIL-12嵌合基因疫苗免疫 C57BL/6N 小鼠,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行细胞毒 T 淋巴细胞(CTL)杀伤检测。结果 MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒构建成功;转染 COS-7细胞后,MS/hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。MS/hIL-12嵌合基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)含量分别为(1 521±48)ng/L 和(755±41)ng/L,MS 基因疫苗组分别为(820±50)ng/L 和(297±31)ng/L,BCG 组分别为(1 487±40)ng/L 和(767±50)ng/L,空载体组分别为(121±16)ng/L 和(62±10)ng/L,PBS 组分别为(48±16)ng/L 和(32±17)ng/L,上述结果显示 MS/hIL-12嵌合基因疫苗组 IFN-γ、IL-2分泌量增加,明显高于 MS 基因疫苗组及对照组(P<0.01),与 BCG 组相当(P>0.05);BCG 组免疫小鼠脾细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)的含量为(91±11)ng/L,明显高于其他各组(P<0.01)。效靶比为100∶1、50∶1、10∶1时,MS/hIL12嵌合基因疫苗组的 CTL 活性分别为77.5%、51.2%、30.3%,MS 基因疫苗组分别为56.2%、37.8%、11.5%,BCG 组分别为28.9%、21.4%、9.8%,MS/hIL-12嵌合基因疫苗组的CTL 活性高于 MS 基因疫苗组、BCG 组、空载体组和 PBS 组(P<0.01)。结论 hIL-12与 MS 构建成嵌合基因疫苗后,MS 基因疫苗的免疫原性得到很大提高。
- 李晖李榕钟森任红邓存良史小玲王明勇
- 关键词：分枝杆菌免疫原性
- 耐左氧氟沙星大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药性研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨耐左氧氟沙星(LVX)大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药表型与基因型的相关性。方法用纸片扩散法测定75株大肠埃希菌对LVX和6种氨基糖苷类药物的耐药率,PCR法检测6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果 49株(65.33%)对LVX耐药,耐LVX菌株对庆大霉素、卡那霉素、链霉素、妥布霉素、奈替米星、阿米卡星的耐药率分别为:73.47%、65.31%、61.22%、51.02%、16.33%、14.29%;与非耐LVX菌株比较,庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素耐药率的差异均有统计学意义(P<0.05);多药耐药表型的差异同样具有统计学意义(P<0.05);耐LVX菌株aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、aac(3)-Ⅰ,aac(6′)-Ⅱ的检出率分别为:53.06%、46.94%、14.29%、8.16%、4.08%、0;与非耐LVX菌株比较aac(6′)-Ⅰ检出率的差异有统计学意义(P<0.05)。结论耐LVX菌株多表现为同时对多种氨基糖苷类药物耐药,提示耐LVX大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药与氨基糖苷类修饰酶存在一定相关性,尤以AAC(6′)-Ⅰ为明显。
- 张馨琢黄永茂陈庄钟利陈枫游春芳邓敏
- 关键词：大肠埃希菌氨基糖苷类左氧氟沙星氨基糖苷类修饰酶
- 大肠埃希菌耐多药与产超广谱β-内酰胺酶关系的研究被引量：5
- 2018年
- 目的研究西南医科大学附属医院临床分离的大肠埃希菌耐多药与产超广谱β-内酰胺酶(产ESBLs)的关系,为其治疗提供理论依据。方法采集西南医科大学附属医院2014年7月-2014年11月临床分离的155株大肠埃希菌,采用纸片扩散法进行药敏分析,并以双纸片法确定产ESBLs。结果 155株大肠埃希菌耐药情况依次为AMP 89.68%、AMC 88.39%、SXT 75.48%、CTX 58.06%、GEN 49.03%、CIP 47.10%、LEV33.55%、CAZ 28.39%、ATM 19.35%、FEP 10.97%、FOX 8.39%、AMK 2.58%、CFS 1.29%、IMP 0.00%。产ESBLs率为62.58%,多耐占57.42%(89),双耐占22.58%(35),单耐占12.90%(20),全敏占7.10%(11)。产ESBL菌株对AMP、AMC、CAZ、CTX、FEP、ATM、LEV、CIP、GEN、SXT耐药率高于非产ESBLs菌株,多耐菌株产ESBLs率(78.61%)高于单耐菌株(25.00%)。结论本地区大肠埃希菌耐多药情况突出,多耐菌株产ESBLs率高于单耐菌株。医院感染菌株中产ESBLs及耐药菌株比例高,临床需重点监控。
- 罗瑜黄永茂林雁邹永胜钟利肖科陈枫陈庄向成玉
- 关键词：大肠埃希菌耐多药ESBLS
- 多药耐药产ESBLs大肠埃希菌中转座子分布的研究被引量：4
- 2013年
- 目的了解多药耐药产ESBLs大肠埃希菌中转座子携带情况。方法纸片扩散法(K-B法)测定大肠埃希菌对6种3类抗菌药物的敏感性并筛选出产ESBLs菌株;聚合酶链反应(PCR)检测转座子遗传标记(merA、tn-pA、tnpU)。结果 merA检出15株,总检出率为21.13%,其中多药耐药菌10株,占22.22%,tnpA和tnpU均未检出;merA在不同耐药模式中检出差异有统计学意义(P<0.05);merA在产酶菌株不同耐药模式中检出差异有统计学意义(P<0.05);merA在非产酶菌株中检出差异无统计学意义;merA在产酶和非产酶菌株中检出差异无统计学意义。结论多药耐药产ESBLs大肠埃希菌中转座子遗传标记merA携带率高。
- 林雁李佩波蔡敏泓黄永茂邹永胜钟利陈枫陈庄向成玉
- 关键词：大肠埃希菌多药耐药转座子超广谱Β-内酰胺酶
