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一株家养野猪源猪圆环病毒2型的分离与鉴定被引量：3: 2008年; 应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段,在Dulac细胞中进行分离和培养,扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示,扩增产物与家猪源参考毒株的序列同源性均在98%以上,该病毒与家猪源病毒差异不大。; 王海燕高崧刘秀梵; 关键词：家养野猪猪圆环病毒2型

载体表达的siRNA分子对猪圆环病毒2型复制的抑制作用被引量：8: 2008年; 【目的】寻找一种基于RNA干扰技术的猪圆环病毒2型感染的防控方法。【方法】根据猪圆环病毒2型毒株基因组核苷酸序列,设计了3条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,其中2条针对猪圆环病毒1型和2型复制酶基因(rep),1条针对猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因(cap),将合成的DNA片段退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ ZsGreen载体鼠源U6启动子下游,转化大肠杆菌得到阳性克隆,测序鉴定后分别命名为Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6。用上述质粒转染PCV2感染前、后的Dulac细胞及肌肉注射PCV2感染前、后的BALB/c小鼠,应用实时定量PCR试验评价其对病毒在细胞及小鼠体内复制的抑制作用,免疫组化法检测脾脏中病毒的存在。【结果】感染PCV2前或后转染500ng Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6质粒能有效抑制PCV2在Dulac细胞上的复制,抑制率最高可达99%以上,对10株不同来源的临床分离株在细胞中复制的抑制作用同样明显,且不同毒株间差异不大。动物试验中,肌肉注射10μg上述不同siRNA分子对小鼠体内PCV2的复制有一定的抑制作用,其抑制率在26%至99%之间。【结论】载体表达的siRNA分子可能成为防控猪圆环病毒2型感染的一种新工具。; 王海燕刘文博高崧刘秀梵; 关键词：RNA干扰猪圆环病毒2型

表达PCV2 Cap蛋白重组杆状病毒对小鼠的保护力试验被引量：3: 2008年; PCR扩增猪圆环病毒2型(PCV2)的衣壳蛋白(Capsid)基因,鉴定后克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastBac-Cap,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,经转座作用,蓝白菌落筛选得到含cap基因的重组穿梭载体Bacmid-Cap,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒reBac-Cap,PCR能够扩增出相应大小的片段,间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使reBac-Cap感染的Sf9昆虫细胞出现特异性绿色荧光,表明reBac-Cap在Sf9细胞中成功表达PCV2-Cap蛋白。动物试验表明该重组病毒对小鼠有一定的保护力。; 王海燕郭振光盛瑜陈义平吴艳涛高崧刘秀梵; 关键词：猪圆环病毒2型衣壳蛋白重组杆状病毒保护力

江苏省猪高热病病例主要继发感染病毒的多重PCR检测被引量：28: 2007年; 应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率为21．2％，2006年为73．2％；2005年PRRSV阳性率为38．1％，2006年为67．7％。2006年猪高热病疫情比2005年严重，PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对10个PRRSV分离株ORF5基因和Nsp2基因进行的测序表明，2006年分离株Nsp2基因中有连续87个碱基的缺失。; 叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵; 关键词：猪伪狂犬病病毒猪高热病 ORF5基因 NSP2基因

2005-2006年江苏地区猪高热病病例中主要继发病原的多重PCR检测与分析: 应用建立的两个多重PCR方法,对2005-2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果PRRSV阳性率为51.2%;PCV阳性率为44.1%;CSFV阳性率为10.4%;PPV阳性率为3.904;PR...; 叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵; 关键词：猪细小病毒猪伪狂犬病病毒猪高热病多重PCR ORF5 NSP2; 文献传递

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国家教育部博士点基金(2004111705)