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OPG-HSP70对CIA小鼠模型血清学参数的影响及其与疗效的相关性分析: 2019年; 目的探讨骨保护素(OPG)-热休克蛋白70(HSP70)治疗后胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠血清学参数变化与病情的相关性。方法将44只雄性DBA/1小鼠分为OPG-HSP70治疗组(n=20)、OPG治疗组(n=12)和模型对照组(n=12);采用尾根部皮内免疫牛Ⅱ型胶原(CⅡ)制备CIA模型,发病后隔日腹腔注射OPG或OPGHSP70融合蛋白,模型对照组注射等量PBS溶液。给药4周后处死小鼠,评估关节炎指数,并经Micro-CT后行骨相对灰度值测算,收集血清检测Ca2+、核因子κB受体活化因子配基(RANKL)、CⅡ抗体,并与关节炎指数和骨密度值进行线性回归分析。结果与模型对照组比较,OPG-HSP70治疗组的关节炎指数明显降低(P <0.01),骨密度值明显增加(P <0.05),CⅡ抗体明显下降(P <0.01),但OPG对炎症和骨破坏的改善不明显。线性回归分析显示,血清Ca2+和RANKL水平与骨密度值呈负相关(r=-0.582、-0.588,均P <0.01);而血清CⅡ抗体水平与关节炎指数呈正相关(r=0.892,P <0.01)。与OPG治疗组比较,给药后1、2、3、4周OPG-HSP70治疗组血清抗OPG抗体明显降低(P <0.01)。结论 OPG-HSP70融合蛋白增加了抗炎症作用,降低了免疫原性,对CIA小鼠的保护作用优于OPG。; 夏思思夏思思赵文明; 关键词：骨保护素热休克蛋白70 滑膜炎骨破坏

OPG-HSP65重组蛋白的原核表达及其生物学活性研究被引量：1: 2009年; PCR扩增OPG-HSP65基因,构建原核重组表达载体pET-28a-OPG-HSP65,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白。对重组蛋白进行Western blot检测表明,重组蛋白能与抗His-Tag单克隆抗体及鼠抗人OPG单克隆抗体特异性结合。对重组蛋白进行尿素洗涤纯化,进而透析、复性。经破骨细胞生长抑制实验和抑炎实验表明,重组蛋白能减少破骨细胞生成及减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应。; 张月刘舒马静李慎涛王炜张权庚赵文明; 关键词：骨保护素热休克蛋白65 重组蛋白

人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白在昆虫细胞中的表达和活性分析: 2009年; 目的:利用BaculoDirect杆状病毒表达系统融合表达人OPG功能片段p22-194和分枝杆菌HSP70p111-125基因,并鉴定重组蛋白及其生物学活性。方法:将编码人OPG功能片段和分枝杆菌HSP70功能片段基因克隆至杆状病毒转座载体,将重组转座载体与BaculoDirectTM Linear DNA进行LR重组连接反应,构建出重组杆状病毒DNA,转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒。在Sf9细胞中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western blotting分析,用Ni柱纯化。采用破骨细胞生成抑制试验和抑炎试验鉴定表达产物的生物学活性。结果:重组病毒在感染昆虫细胞后48h开始出现一相对分子质量为28kDa大小的特异条带,感染后72～96h蛋白量达到高峰。破骨细胞生成抑制实验及抑炎试验结果显示,重组蛋白能明显抑制破骨细胞的生长和分化,同时亦具有抑制炎症反应的作用。结论:利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中成功表达OPG-HSP70融合蛋白,该融合蛋白具有抑制破骨细胞生成和抑制炎症反应生物学活性。; 刘舒张权庚张月马静刘振龙赵文明; 关键词：人骨保护素热休克蛋白70 昆虫细胞基因表达

OPG-HSP70融合蛋白对CIA大鼠的保护性作用: 2009年; 目的:研究人骨保护素(OPG)-分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)融合蛋白对类风湿关节炎动物模型——胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠的保护性作用。方法:将OPG-HSP70重组基因菌株诱导表达,收集蛋白并鉴定,大量提取,纯化,复性;实验大鼠分为OPG-HSP70组、OPG组、HSP70组、模型组和正常对照组,CIA大鼠模型制备后分别给予相应处理,观察对大鼠关节病变的影响。结果:与模型组相比,OPG-HSP70组关节炎指数明显降低(P<0.05);关节病理切片显示关节滑膜无明显增生;骨密度值增高(P<0.05)。结论:OPG-HSP70融合蛋白具有减轻CIA大鼠关节病变的作用。; 刘姗余丹曾津津李慎涛王炜刘振龙赵文明; 关键词：骨保护素热休克蛋白融合蛋白

热休克蛋白70肽段抑制胶原诱导关节炎小鼠Th17细胞生成被引量：1: 2012年; 目的:研究HSP70肽段对CIA小鼠Th17细胞的影响,探讨其抑制CIA小鼠炎症损伤的机制。方法:将DBA/1小鼠随机分为HSP70肽段实验组、阴性对照组、结核菌素(PPD)对照组、阳性对照组。除阴性对照组外,其它各组小鼠用牛Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎。通过关节评分和病理改变评价病变程度。取外周淋巴结用流式细胞仪检测Th17细胞的数量,用实时定量PCR检测Th17细胞相关调控因子。结果:注射HSP70肽段的CIA小鼠其Th17细胞数量明显低于阳性对照组和PPD对照组,促进Th17细胞分化发育的相关因子IL-6、IL-23、TGF-β1、RORγt的表达水平低于阳性对照组和PPD对照组(P<0.05)。结论:HSP70肽段可调节Th17细胞分化的调控因子,抑制Th17细胞的分化,进而减轻CIA小鼠的炎症程度。; 郭鸿雁袁慧慧张须龙赵文明; 关键词：TH17细胞

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