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长沙市科技计划项目(K1307134-24): 作品数：15 被引量：42H指数：5; 相关作者：燕海峰王坤蒋隽易康乐朱立军更多>>; 相关机构：湖南农业大学湖南省畜牧兽医研究所湖南湘佳牧业股份有限公司更多>>; 发文基金：国际科技合作与交流专项项目长沙市科技计划项目湖南省科技计划项目更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

稀释液中添加番茄红素对鸡精子保护作用的研究被引量：2: 2015年; 为了研发新的鸡精液稀释液,试验在YHFB鸡精液稀释液(分别为B1液、B2液、B3液、B4液)中添加浓度分别为0,0.1,0.2,0.05 mg/mL抗氧化剂番茄红素,按1∶1的比例对鸡混合鲜精进行稀释,稀释后置于长时间保存的低温条件(5℃左右)下,定期检查精子活力,当小于或等于0.3时停止检查;置于高温恶劣环境(41℃水浴)下,每30 min检查1次精子活力,直到精子全部死亡。结果表明:低温条件下不同时间精子活力B1、B4液,B2、B3液均差异不显著(P>0.05),添加0.1 mg/mL番茄红素的B2液在48小时前精子活力稍大于B3液,48小时后B3液精子活力稍大于B2液;高温条件下不同时间精子活力各组之间无显著差异(P>0.05)。说明在低温条件下鸡精液稀释液中添加0.1 mg/mL番茄红素,能显著延长精子活力,但在41℃的高温条件下对精子的保护作用不明显。; 王晓娟何宇唐炳易康乐张佰忠燕海峰; 关键词：精子稀释液番茄红素

鸡精液稀释液不同渗透压及稀释操作对孵化率的影响被引量：2: 2015年; 为了优化稀释液及研发能在种鸡场推广的鸡精液稀释技术,试验在夏季(30℃左右)采用渗透压分别为344,290,272 m Osm/kg的YHFB稀释液,利用舍温预热稀释液,并按精液与稀释液1∶2的比例进行稀释后输精检测种蛋的孵化率,对稀释技术在种鸡场操作存在的问题进行分析等方法进行研究。结果表明:3个渗透压组以及对照组的受精率分别为0.74,0.77,0.72,0.76,受精蛋健雏率分别为0.91,0.90,0.92,0.95,入孵蛋健雏率分别为0.68,0.69,0.66,0.72,各组差异均不显著(P>0.05)。各试验组母鸡群体较小,种蛋在30℃环境下储存集中孵化时极显著影响孵化率。其他条件相同,稀释技术操作者不同,稀释精液与原精输精,试验组与对照组鸡的受精率分别为0.88,0.91,且差异显著(P<0.05),鸡胚存活率分别为0.80,0.87,且差异极显著(P<0.01)。YHFB精液稀释液适应的渗透压范围较宽,对不同品种有很好的适应性,夏季高温采用舍温预热稀释液,实现等温稀释能简化鸡精液稀释技术。; 张晓华张翠永孙鏖易康乐彭进文燕海峰; 关键词：精液稀释液渗透压孵化率

鸡精液稀释液储存时间与稀释比例对孵化率影响的研究被引量：7: 2015年; 为解决鸡精液稀释液必须现配现用且受精率不稳定等问题,试验采用前期改进的YHFB鸡精液稀释液以及配套稀释技术,选取精子活力与精液密度中上等的石门土公鸡,分精液稀释1∶1、1∶2、1∶1(稀释液保存2个月)与原精液4组,进行等温及时稀释,稀释精液与原精液等体积对石门土母鸡进行人工输精,输精后24 h收集种蛋,检测孵化指标。结果表明:13个稀释组与原精液组的受精率没有显著差异(P>0.05),1∶2组最高;21∶2组的受精蛋健雏率与入孵蛋健雏率均显著高于1∶1组(P<0.05),也高于原精液组,但差异不显著(P>0.05);31∶1(稀释液保存2个月)组,与1∶1组、原精组的孵化效果无显著差异(P>0.05)。因此,前期研制的稀释液配方、保存方法与稀释技术能解决鸡精液稀释液必须现配现用等问题。; 周小枫黄治忠张晓华易康乐王坤肖定福燕海峰; 关键词：精液稀释液孵化率

鸡囊胚细胞DMSO细管冷冻保存技术研究: 2015年; 旨在研究高效鸡囊胚细胞(Blastodermal cells,BCs)冷冻保存技术,为利用BCs保存禽类雌性遗传资源以及胚胎干细胞研究奠定基础。采用解冻后二乙酰荧光素(Fluorescein diacetate,FDA)染色以及培养24h后细胞贴壁率双重检测BCs活力方法,比较二甲基亚砜(DMSO)不同浓度、不同冷冻与解冻速率等对BCs的冷冻保存效果。结果表明:(1)DMSO不同浓度,20%组解冻后活力最高(0.58),与15%组差异不显著(P>0.05),但与5%、10%和25%组差异极显著(P<0.01);细胞复苏后贴壁率,20%组最高(30.5%),与15%组差异不显著(P>0.05),与25%组差异显著(P<0.05),与5%和10%组差异极显著(P<0.01)。(2)冷冻速率,使用三步法冷冻,以-1℃·min-1的速率降温至-7℃,保持10min,继续降温分别至-15、-35、-55、-75℃后,投入液氮中保存,-75℃组解冻后活力最高(0.53),但与-35℃、-55℃组差异不显著(P>0.05);贴壁率,各组间差异极显著(P<0.01),其中-35℃组最高(36.6%)。(3)37℃水浴解冻,10s、1min、2min、3min解冻后,各组间活力差异不显著(P>0.05),其中10s组最高(0.60),解冻后贴壁率,37℃水浴1min组结果最好(43.9%),与水浴2min组差异不显著(P>0.05),但与水浴10s组差异显著(P<0.05),与水浴3min组差异极显著(P<0.01)。50℃水浴5s、20s、40s、1min解冻,5s组活力最高(0.70),与20s组差异显著(P<0.05),与40s、1min组差异极显著(P<0.01),解冻后贴壁率,各组间差异均极显著(P<0.01),其中50℃水浴5s组最高(36.9%),50℃水浴1min组最低(5.6%)。综上表明,鸡BCs使用DMSO浓度为20%的冷冻保护剂进行细管冷冻,以-1℃·min-1的速率降温至-7℃保持10min,继续以此速率降温至-35℃后,投入液氮保存,37℃水浴1~2min解冻,BCs通过FDA染色与体外培养贴壁率双重检测均可获得较好效果。; 王坤张佰忠易康乐朱立军蒋隽燕海峰; 关键词：囊胚细胞 DMSO 冷冻保存

鸡BCs原代培养贴壁性影响因素分析被引量：4: 2015年; 试验从鸡第X期胚胎中分离囊胚,使用含10%FBS、青霉素和链霉素的高糖DMEM培养基,对鸡X期BCs进行无饲养层培养。分别在6h、12h、24h对细胞贴壁性进行评价,探究分离方法、离散程度、培养细胞密度、离心损伤对细胞培养的影响。结果表明:滤纸环法在分离胚胎上效果最好;细胞离散程度上,吹打20下效果最好,与吹打30下差异不显著(P>0.05),二者与吹打40下差异均显著(P<0.05);接种密度上,1×103个/mL和5×103个/mL两组差异不显著(P>0.05),这两组与其它组,以及其它组之间差异均显著(P<0.05),密度为1×105个/mL时效果最好,5×104个/mL次之,但密度为5×104个/mL时更方便观察;离心处理上,都离心5 min的条件下,5 590×g和1 398×g组差异不显著(P>0.05),但其与224×g处理组差异显著(P<0.05),其中5 590×g组效果最佳。因此,滤纸环法分离胚胎,吹打20下离散细胞,使用5 590×g离心5min,稀释成5×104个/mL的密度,接种到96孔板培养,可以获得较好的结果。; 王坤张佰忠易康乐蒋隽王庆桥李昊帮燕海峰; 关键词：原代培养

鸡精子密度检测方法研究被引量：5: 2014年; 为研究一种相对准确且简单的鸡精子密度的检测方法,对黑丝羽乌骨鸡及其杂交公鸡的精液,分别运用计数板法、吸光度(精子密度仪)法和视野精子数法进行精子密度的测定,分析计数板法测定的密度与吸光度、视野精子数间的相关性。结果表明,计数板法测定的密度与吸光度之间的回归关系为幂函数回归,回归关系极显著(P<0.01);计数板法测定的密度与视野精子数之间的回归关系为直线回归,回归关系极显著(P<0.01)。因此,吸光度法和视野精子数法均能准确地测定鸡精子密度,比计数板法简单。吸光度法利用建立的标准曲线能够快速、精确测定精子密度,但需要专用的分光光度计或者精子密度仪;视野法采用便携式带液晶屏的温控显微镜,能使计数更直观简便,能相对快速准确地测定精液密度,同时还能与精子活力评价相结合,具有很好的推广应用价值。; 王坤蒋隽朱立军易康乐王庆桥燕海峰; 关键词：精子密度

鸡精液稀释技术推广应用的几个关键因素分析被引量：5: 2015年; 为建立简单、稳定的鸡精液稀释技术,本试验在对鸡精液进行不同比例稀释后,对种公鸡精液镜检、混合精液温度检测、不同稀释比例的孵化率以及精液稀释技术经济效益定量计算方法等因素进行分析。结果表明:200只外观正常公鸡,镜检合格率为90%,随后混合精液批次不合格率为1.0%;原精稀释后活力极显著升高,30~40 min输精完成后活力极显著下降(P<0.01),但不影响孵化率;舍温为22~33℃时,5 m L左右精液温度在(32.85±2.0)^(35.30±0.1)℃之间变化;精液稀释1∶1组、1∶2组以及原精组等量输精,受精率、入孵蛋健雏率差异均不显著(P>0.05),通过建立的定量计算方法表明精液稀释后经济效益显著。; 张晓华孙鏖黄治忠朱立军浣成郑泽敦燕海峰; 关键词：鸡精液镜检

鸡精液稀释液配制及效果分析: 引言/目的目前,鸡稀释精液技术领域主要存在以下问题:一般文献很少报道稀释液的保存方式,少量报道的保存方式基本都是添加抗生素,在冰箱冷藏,保质期短,有的甚至需要现配现用;稀释液配方繁多,报道效果不一致,很少进行孵化率检测。...; 张晓华孙鏖易康乐朱立军桌新雄燕海峰

种鸡场公鸡精子活力与密度大批量检测方法研究被引量：12: 2015年; 为建立一套种鸡场公鸡精子密度与活力大批量检测方法,采用新型视频恒温显微镜对不同种鸡场、周龄的公鸡原精进行外观与显微镜检测,并比较冷藏、不同稀释液稀释等对精子活力的影响。结果表明:1对于鸡精液,在显微镜下一次点样同时检测活力与密度的方法可行;2原精直接检测、冷藏后检测以及稀释后检测,活力存在显著差异;3数量较大的种公鸡筛选最佳方案是精液边采集边冷藏,收集到大量样品(如300份),集中稀释(可以继续采集样本),再冷藏并集中进行镜检。根据检测结果以及选留比例,制定灵活的选留公鸡精子活力等级。; 汪爱军燕海峰; 关键词：种鸡场精子

鸡精液稀释液配制及效果分析: ＜正＞引言/目的目前,鸡稀释精液技术领域主要存在以下问题:一般文献很少报道稀释液的保存方式,少量报道的保存方式基本都是添加抗生素,在冰箱冷藏,保质期短,有的甚至需要现配现用;稀释液配方繁多,报道效果不一致,很少进行孵化率...; 张晓华孙鏖易康乐朱立军桌新雄燕海峰

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