国家自然科学基金(31170074)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：杨光高亚萍刘成华刘方杰沈倍奋更多>>
- 相关机构：军事医学科学院广西医科大学中南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 金黄色葡萄球菌SarS蛋白参与压力应激的初步研究
- 2013年
- 目的通过构建金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称金葡菌)中SarS蛋白突变株,研究SarS蛋白在金葡菌中的调控功能。方法利用同源重组的方法构建金葡菌8325-4来源的sarS插入突变菌株,通过MDBK细胞模型检测突变株外毒素水平,以及其在高盐、高温等条件下的生长情况。结果成功构建了金葡菌8325-4来源的sarS插入突变菌株。进一步的表型检测结果显示,与野生型菌株相比,sarS突变株在高温、高渗、重金属等应激条件下的生长速度明显下降,但是细菌外毒素对MDBK细胞的杀伤作用没有明显的改变。结论 SarS蛋白在金葡菌抵抗外界压力应激中发挥着重要的功能。
- 谭小蓉刘玉牟春花高亚萍董洁杨光
- 关键词：SARS
- 抗铜绿假单胞菌PcrV蛋白单克隆抗体的筛选和功能验证被引量：6
- 2018年
- 目的:获得能应用于治疗铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)感染的抗Pcr V蛋白全人源单克隆抗体。方法:以铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板,PCR扩增Pcr V基因并构建重组表达载体p ET-28a-Pcr V,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,并通过镍离子螯合树脂亲和纯化Pcr V蛋白。利用噬菌体抗体库筛选Pcr V结合的噬菌体克隆并进行序列测定,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,PCR扩增该抗体的重链可变区基因和轻链可变区基因并构建重组表达载体转染至293E细胞,收取培养细胞上清,并利用Protein A树脂亲和纯化抗体。利用ELISA实验检测抗体亲和力,并通过小鼠铜绿假单胞菌感染肺炎模型验证抗体活性。结果:获得重组蛋白Pcr V,通过噬菌体展示技术筛选并制备了一株全人源抗Pcr V单克隆抗体YG5。ELISA实验结果表明YG5抗体具有较高的亲和力(EC50=61 ng/ml),进一步的实验结果表明,YG5能有效抵抗铜绿假单胞菌感染,降低小鼠的死亡率。结论:靶向铜绿假单胞菌Pcr V蛋白的全人源单克隆抗体YG5能够有效地抑制铜绿假单胞菌致病性,降低其对机体感染,有可能成为抗铜绿假单胞菌感染的治疗性抗体。
- 管章春刘方杰刘成华高亚萍沈倍奋杨光
- 关键词：铜绿假单胞菌单克隆抗体
