广东省科技计划工业攻关项目(2007B031515010)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：陈世良苏健郭爱林陈志红黄迎更多>>
- 相关机构：广东省人民医院广东省医学科学院中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省中医药管理局基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EGFR／HER2基因敲减对SPC-A-1细胞株细胞生物学特性及相关信号通路的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨EGFR/HER2基因沉默对非小细胞肺癌细胞株EGFR酪氨酸激酶信号转导通路的交互影响及其与细胞增殖、凋亡和周期改变的关系。方法:设计并合成EGFR、HER2及EGFR/HER2共干扰序列,构建含干扰序列的载体,进行瞬时转染;应用实时荧光定量、蛋白印迹法检测基因沉默效果;用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞仪检测基因沉默后生物学特性改变;蛋白印迹法检测EGFR下游信号通路蛋白Akt、p-Akt、p-Erk1/2、p-p38表达水平变化;采用SPSS13.0软件分析结果。结果:在SPC-A-1细胞系中,EGFR干扰组、HER2干扰组、EGFR联合HER2干扰组和EGFR-HER2共干扰组体外细胞增殖率均有下降趋势;除EGFR干扰外,其余各组均可诱发凋亡;各组的细胞周期G1期和S期细胞比例有显著改变;基因沉默效果检测显示EGFR和HER2基因蛋白水平被下调。下游信号通路蛋白检测示EGFR下游信号通路蛋白Akt、p-Akt、p-Erk1/2、p-p38表达水平和细胞增殖、凋亡以及细胞周期改变之间未发现明显相关规律。结论:单纯EGFR干扰SPC-A-1细胞不能诱发显著凋亡,HER2和EGFR/HER2基因共沉默后诱发的人肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡比阴性对照显著增加。EGFR/HER2基因沉默后诱发的细胞增殖、凋亡和细胞周期改变与EGFR家族下游信号通路蛋白之间未发现显著相关关系。
- 苏健钟文昭郭爱林李文瑜陈志红安社娟陈世良谢至
- 关键词：RNA干扰受体表皮生长因子
- RNA干扰技术抑制人肺腺癌A549细胞株EGFR基因表达被引量：3
- 2008年
- 目的 建立质粒表达载体转录介导的RNAi技术，为开发阻断表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）信号通路的新途径及其下游信号通路研究奠定基础。方法化学合成siRNA-EGFR序列，构建并鉴定重组载体pSciencer2．0U6-shRNA-EGFR，转染A549人肺腺癌细胞株，免疫印迹和RT-PCR检测沉默效果，用四甲基偶氮唑盐比色法、DAPI染色法、AnnexinV／PI双标记法观察基因沉默后细胞生物学特性改变。结果shRNA-EGFR使EGFR表达明显下调，转染细胞后，显著抑制细胞增殖，诱发凋亡。DAPI染色示细胞核着色增强，胞核缩小，核膜皱缩，染色质凝聚、边缘化、破碎；AnnexinV／PI示凋亡早期细胞比例增高；细胞周期分析见shRNA—EGFR各组G0～G1期细胞比例增加，S期比例减少。结论化学合成法和体内转录质粒载体法介导的RNAi可序列特异性下调A549细胞株EGFR基因转录和表达，抑制细胞增殖和诱发凋亡，部分逆转NSCLC细胞的恶性表型，有望成为NSCLC基因治疗和功能研究的工具。
- 钟文昭苏健陈志红黄迎谢至陈世良郭爱林
- 关键词：非小细胞肺癌RNA干扰表皮生长因子受体
- 应用基因扫描方法快速检测EGFR基因19外显子缺失突变被引量：1
- 2010年
- 目的:应用基因扫描法检测人表皮生长因子受体(EGFR)基因19外显子缺失突变。方法:(1)将EGFR基因19外显子缺失(del E746-A750)型及野生型基因分别克隆到T载体,并将含突变型基因及含野生型基因的载体按1:1、1:5、1:10、1:50、1:100、1:300的比例进行混合,用基因扫描法检测19外显子的缺失,以确定其灵敏度。(2)基因扫描法检测225例非小细胞肺癌患者的手术组织或穿刺标本;荧光标记EGFR基因19外显子的上游引物,PCR扩增目的片段,3100A测序仪进行基因扫描,Gene Scan Genotyper 3.5软件分析结果。同时用直接测序法检测EGFR19外显子的缺失突变。结果:(1)基因扫描法可测出1:100混合液中的突变型,灵敏度较高。(2)225例肺癌标本,可检测出27例(12.0%)缺失;直接测序法则检出25例(11.5%)缺失突变。结论:基因扫描法检测EGFR基因19外显子的缺失,方法简便,成本低廉,敏感度高,可查出1%的突变。
- 黄迎苏健陈世良林嘉颖陈志红张绪超唐红艳陈剑光谢至郭爱林
- 关键词：EGFR基因扫描基因突变
- 突变体富集法检测表皮生长因子受体基因19外显子的缺失突变被引量：3
- 2010年
- 目的:建立突变体富集法检测非小细胞肺癌中表皮生长因子受体(EGFR)基因19外显子的缺失突变,并比较突变体富集法与直接法的检出率。方法:构建EGFR野生型和突变型的载体,按不同的比例配成混合液,分别用突变体富集法和直接测序法检测混合液中EGFR19外显子的缺失突变,确定两种方法的灵敏度。收集198例非小细胞肺癌住院患者的手术切除组织,分别采用两种方法对EGFR基因19外显子进行基因分析。结果:直接测序法可检测出1∶10突变质粒和野生型质粒混合液中的突变型,突变体富集法可达1∶100。198例标本中,直接测序法检出杂合性缺失23例,突变率为11.6%,突变体富集法检测出杂合性缺失41例,突变率为20.7%。EGFR19缺失突变多见于女性,病理类型多为肺腺癌和腺鳞癌。结论:突变体富集法检测EGFR19外显子缺失突变敏感性高,可提高样本EGFR19缺失突变的检出率。
- 苏健郭爱林黄迎陈世良张绪超陈志红钟文昭唐红艳
- 关键词：表皮生长因子受体
