江西省卫生厅重大招标项目(200307)
- 作品数：6 被引量：22H指数：2
- 相关作者：巫国辉李小林文辉才袁铿赵锋更多>>
- 相关机构：江西省人民医院江西省医学科学研究所南方医科大学更多>>
- 发文基金：江西省卫生厅重大招标项目江西省科技支撑计划项目江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 瘦素对脂肪细胞的直接调节作用被引量：17
- 2007年
- 目的:观察瘦素对人脂肪细胞分解代谢及脂肪蓄积的直接影响,探讨脂肪细胞的自分泌调节作用。方法:取正常成人皮下脂肪组织,常规提取和培养前脂肪细胞,待细胞融合后诱导分化为成熟脂肪细胞并随机分为四组:正常对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组,分别培养于含瘦素浓度为0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml的培养液a中。培养4h后收集培养液检测游离脂肪酸和甘油浓度,取脂肪细胞经油红O染色后图像分析计算脂肪颗粒的积分光密度。结果:与对照组相比,低浓度组培养液中游离脂肪酸和甘油浓度分别增加87%(P<0.01)和5%(P<0.01),脂肪颗粒积分光密度减少12%(P<0.01);中浓度组培养液中游离脂肪酸和甘油浓度分别增加181%(P<0.01)和8%(P<0.01),脂肪颗粒光密度减少21%(P<0.01);高浓度组培养液中游离脂肪酸和甘油的浓度分别增加312%(P<0.01)和17%(P<0.01),脂肪颗粒的积分光密度减少35%(P<0.01)。游离脂肪酸和甘油浓度与瘦素浓度呈正相关,脂肪颗粒积分光密度与瘦素浓度呈负相关。结论:瘦素瞬时作用脂肪细胞,可促进脂肪分解代谢、减少脂肪蓄积;且随着瘦素浓度增加,作用更强,呈剂量依赖性。瘦素对脂肪细胞存在自分泌调节作用,可能在肥胖发病机制中起重要作用。
- 巫国辉赵锋袁铿李小林
- 关键词：瘦素脂肪细胞自分泌
- 瘦素自分泌调节及瘦素抵抗被引量：1
- 2008年
- 肥胖是整形美容外科的常见病，也是体形塑造的重要内容，严重危害身心健康。肥胖机理不明确，极大地制约了临床防治。瘦素的发现为肥胖发病机制及防治的研究开辟了崭新领域，瘦素的自分泌调节及瘦素抵抗在肥胖发病中可能起重要作用，本文就此作一综述。
- 巫国辉李小林
- 关键词：瘦素肥胖自分泌
- 高浓度瘦素自分泌诱导脂肪细胞瘦素抵抗的研究被引量：2
- 2007年
- 目的:观察高浓度瘦素对人脂肪细胞分解代谢及脂肪蓄积的直接影响,探讨瘦素自分泌调节在肥胖发生中的作用。方法:取正常成人皮下脂肪组织,常规提取和培养前脂肪细胞,待细胞融合后诱导分化为脂肪细胞后分为二组:低浓度组、高浓度组;分别培养于瘦素终浓度为100ng/ml、1000ng/ml的培养液a中。于培养48h、72h收集培养液检测游离脂肪酸和甘油的浓度,取脂肪细胞行油红O染色并图像分析计算脂肪细胞中脂肪颗粒的积分光密度。结果:与低浓度组相比,瘦素作用48h、72h后,高浓度组培养液中游离脂肪酸浓度均下降[(0.16711±0.011900)mmol/L VS(0.20589±0.008738)mmol/L,(0.17544±0.013920)mmol/L VS(0.23567±0.026220)mmol/L,甘油含量均减少(28.1733±0.91377)μmol/L VS(30.2456±0.30084)μmol/L,(28.9367±0.79530)μmol/L VS(31.8567±0.79024)μmol/L],而脂肪颗粒积分光密度则升高(461136.89±12049.947 VS418570.33±5668.129,441566.56±5921.602 VS 390133.67±7001.304)。结论:高浓度瘦素长时程作用脂肪细胞,可延缓脂肪分解代谢,增加脂肪蓄积。高浓度瘦素经自分泌诱导脂肪细胞产生瘦素抵抗,可能对肥胖发生有重要影响。
- 李小林赵锋巫国辉袁铿
- 关键词：瘦素抵抗脂肪细胞自分泌
- 国人瘦素基因原核重组表达载体的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建并鉴定瘦素基因原核重组表达载体。方法以RT-PCR法自人脂肪组织制备目的基因,应用DNA重组技术,克隆至pMD18T载体与pGEX-4T-1原核表达载体,转化大肠杆菌DH5α,EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切及测序鉴定。结果扩增得到520bp目的基因并构建原核重组表达载体pGEX-4T-1-leptin。双酶切电泳见520bp目的条带,测序结果与GenBank收录序列一致。结论成功构建原核表达载体pGEX-4T-1-leptin,为leptin功能研究及进一步的临床应用提供了条件。
- 文辉才柳大烈巫国辉单磊
- 关键词：瘦素基因逆转录-聚合酶链反应克隆
- 基于人脂肪组织获取基因构建pET28a-leptin(瘦素)重组子被引量：1
- 2009年
- 背景:新近的一些研究认为,采用体外重组瘦素替代疗法对遗传性肥胖、难愈性创面和内源性瘦素缺乏应是行之有效的方法。目的:取人脂肪组织获取瘦素基因,构建pET28a-leptin重组子。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2004-06/2007-12在江西省医学科学研究所抗肿瘤室完成。材料:取自22岁汉族女性行重睑手术时皮下脂肪组织,冻存于液氮中备用,供者知情同意。方法:取人脂肪组织,反转录-聚合酶链反应得到瘦素基因后,通过DNA重组技术克隆至pMD18T载体与pET28a原核表达载体,EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切及测序鉴定。主要观察指标:①cDNA扩增结果。②重组质粒鉴定。③DNA测序结果。结果:扩增得到520bp目的基因;所构建重组瘦素原核表达载体pET28a-leptin经双酶切电泳见520bp目的条带,DNA测序与相应基因序列同源性达100%。结论:通过DNA重组至pET28a原核表达载体,经EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切及测序鉴定成功构建pET28a-leptin重组子。
- 文辉才柳大烈巫国辉单磊
- 关键词：瘦素脂肪
- 构建重组人pET-32a-瘦素高效的表达载体被引量：3
- 2012年
- 背景:瘦素的功能是作为脂肪细胞体脂量的信号来认识的,作为体内的能量平衡信号反馈到下丘脑,与其中各部位神经元的受体结合后参与调节进食、饮水、能量代谢。目的:构建原核重组表达载体pET-32a-瘦素并检测其在大肠杆菌BL21中的高效表达。方法:取人脂肪组织,RT-PCR法制备瘦素目的基因,采用DNA重组技术将其克隆至pMD18T与pET-32a原核表达载体,双酶切及测序鉴定,转化大肠杆菌BL21株诱导其表达,SDS-PAGE电泳分离鉴定,表达产物变性复性后,间接酶联免疫吸附法检测抗原反应原性。结果与结论:实验成功扩增出520bp的瘦素目的基因并构建了原核重组表达载体pET-32a-瘦素;测序结果与GenBank收录序列相一致;目的蛋白pET-32a-瘦素呈极高效表达,占总蛋白的50%以上;变性复性后抗原反应原性较复性前明显提高(P<0.01)。结果证实,实验成功构建原核重组高效表达的载体pET-32a-瘦素,并提高其抗原反应原性。
- 谢琳巫国辉李小林文辉才
- 关键词：瘦素复性克隆原核表达RT-PCR酶联免疫吸附
