广东省科技计划工业攻关项目(2008B020600003) 作品数:3 被引量:5 H指数:1 相关作者: 琚春梅 孙磊磊 周慧英 程艺 梁梓森 更多>> 相关机构: 华南农业大学 中国兽医药品监察所 更多>> 发文基金: 广东省科技计划工业攻关项目 国家自然科学基金 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
伪狂犬病毒EP0基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究 被引量:5 2012年 为了研究EP0蛋白在伪狂犬病毒粒子中的定位及其功能,试验利用PCR从伪狂犬病毒基因组中扩增PRV EP0基因的编码区,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0。经测序鉴定正确后,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因与经同样双酶切处理的pET-32a(+)进行连接,构建重组质粒pET-EP0。将pET-EP0转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白的表达情况及反应原性。结果表明,成功扩增得到EP0基因编码区序列,大小为1227bp;重组表达质粒pET-EP0经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约为75ku,主要以包涵体形式存在,且能与伪狂犬病毒阳性血清反应。 孙磊磊 程艺 梁梓森 周慧英 琚春梅关键词:伪狂犬病毒 克隆 伪狂犬病病毒立即早期180基因的克隆及序列分析 被引量:1 2014年 为了研究伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)立即早期180基因(immediate early 180,IE180)及其功能,试验采用设计的特异性引物通过PCR法对IE180基因进行扩增,并成功构建了IE180克隆载体,经序列测定后,用DNAStar软件对该序列和已发表的7个PRV参考株的IE180基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比对分析。结果表明,HB-98株IE180基因编码区大小为4425 bp,编码1474个氨基酸,与GenBank中登录的参考株的IE180基因核苷酸同源性为98.4%~99.1%,氨基酸同源性为97.8%~98.4%。系统进化树分析结果表明,该毒株与毒株TNL(登录号:AF352564.2)的亲缘关系较近。 程艺 王雨 吉艺宽 孙磊磊 周慧英 琚春梅关键词:伪狂犬病病毒 克隆 乙型脑炎病毒减毒SA14-14-2-B3株基因组全序列分析 2010年 为进一步了解乙型脑炎病毒(JEV)减毒疫苗株基因组变异和分子遗传特性,本研究根据已发表的JEV基因组序列,设计合成了8对引物,应用RT-PCR对SA14-14-2-B3株基因组进行了克隆和序列测定,获得了该株病毒的全基因组序列(10977nt)并推导出其编码的氨基酸序列(3432aa)。序列分析表明:SA14-14-2-B3株与疫苗株SA14-14-2和SA(A)及野毒株SA14的核苷酸和氨基酸相似性较高,分别为99.8%、99.9%、99.4%和99.7%、99.8%、99.1%,与猪源分离株HEN0701和KV1899的核苷酸与氨基酸相似性较低,分别为88.5%、88.5%和97.6%、96.6%,比较显示在SA14-14-2-B3株基因组第10700nt处有一碱基"G"的插入。以全基因组为基础,对SA14-14-2-B3株进行遗传进化关系分析,结果表明:SA14-14-2-B3株与SA14源病毒株SA14、SA14-14-2、SA(A)、SA(V)及分离株Beijing-1、p3、WHe和HW的遗传关系较近,与XJP613株和HEN0701株的遗传关系较远。以E基因为基础,对SA14-14-2-B3株进行遗传进化关系分析,结果表明SA14-14-2-B3株属于JEV基因Ⅲ型。 张学涛 赵明秋 琚春梅 赵启祖 康艳梅 沈海燕 陈金顶关键词:乙型脑炎病毒 基因组