国家自然科学基金(39600129)
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
- 相关作者：周霞秋廖丹谢青陈诗书钱书兵更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠的治疗作用及移植细胞生物学特性的研究被引量：12
- 2000年
- 探讨同种异体肝细胞经腹腔、脾脏移植对D 氨基半乳糖 (D gal)诱导的急性肝衰竭大鼠的治疗作用及移植细胞的生物学特性 ;研究基因修饰肝细胞经脾脏移植后的定位及表达。方法 采用D gal诱导大鼠肝衰竭。在D gal诱导后 4 8h ,Ⅰ组 :经腹腔移植 4× 10 7同种异体肝细胞 ;Ⅱ组 :经腹腔注射生理盐水 2ml;Ⅲ组 :经脾脏移植 2× 10 7同种异体肝细胞 ,同时肌注CsA 10mg/kg ;Ⅳ组 :经脾脏注射生理盐水 1ml,同时肌注CsA 10mg/kg ,观察大鼠的存活率、肝脏功能、肝脏病理变化和移植细胞的组织学及G6P活性变化 ;Ⅴ组 :经脾脏移植双顺反子逆转录病毒修饰的大鼠原代肝细胞 ,同时肌注CsA 10mg/kg ,经PCR扩增及X gal染色方法追踪细胞的定位及基因表达。 结果 Ⅰ组大鼠存活率显著高于Ⅱ组 ( 71.4 %对 2 6.7% ,P <0 .0 5) ,肝脏功能及肝脏病理有部分改善。腹腔内移植肝细胞可短暂存活并具有G6P活性。Ⅲ组大鼠存活率与Ⅳ组无差别 ( 30 %对 30 % ,P >0 .0 5) ,肝功能、肝脏病理无明显改善。脾内移植肝细胞可短暂存活并具有G6P活性。Ⅴ组经脾移植基因修饰肝细胞后 ,可在脾内检测到 β gal基因表达并扩增出NeoR基因。 结论 经腹腔移植同种异体肝细胞可改善D gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率 ,部分改善肝功能及肝脏病理 。
- 廖丹谢青周霞秋臧国庆钱书兵陈诗书
- 关键词：肝细胞移植急性肝功能衰竭逆转录病毒载体
- 生长因子对大鼠肝细胞增殖和酶活性表达的影响被引量：2
- 2000年
- 目的研究表皮生长因子 (EGF)、肝细胞生长因子 (HGF)、EGF联合HGF对大鼠原代培养肝细胞增殖和功能的影响 ,为肝细胞移植建立细胞库、提高逆转录病毒载体感染肝细胞的效率寻找适当的培养条件。 方法分离、培养肝细胞 ,采用3 H -TdR掺入试验测定肝细胞内DNA合成 ,应用细胞化学方法观察培养的肝细胞内葡萄糖 -6 -磷酸酶活性的表达。 结果培养肝细胞受EGF(1 0ng/ml)、HGF(5ng/ml)作用后 ,肝细胞内DNA合成分别增加了 5 9倍 (P <0 .0 1 )和 1 6倍 (P <0 .0 1 )。EGF和HGF联合应用不表现出明显的协同作用。培养的肝细胞可合成葡萄糖 - 6 -磷酸酶 ,具有肝细胞特异性功能。 结论提示EGF和HGF在体外可刺激肝细胞增殖并维持肝细胞功能 ,为肝细胞移植、肝病基因治疗提供了一个完善的肝细胞培养系统。
- 谢青廖丹彭星亮周霞秋
- 关键词：细胞增殖酶活性原代培养大鼠肝细胞
- 肝细胞移植临床前研究:大鼠肝细胞分离、培养和逆转录病毒转导被引量：6
- 1999年
- 目的建立完善的肝细胞培养系统，研究逆转录病毒载体转移并表达于大鼠原代肝细胞。方法采用表皮生长因子（ＥＧＦ）刺激大鼠原代肝细胞增殖，以表达β－半乳糖苷酶的双顺反子逆转录病毒载体（ｐＧＣＥＮ／β－ｇａｌ）感染肝细胞。Ｘ－ｇａｌ原位染色方法检测肝细胞内ＬａｃＺ的表达，采用ＰＣＲ方法扩增ＮｅｏＲ基因，从ＤＮＡ水平证实逆转录病毒载体整合入肝细胞。结果ＥＧＦ在体外可刺激肝细胞增殖并维持肝细胞功能，肝细胞表达β－半乳糖苷酶基因，肝细胞中可扩增出ＮｅｏＲ基因片断。结论双顺反子逆转录病毒载体可有效介导β－ｇａｌ和ＮｅｏＲ基因表达于大鼠肝细胞，提示可用于标记原代大鼠肝细胞，有利于研究肝细胞移植后移植之肝细胞在体内的寿命、分布及功能。
- 谢青廖丹周霞秋陈诗书钱书兵
- 关键词：逆转录病毒载体肝细胞移植
- 逆转录病毒载体介导β-gal基因在原代大鼠肝细胞的表达
- 2000年
- 谢青廖丹周霞秋钱书兵陈诗书李定国
- 关键词：逆转录病毒载体基因治疗肝细胞表达
