浙江省教育厅科研计划项目(20070914)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：邓辉曹金芳李伟宏王惠宁潘乙怀更多>>
- 相关机构：温州医学院附属口腔医院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划温州市科技局资助项目温州市科技局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 核心结合因子α1重组慢病毒感染牙周膜成纤维细胞骨向分化的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的观察含人核心结合因子α1(Core binding factor α1,CBFα1)基因的重组慢病毒感染对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)骨向分化的影响。方法将PDLFs分为3组:A组为未感染任何病毒的细胞组;B组为加阴性对照病毒感染的细胞组;C组为加CBFα1重组慢病毒感染的细胞组。应用免疫细胞化学的方法检测目的基因CBFα1在PDLFs中的表达,观察碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和矿化结节形成,评价各组细胞骨向分化的情况。结果免疫细胞化学检测证实了CBFα1在PDLFs中的有效表达。ALP活性检测和矿化结节染色均证实C组细胞骨向分化能力明显高于对照组。结论携带CBFα1基因的重组慢病毒可有效感染PDLFs,并促进其骨向分化,感染的CBFα1得到了有效表达。
- 曹金芳王惠宁潘乙怀李伟宏邓辉
- 关键词：核心结合因子Α1牙周膜成纤维细胞慢病毒
- 核心结合因子α1过表达慢病毒载体的构建及其在人牙周膜成纤维细胞中的表达和意义
- 2012年
- 目的 构建含人核心结合因子α1（CBFα1）基因的过表达慢病毒载体,并观察在重组慢病毒感染的人牙周膜成纤维细胞（PDLFs）中CBFα1基因的表达情况.方法 采用PCR 技术体外扩增人CBFα1,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1,并进行酶切及测序鉴定.利用脂质体转染法将pGC-FU-hCBFα1、pHelper1.0和pHelper2.0的3种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒.将PDLFs分为未感染组（未感染任何病毒）、阴性对照病毒感染组（加阴性对照病毒感染）、CBFα1重组慢病毒感染组（加CBFα1重组慢病毒感染）,应用免疫细胞化学方法检测目的 基因CBFα1在PDLFs中的表达.结果 重组质粒经测序证实,插入片段与人CBFα1基因序列完全一致.包装慢病毒后检测病毒滴度为2.00×109 TU/ml.免疫细胞化学检测证实了CBFα1在PDLFs中的有效表达.结论 成功构建了携带hCBFα1基因的重组慢病毒,并能有效感染PDLFs,为进一步研究其在牙周组织再生中的生物学功能奠定了基础.
- 曹金芳邓辉金向青
- 关键词：核心结合因子Α1慢病毒载体转染
- 核心结合因子α1过表达慢病毒载体的构建及鉴定
- 2010年
- 目的构建含人CBFα1/RUNX2基因的过表达慢病毒载体。方法采用PCR技术体外扩增人CBFα1/RUNX2,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1/RUNX2,并进行酶切及测序鉴定。鉴定正确的克隆转染293T细胞,经荧光显微镜观察和Western Blot检测hCBFα1/RUNX2基因在293T细胞内的瞬时表达。再利用脂质体转染法将pGC-FU-hCBFα1/RUNX2、pHelper1.0和pHelper2.0三质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,并通过实时荧光定量PCR检测病毒滴度。结果重组质粒经测序证实,插入片段与人CBFα1/RUNX2基因序列完全一致。荧光显微镜观察以及Western Blot印迹均证实pGC-FU-hCBFα1/RUNX2中携有正确的hCBFα1/RUNX2基因,并能在293T细胞中瞬时表达。包装慢病毒后实时荧光定量PCR检测病毒滴度为(2.00×108)TU/mL。结论成功构建了携带hCBFα1/RUNX2基因的重组慢病毒载体,为进一步研究其在牙周组织再生中的生物学功能奠定了基础。
- 曹金芳李伟宏邓辉王惠宁
- 关键词：慢病毒载体转染
