国家自然科学基金(304000375)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建与表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建携带小鼠白细胞介素-12基因的重组卡介苗(Bacille calmette-guerin,BCG),并鉴定该重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。方法:以分子生物学方法构建携带小鼠IL-12基因和分支杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM12,以电转化的方式将pBM12质粒转入BCG构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定重组菌;将重组菌感染巨噬细胞,通过RT-PCR了解重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果:电转化方式可将pBM12导入BCG,抽提质粒鉴定出与mIL-12基因相符的目的条带。以该重组BCG感染小鼠巨噬细胞,96h后用RT-PCR法也扩增出1632bp左右的基因条带。结论:成功构建含pBM12的重组BCG。该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带基因。
- 张黎王瑜伟何永林李娜王爽帖儒修
- 关键词：白细胞介素12重组卡介苗真核表达
- 人颗粒溶素活性肽和小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建及鉴定
- 2009年
- 目的构建含人颗粒溶素(GLS)活性肽和小鼠单链白细胞介素-12(mIL-12)基因的重组卡介苗(BCG),并鉴定其向真核细胞递呈质粒的能力。方法以分子生物学方法构建含相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因和小鼠IL-12基因及分枝杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM9,以电转化的方式将pBM9质粒转入BCG,构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定;将重组菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,经RT-PCR检测重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果重组BCG可扩增出与GLS基因和mIL-12基因相符的目的条带。重组BCG感染RAW264.7细胞96h后,经RT-PCR可扩增出267bp的GLS基因条带和1632bp的mIL-12基因条带。结论已成功构建含GLS和mIL-12基因的重组BCG,该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带的目的基因。
- 张黎王瑜伟何永林帖儒修
- 关键词：颗粒溶素白细胞介素-12重组卡介苗真核表达
- 人颗粒溶素活性肽和小鼠白细胞介素-12基因真核穿梭共表达质粒的构建与真核表达
- 2009年
- 目的构建含分枝杆菌复制子Orim,可分泌表达人颗粒溶素相对分子质量为9000的活性肽与小鼠白细胞介素-12(mIL-12)的真核穿梭共表达质粒,并检测其蛋白表达。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,经双酶切及插入片段测序对质粒进行鉴定。同时,将mIL-12亚克隆入pBudCE4.1另一多克隆位点,构建真核共表达质粒pBudCE41-S9K/mlL-12。然后,将分支杆菌复制子Orim亚克隆入真核共表达质粒pBudCE4.1-S9K/mlL-12,形成穿梭共表达质粒。采用RT-PCR、免疫细胞化学法,检测颗粒溶素活性肽在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌。ELISA检测mIL-12的表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,颗粒溶素活性肽基因插入片段正确;RT-PCR和免疫细胞化学检测表明其可以在细胞中瞬时表达;ELISA检测细胞培养上清有mIL-12表达。结论成功构建穿梭共表达质粒pBM9,并能体外表达。
- 张黎王瑜伟何永林帖儒修
- 关键词：颗粒溶素白细胞介素12真核表达
