重庆市自然科学基金(cstc2012jjB0046)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：西南大学第三军医大学西南医院中国农业大学更多>>
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- 大肠杆菌O157:H7候选效应蛋白Z1370的原核表达、纯化及多抗制备被引量：4
- 2015年
- 为鉴定肠出血性大肠杆菌O157:H7的效应蛋白,本研究利用生物信息学方法预测了1个新的大肠杆菌O157:H7分泌蛋白Z1370,并以EDL 933菌株为模板,扩增Z1370基因。将该基因克隆至原核表达载体p GEX-6P-2,转化大肠杆菌XL-1 Blue,IPTG诱导目的蛋白表达。利用谷胱甘肽琼脂糖珠和Pre Scission Protease酶纯化目的蛋白。纯化的目的蛋白免疫小鼠制备多抗血清并鉴定多抗血清的免疫反应性和特异性。结果表明,Z1370可能是一个能够分泌至细胞外的效应蛋白。将PCR扩增的Z1370基因连接表达载体并成功在大肠杆菌以可溶形式表达了具有良好天然构象的蛋白,该蛋白在大肠杆菌O157:H7中可以自身催化,并以小于原始相对分子质量的形式存在。将该蛋白纯化后免疫小鼠制备了具有良好免疫反应性和特异性的多抗血清。这为Z1370蛋白的亚细胞定位和功能研究奠定了基础、提供了研究工具。
- 王豪举闫青毛旭虎丁红雷
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7分泌蛋白多克隆抗体原核表达
- 应用生物信息学方法筛选猪肺炎支原体保护性抗原
- 2013年
- 猪支原体肺炎是一种严重危害养猪业的传染病,目前尚无有效疫苗预防和阻止该病的传播。筛选具有高保护性和高免疫反应性的候选抗原是制备有高免疫保护力的疫苗的关键。本文以猪肺炎支原体232菌株为基础,用多种在线生物信息学软件预测蛋白的亚细胞定位,将筛选得到的外膜蛋白和分泌蛋白通过BLAST序列比对进一步筛选出高保守型的蛋白作为疫苗候选抗原分子。最终在232菌株编码的691个蛋白中得到62个候选蛋白抗原。为下一步通过试验验证进一步确定其是否为保护性抗原奠定了基础,也为研究猪肺炎支原体的致病过程、致病机理和免疫反应机制提供了大量的目标分子。
- 王豪举王博丁红雷
- 关键词：猪肺炎支原体保护性抗原生物信息学疫苗
