天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目(07JCZD-JC07300)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：葛林东莉洁何津岩杨洁邵洁更多>>
- 相关机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- GST-G3BP Domain 1～5原核表达质粒的构建及其表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建GST-G3BP Domain1～5的融合表达质粒,并在大肠杆菌中稳定表达。方法:PCR扩增G3BP Domain1～5片段,利用限制性内切酶EcoRI和NotI将其连接至载体pGEX-4T-1,将连接产物转化大肠杆菌,挑取单菌落,提取质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序。将转化正确的大肠杆菌过夜培养,IPTG诱导融合蛋白表达,immobilized Glutathione beads钓取目的蛋白。结果:G3BP Domain1～5片段均成功连接至载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的融合蛋白。结论:GST-G3BP Domain1～5的融合表达质粒构建成功。
- 葛林何津岩邵洁东莉洁方建飞李晓东杨洁
- 关键词：G3BP质粒构建DOWN
- 重组pEGFP-C2-p100质粒构建及表达被引量：2
- 2008年
- 目的:将人类p100基因定向连入pEGFP-C2质粒,使p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究p100蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoRI和BamHI双酶切方法,从pSG5-p100质粒中获得p100蛋白的cDNA全长;将该cDNA连接入pEGFP-C2质粒。将构建成功的pEGFP-C2-p100质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见p100片段。(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:(1)p100 cDNA全长成功载入pEGFP-C2质粒。(2)p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。
- 何津岩东莉洁葛林赵钢邵洁陆燕欣李晓冬姚智杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒融合蛋白
