教育部科学技术研究重点项目(10415)
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- 小鼠巨噬细胞转染Rv0901基因后活性的改变
- 2007年
- 目的将重组结核分枝杆菌Rv0901基因的重组质粒pcDNA3.1-Rv0901转染小鼠腹腔巨噬细胞,研究结核分枝杆菌Rv0901基因在结核分枝杆菌感染巨噬细胞的过程中所起的作用。方法制备小鼠腹腔巨噬细胞,分别将pcDNA3.1、pcDNA3.1-Rv0901质粒DNA与绿色荧光蛋白(GFP)的质粒DNA混合,以脂质体转染的方式共转染小鼠腹腔巨噬细胞。转染后72h,分别收集细胞用流式细胞仪检测GFP的表达和细胞凋亡的发生情况,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测质粒的转染情况。收集转染72h后的细胞培养液上清,检测细胞NO、IFN-γ的释放水平。结果pcDNA3.1和pcDNA3.1-Rv0901转染的巨噬细胞中均检测到了GFP的表达,转染后的巨噬细胞RT-PCR能扩增出Rv0901的目的片段,pcDNA3.1-Rv0901转染巨噬细胞后细胞的凋亡率高于空载体对照组(56.4±2.0)%vs(19.9±1.5)%,P<0.05,pcDNA3.1-Rv0901转染巨噬细胞后细胞培养液上清中NO和IFN-γ的释放量高于空载体对照组NO:(40.4±3.0)μmol/Lvs(27.5±3.2)μmol/L,IFN-γ:(2.11±0.031)ng/mLvs(0.62±0.025)ng/mL,P均<0.05。结论pcDNA3.1-Rv0901转染小鼠巨噬细胞后使巨噬细胞的凋亡增加,NO和IFN-γ的释放量增加,提示结核分枝杆菌Rv0901基因可能导致巨噬细胞的活性增强,与结核分枝杆菌感染巨噬细胞的机理有关。
- 钟琪鲍朗商正玲刘鱼黄毕姚素霞
- 关键词：结核分枝杆菌转染巨噬细胞
