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miR-155体外特异性靶向鸡内源性反转录病毒ALVE1 env转录物的研究被引量：2: 2016年; 通过生物信息学方法,发现了鸡内源性反转录病毒禽白血病E1(ALVE1)的env转录物存在gga-miR-155作用位点(AGCATTA),并在体外验证其靶位点的活性。将鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组中扩增的ALVE1 env转录物构建至荧光素酶报告载体pmir GLO,获得重组质粒pmirGLO-ALVE1-ENV-WT(野生型),并利用重叠PCR将其miR-155作用位点AGCATTA突变为ATTCAAA,然后构建重组质粒pmir GLO-ALVE1-ENV-MU(突变型),同时将gga-miR-155前体序列构建至pc DNA3.1载体,获得重组质粒pc DNA3.1-gga-miR-155,将这些质粒共转染至DF-1细胞中,48 h后收集细胞并检测荧光素酶活性。结果发现:野生组能显著下调pmir GLO-ALVE1-ENV-WT荧光素酶活性,而对照组无显著改变;对照组和突变组均未能改变pmir GLO-ALVE1-ENV-MU荧光素酶活性。本研究证实gga-miR-155可直接靶向ALVE1 env转录物,为鸡内源性反转录病毒的调控机制提供了新的启示。; 朱文奇胡序明陈世豪刘洋洋孙振耿拓宇宋成义高波崔恒宓; 关键词：MIR-155 靶位点 ENV

禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学分析方法的建立及应用被引量：3: 2015年; 根据NCBI公布的禽内源性反转录病毒ALVE1序列设计引物,以SPF鸡胚制备的成纤维细胞为生物材料,建立了ALVE基因序列分析、甲基化水平和转录表达检测方法。以鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast cell,CEF)和巨噬细胞系(HD11)两种细胞的基因组为模板,通过常规PCR扩增获得了1912 bp的扩增产物,测序后与内源性ALVE1序列比对,核苷酸同源性高达98%以上,说明扩增产物为内源性病毒序列。同时,利用焦磷酸测序分析LTR片段甲基化水平,结果显示,LTR在非免疫细胞CEF中的甲基化水平显著高于巨噬细胞系HD11。利用常规RT-PCR和荧光定量PCR在两种细胞均检测到禽内源性反转录病毒LTR基因、gag基因、pol基因和env基因的转录表达。本研究为今后分析禽内源性反转录病毒ALVE功能提供了方法,同时也为深入研究禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学调控机制奠定了基础。; 朱文奇胡序明陈世豪刘洋洋孙振耿拓宇宋成义高波王宵燕秦爱建崔恒宓; 关键词：DNA甲基化表观遗传学

禽内源性反转录病毒ALVE1LTR转录水平分析被引量：3: 2015年; 本研究以禽内源性反转录病毒ALVE1为研究对象,分析了ALVE1长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)自身转录的变化规律。荧光定量PCR结果显示LTR在2日龄SPF鸡(发育早期)器官组织中转录水平高,而在35日龄SPF鸡(发育晚期)器官组织中转录水平低。焦磷酸测序和荧光定量PCR关联分析发现,ALVE1 LTR在鸡巨噬细胞系HD11和鸡T淋巴细胞系MSB1细胞中的转录水平可能受DNA甲基化调控,去甲基化处理HD11或MSB1 24 h后,LTR转录水平显著增加。通过序列分析发现ALVE1 LTR高度保守且存在先天性免疫应答激活转录因子如NF-AT、c-JUN等。本研究揭示了ALVE1 LTR自身转录的变化规律,为进一步分析ALVE1 LTR功能奠定了基础。; 胡序明朱文奇陈世豪刘洋洋孙振耿拓宇宋成义高波秦爱建崔恒宓; 关键词：长末端重复序列 DNA甲基化表观遗传学

环境因素导致肾脏损害的表观遗传学机制被引量：3: 2014年; 环境因素(化学物质、物理射线、生物因素等)的暴露与多种肾脏疾病的发生发展密切相关,其中表观遗传学机制起着至关重要的作用。近年来,环境表观遗传学的研究逐渐成为热点,环境因素可通过影响表观遗传修饰的改变,直接或间接导致疾病的发生发展,促进糖尿病肾病及其他慢性肾脏病的进展。本文综述了环境表观遗传学修饰在肾脏损伤中的作用及机制。; 曹香华秦卫松; 关键词：肾脏损害环境暴露表观遗传学

二甲苯诱导大鼠肾损伤模型的建立: 2015年; 目的：建立二甲苯诱导肾损伤的大鼠模型,观察吸入二甲苯对大鼠肾脏损伤的病理特点. 方法：选择雄性SD大鼠,吸入二甲苯2次/d,3h/次.分别收集吸入二甲苯4、6、8、10、12周各个时间点大鼠的尿液、血清和肾组织,检测24h尿蛋白、生化指标和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）/肌酐;行肾组织光镜和电镜观察肾小管和肾小球病变,免疫荧光染色观察足细胞裂孔膜蛋白podocin和骨架蛋白synaptopodin表达和分布变化. 结果：（1）大鼠吸入二甲苯3周开始出现蛋白尿,8～9周尿中蛋白量达到最高（34.78±2.91 mg/24h）,此后蛋白尿维持在一个相对恒定的水平;（2）实验大鼠尿NAG酶在吸入二甲苯2周后开始升高,第4周增高最为显著,并且达最高水平[25.03±4.88 U/（g·cr）].（3）吸入二甲苯的大鼠总蛋白、白蛋白、肌酐和谷丙转氨酶与正常对照组相比没有显著差异,大鼠谷草转氨酶较正常对照组明显升高;吸入二甲苯12周,血清尿素氮与正常对照组相比增高.（4）光镜下观察可见肾小管上皮细胞空泡变性,肾小管细胞刷状缘脱落、扁平,部分小管上皮细胞崩解,脱落至管腔中.肾小球未见明显异常.超微结构观察可见多处肾小管上皮细胞刷状缘脱落,上皮细胞崩解,线粒体肿胀,基质电子密度降低,嵴移向周围,变短及数量减少.肾小球足细胞节段足突融合.（5）大鼠吸入二甲苯肾组织免疫荧光染色,可见肾小球足细胞裂孔膜蛋白podocin和骨架蛋白synaptopodin荧光强度减弱,表达呈现不连续颗粒样分布.结论：成功建立了大鼠吸入二甲苯的肾损害模型,初步证实吸入二甲苯能够导致肾脏损伤,大鼠出现蛋白尿,肾小管上皮细胞损伤明显,肾小球足细胞节段损伤,肾小管损伤程度明显重于肾小球.; 徐忠秀曹香华王生余曾彩虹朱小东刘志红秦卫松; 关键词：二甲苯蛋白尿肾小管肾小球

Moving RNA moves RNA forward被引量：2: 2013年; Cell communication affects all aspects of cell structure and behavior,such as cell proliferation,differentiation,division,and coordination of various physiological functions.The moving RNA in plants and mammalian cells indicates that nucleic acid could be one of the various types of messengers for cell communication.The microvesicle is a critical pathway that mediates RNA moving and keeps moving RNA stable in body fluids.When moving miRNA enters the target cell,it functions by altering the gene expression profile and significantly inhibiting mRNA translation in recipient cells.Thus,moving RNA may act as a long-range modulator during development,organogenesis,and tumor metastasis.; PENG LiNaLI YuJiaoZHANG LanYU WenQiang; 关键词：细胞间通讯哺乳动物细胞核糖核酸

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国家重点基础研究发展计划(2012CB517605)

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