中国博士后科学基金(20060400578)
- 作品数：10 被引量：66H指数：5
- 相关作者：夏世金汪海东邰先桃董竞成钱桂生更多>>
- 相关机构：复旦大学云南中医学院第一附属医院第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家重点基础研究发展计划上海市科委科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Gax基因在缺氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞中的表达及其对细胞增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 最近实验观察到低氧可导致大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖，同时发现PASMCs在转录和翻译水平上均有Gax基因表达，低氧可下调其表达，表明低氧是影响PASMCsGax基因表达的一个因素，Gax基因表达下调与PASMCs增殖有关。而外源性Gax基因在低氧性PASMCs是否能够过表达，并抑制细胞增殖目前尚不清楚。本实验旨在观察Ad-Gax转染后Gax基因在缺氧性大鼠PASMCs的表达及其对细胞增殖的影响。
- 夏世金董竞成邰先桃王耀丽钱桂生
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞抑制细胞增殖GAX基因缺氧性
- Gax基因过表达对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及周期的作用被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨生长终止特异性同源盒(growth arrest-specific homeobox,Gax)基因转染在低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)中过表达及其对细胞增殖和周期的作用。方法:腺病毒介导Gax基因(adenovirus expressing Gax cDNA,Ad-Gax)转染体外培养的PASMCs。在常氧(21%O2)和低氧(2·5%O2)2、6、12、24和48h条件下,利用RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定转染前后PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达;用四唑盐(MTT)比色法和流式细胞术检测各组PASMCs增殖和周期。结果:RT-PCR和免疫细胞化学法证实Ad-Gax转染后PASMCs中Gax能稳定过表达;MTT比色试验结果显示,未转染组常氧和低氧2、6、12、24和48h时PASMCs吸光度值分别为0·38±0·02、0·44±0·11、0·48±0·05、0·59±0·07、0·67±0·03和0·75±0·18,低氧组比常氧组明显增加(P<0·05);而转染组各时相吸光度值分别为0·17±0·04、0·15±0·02、0·24±0·11、0·33±0·13、0·31±0·03和0·37±0·09,低氧组比未转染组同时相点组明显降低(P<0·05、0·01)。流式细胞仪检测结果表明,Ad-Gax转染对常氧条件下PASMCs的周期没有显著影响,但可使低氧处理后PASMCs的G0/G1比例较未转染组显著增高、S+G2/M比例显著降低(P<0·01);结论:Gax基因过表达能够抑制低氧性PASMCs的增殖。
- 夏世金董竞成邰先桃王耀丽胡明冬钱桂生
- 关键词：GAX基因低氧肺动脉平滑肌细胞
- 核因子-κB调控老年大鼠脾淋巴细胞凋亡及淫羊藿总黄酮对其影响被引量：14
- 2008年
- 目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-кB)对老年大鼠脾淋巴细胞凋亡的调控作用及淫羊藿总黄酮(epimedium totalflavonoids,EF)对老年大鼠脾淋巴细胞凋亡的调控作用是否通过NF-κB实现。方法分别给予老年大鼠模型NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和EF干预,提取大鼠脾淋巴细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测P65蛋白表达,电泳迁移率(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NF-κB的活性。结果老年大鼠脾淋巴细胞凋亡率比青年大鼠高(P<0.01),PDTC使老年大鼠的凋亡率更高,而EF使老年大鼠的凋亡率降低,与老年组相比有显着性差异(P<0.05),且EF能拮抗PDTC诱导老年大鼠脾淋巴细胞凋亡。与青年大鼠相比老年大鼠脾淋巴细胞P65蛋白表达显著下调(P<0.01),而使用EF的老年大鼠组P65蛋白表达明显上调,表明EF诱导P65高表达。老年大鼠脾淋巴细胞NF-κB的活性弱于青年大鼠(P<0.01),而PDTC处理组的NF-κB活性最低与老年大鼠组相比差异明显(P<0.01),EF干预组的NF-κB的活性最强,与老年大鼠组相比差异非常显著(P<0.01)。相关分析表明,淋巴细胞NF-κB活性与细胞凋亡率呈负相关(r=-0.57,P<0.01)。结论NF-κB通过抑制淋巴细胞凋亡而参与老年大鼠免疫衰老调控过程;EF可能通过提高NF-κB的活性和诱导P65高表达来抑制淋巴细胞凋亡从而延缓免疫衰老进程。
- 夏世金沈自尹刘小雨黄建华吴斌
- 关键词：核因子-ΚB淋巴细胞凋亡淫羊藿总黄酮免疫衰老
- 基于基因表达谱研究淫羊藿总黄酮干预老年大鼠海马炎性衰老的效果与机制被引量：14
- 2010年
- 目的探讨炎性衰老的炎性细胞因子网络机制,及淫羊藿总黄酮(epimedium total flavonoids,EF)干预的效果与机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠分为3组:4月龄(4 m)组、24月龄(24 m)组和24月龄加EF干预(24 m+EF)组,每组10只。自满21月龄当天开始,24 m+EF组予EF灌胃,24 m组给予等量蒸馏水灌胃,均连续90 d。取各组大鼠海马组织,应用炎症细胞因子与受体基因芯片对海马组织分别进行基因表达检测,绘制基因表达谱,筛选有表达差异的基因。海马组织匀浆,离心取上清液,运用酶联免疫吸附法检测上清液中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和IL-10蛋白表达。结果在海马组织中,与4 m组相比,24 m组表达上调的促炎性反应细胞因子与受体基因有9个,表达下调的抗炎性细胞因子与受体基因有6个。与24 m组比较,24 m+EF组中表达上调的抗炎性细胞因子与受体基因有8个,表达下调的促炎性细胞因子与受体基因有11个。24 m组海马组织中TNF-α和IL-6水平都显著高于4 m组(P<0.01);与24 m组比较,24 m+EF组中TNF-α和IL-6水平都明显降低,IL-10水平显著升高(P<0.01)。与4 m组相比,24 m组海马组织上清液中TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10比值均显著升高(P<0.01);24 m+EF组TNF-α/IL-10和IL-6/IL-10比值均比24 m组显著降低(P<0.01)。结论老年大鼠海马存在促炎性细胞因子表达上调,导致促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎反应体系平衡失调,这可能是炎性衰老中出现高促炎性反应状态的原因和炎性衰老发生的新机制;EF可能通过下调促炎性细胞因子表达和上调抗炎性细胞因子表达,重塑促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎性反应体系新的平衡,达到干预炎性衰老的目的。
- 夏世金沈自尹俞卓伟邰先桃刘小雨李亚明汪海东黄建华
- 关键词：炎性衰老基因表达谱酶联免疫吸附淫羊藿总黄酮
- 白细胞介素17介导致糖尿病性T细胞诱导的NOD小鼠糖尿病的发生被引量：5
- 2009年
- 目的研究白细胞介素17（IL-17）在致糖尿病性BDC2．5T细胞转移性糖尿病发病中的作用。方法通过注射转基因IL—17 BDC2．5T细胞（IL-17组，n=6）、IL-17 siRN ABDC2．5T细胞（siIL-17组，n=5），观察高表达和低／无表达IL-17转基因BDC2．5T细胞对NOD．scid小鼠转移性糖尿病的影响，进行小鼠胰岛组织学鉴定、脾脏和胰腺淋巴结染色和血浆细胞因子测定。非转基因BDC2．5T细胞注射为对照组（n=8）。结果在观察期内，IL-17组小鼠全部发生糖尿病，而siIL-17组和对照组则无一例发病。胰腺病理HE染色显示IL—17组小鼠出现严重的胰岛炎，胰岛受到破坏，结构模糊不清；而siIL-17组小鼠胰腺仅表现为轻、中度胰岛炎，可见胰岛内散在的细胞浸润，胰岛组织结构基本完整，细胞形态正常。小鼠脾脏和淋巴结染色显示，IL-17组小鼠脾脏和胰腺淋巴结中CD11c^＋／CD11b^＋的树突细胞增殖显著高于silL-17组和对照组（均P〈0．01），且胰腺淋巴结中该细胞增殖显著高于脾脏。IL-17组小鼠血浆IL—17、肿瘤坏死因子α、γ-干扰素和白细胞介素6水平均显著高于siIL-17组和对照组（均P〈0．01），后两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论BDC2．5T细胞的IL-17高表达可显著加速NOD．scid小鼠发生转移性糖尿病，且与宿主树突细胞增殖和在胰腺淋巴结局部的聚集以及多种细胞因子作用有密切关系。
- 汪海东孙皎夏世金
- 关键词：白细胞介素17NOD小鼠T淋巴细胞糖尿病
- Ad-Gax转染诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制被引量：1
- 2007年
- 背景与目的细胞凋亡与肺癌的发生发展密切相关,诱导肺癌细胞凋亡是肺癌治疗的一大策略。本研究探讨生长终止特异性同源盒Gax(growth arrest-specific homeobox)基因转染对人肺腺癌A549细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法腺病毒介导Gax基因(adenovirus expressing Gax cDNA,Ad-Gax)转染A549细胞。以透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)观察转染前后A549细胞凋亡变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法测定细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后A549细胞凋亡现象明显增强。无Ad-Gax转染时,无或仅见极少量的TUNEL染色阳性细胞;Ad-Gax转染后,TUNEL染色阳性细胞显著增多,尤其在转染后24小时更明显。Ad-Gax转染后12h、24h和48h细胞凋亡率分别为12.57%、17.29%和15.03%,与未转染组(0.25%)比较有显著性差异(χ2值分别为7.357、11.126、9.943,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bcl-2蛋白平均积分光密度值(AOD)分别是2.02±0.07、1.79±0.02、1.25±0.51和1.21±0.24,转染组Bcl-2蛋白AOD随转染时间的延长逐渐降低,与未转染组相比呈显著性差异(t值分别为6.651、7.089、7.438,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bax蛋白AOD分别是3.12±0.42、4.49±0.61、4.24±0.37和3.95±0.43,转染组Bax蛋白AOD升高,与未转染组相比差异显著(t值分别为7.469、7.287、6.473,P值均小于0.01)。转染组A549细胞凋亡率与Bcl-2/Bax比值呈负相关关系(r=-0.49,P<0.01)。结论Ad-Gax转染可诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2/Bax比值实现的。
- 夏世金邰先桃董竞成钱桂生胡明冬
- 关键词：GAX基因人肺腺癌A549细胞凋亡凋亡相关基因
- 老年大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴炎性衰老相关基因表达特征被引量：11
- 2009年
- 目的探讨炎性衰老的炎性细胞因子网络机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠分为4月龄（4m）和24月龄（24m）二组，每组各10只。分别取各组大鼠下丘脑、垂体和肾上腺组织，应用炎症细胞因子与受体基因芯片进行基因表达检测，绘制基冈表达谱，筛选有表达差异的基因。结果与4m组相比，24m组下丘脑、垂体和肾上腺组织中表达上调的促炎性反应细胞因子与受体基因分别有6个、7个和9个，表达下调的抗炎细胞因子与受体基因分别有3个、4个和3个（P〈0．05）。三种组织中表达都上调的促炎性反应细胞因子与受体基因有白介素、肿瘤坏死因子和趋化因子。结论老年大鼠下丘脑－垂体－肾上腺轴组织存在促炎性细胞因子基因表达上调，导致促－抗炎性细胞因子网络和促－抗炎性反应体系平衡失调，这可能是炎性衰老中出现高促炎性反应状态的原因和炎性衰老发生的新机制。
- 夏世金沈自尹董竞成王耀丽黄建华汪海东
- 关键词：炎性衰老基因芯片受体下丘脑-垂体-肾上腺轴
- 淫羊藿苷经NF-κB信号通路干预大鼠免疫衰老的作用及机制被引量：15
- 2010年
- 目的探讨中药延缓免疫衰老的作用和机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠50只,分为4月龄(4 mon)、24月龄(24 mon)、24月龄加PDTC处理(24 mon+PDTC)、24月龄加Ica(icariin,Ica)干预(24 m+Ica)和24月龄加Ica干预再加PDTC处理(24 mon+Ica+PDTC)五组,每组10只。自21月龄满开始,24 mon+Ica组和24 mon+Ica+PDTC组大鼠予Ica灌胃,24 mon组和24 mon+PDTC组给予等量蒸馏水灌胃,均连续3个月。24 mon+PDTC组和24 mon+Ica+PDTC组大鼠在灌胃结束前1 w每2 d腹腔注射PDTC,按200 mg/kg体重分2次注射。处死大鼠分别提取大鼠脾CD4+T淋巴细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,电泳迁移率(EMSA)检测细胞NF-κB的活性,Western印迹法检测细胞P65蛋白表达水平。结果 24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞凋亡率明显高于4 mon组和24 mon+PDTC组(P<0.05),而24 mon+Ica组细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与24 mon+PDTC组比较,24 mon+Ica+PDTC组脾CD4+T淋巴细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与4 mon组大鼠相比,24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞中p65蛋白表达显著下调(P<0.01);与24 mon组比较,24 mon+Ica组p65蛋白表达明显上调(P<0.01),24 mon+PDTC组则显著下调(P<0.05)。与24 mon+PDTC组比较,24 mon+Ica+PDTC组p65蛋白表达明显增强(P<0.05)。24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞NF-κB的活性明显低于4 mon组(P<0.01);与24 mon组比较,24 mon+Ica组NF-κB的活性增强(P<0.01),24 mon+PDTC组NF-κB活性则降低(P<0.01)。相关分析表明,CD4+T淋巴细胞NF-κB活性与细胞凋亡率呈负相关(r=-0.75,P<0.01)。结论 NF-κB通过抑制淋巴细胞凋亡参与免疫衰老的调控;Ica可能通过提高NF-κB的活性和诱导P65高表达来抑制淋巴细胞过度凋亡从而延缓免疫衰老。
- 汪海东夏世金陈颂春张晓丽
- 关键词：免疫衰老核因子-ΚBCD4+T淋巴细胞凋亡淫羊藿苷
- IL-17和siRNA-IL-17基因逆转录病毒载体的构建及其转染致糖尿病性T细胞中IL-17的表达被引量：6
- 2009年
- 目的构建含有Thy1.1细胞表面抗原(Thy-1.1cell surface antigen,Thy1.1)基因的携带IL-17或siRNA-IL-17基因的逆转录病毒载体,并观察逆转录病毒对致糖尿病性BDC2.5T细胞的转染能力。方法利用基因工程和细胞克隆技术分别将IL-17的cDNA插入MSCV-IRES-Thy1.1(MIT)逆转录病毒载体,将Thy1.1、U6增强子(U6promoter)基因和IL-17的siRNAcDNA插入逆转录病毒载体pMND-BANSHEE,采用磷酸钙沉淀法将重组载体转染293包装细胞;收集病毒上清,转染预先活化的NOD/BDC小鼠脾细胞,测定致糖尿病性T细胞的IL-17和siRNA-IL-17的表达。结果流式细胞术检测显示,成功构建携带IL-17和siRNA-IL-17的逆转录病毒载体。携带IL-17或siRNA-IL-17逆转录病毒分别感染原代培养并活化的NOD/BDC脾细胞,在空白对照组、空载体组、阳性对照组、IL-17组和siRNA-IL-17组,Thy1.1+/Thy1.2+细胞比例分别为(0.6±0.3)%,(7.2±2.4)%,(6.8±2.6)%,(6.4±2.4)%和(4.6±1.8)%;体外实验携带IL-17基因逆转录病毒转染BDC2.5T淋巴细胞后,IL-17的表达显著高于siRNA-IL-17转染组和未转染对照组(均P<0.01)。体外培养活化实验显示,携带IL-17逆转录病毒转染非活化组和活化组T淋巴细胞,转染后IL-17的表达均显著高于siRNA-IL-17转染组和未转染对照组(均P<0.01),其中IL-17转染活化组的IL-17的表达较非活化组更高(P<0.01);在siRNA-IL-17转染的非活化组和活化组,IL-17的表达显著降低,与未转染对照组相比无显著性差异(均P>0.05)。结论逆转录病毒载体能够快速、稳定地将外源基因IL-17或siRNA-IL-17转移至BDC/NODT细胞,可作为介导T细胞基因转移的重要工具。
- 汪海东孙皎夏世金
- 关键词：逆转录病毒载体T细胞NOD鼠
- Ad-Gax转染对缺氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响被引量：4
- 2007年
- 目的观察 Gax 基因转染对缺氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡及其相关基因表达的影响。方法腺病毒介导 Gax 转染体外原代培养的 PASMCs。透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法观察 Ad-Gax 转染前后在常氧和缺氧处理2h、6h、12h、24h、48h 大鼠 PASMCs凋亡情况;免疫细胞化学法测 PASMCs Bcl-2、Bax 蛋白表达。结果透射电镜观察到 Ad-Gax 转染后PASMCs 产生凋亡现象。未转染缺氧刺激前后,均无或可见极少量的阳性细胞;Ad-Gax 转染后,如无缺氧刺激,也无或仅可见少量的阳性细胞,予缺氧刺激后,阳性细胞显著增多,尤其在转染后24～48h更明显。转染组常氧、缺氧2h、6h、12h、24h、48h 细胞凋亡百分率均显著高于未转染组(P<0.01)。Ad-Gax 转染前,与常氧时比较,缺氧刺激 PASMCs 后,Bax 蛋白表达略为升高但无统计学意义;而 Bcl-2蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Ad-Gax 转染 PASMCs 后,缺氧刺激使 Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax 蛋白表达显著增高(P<0.01)。转染组细胞凋亡率与 Bcl-2/Bax 比值呈负相关(r=-0.53,P<0.01)。结论 Ad-Gax 转染可诱导缺氧性 PASMCs 凋亡,其机制可能是通过上调 Bax 蛋白和下调 Bcl-2蛋白的表达,尤其是通过降低 Bcl-2/Bax 比值实现的。
- 夏世金董竞成白莉胡明冬钱桂生邰先桃谢瑾玉
- 关键词：GAX基因肺动脉平滑肌细胞脱噬作用凋亡相关基因
