中国科学院西部之光基金(2009DF03)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：陕西省微生物研究所第四军医大学更多>>
- 发文基金：中国科学院西部之光基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 响应面法优化重组hCu,Zn-SOD改构体发酵培养基被引量：4
- 2011年
- 目的:优化已构建的重组hCu,Zn-SOD改构体基因工程菌的发酵培养基,提高重组hCu,Zn-SOD改构体活性蛋白产量。方法:单因素实验筛选发酵培养基的碳源和氮源,Plackett Burman设计筛选影响hCu,Zn-SOD活性的重要影响因子,最陡爬坡实验逼近重要影响因子的hCu,Zn-SOD活性的最大响应区域,Box-Behnken及响应分析法进行回归分析。结果:重组hCu,Zn-SOD改构体发酵培养基重要影响因子的最优取值为:酵母提取物7.464 6g/L,NaNO30.712 9g/L,Na2HPO4.12H2O30.487 6g/L,KH2PO44.183 0g/L,优化后的hCu,Zn-SOD活性是1 470 700U/L,较初始培养基提高了1.04倍。结论:响应面法优化重组hCu,Zn-SOD的发酵培养基提高了hCu,Zn-SOD的活性和产量,为重组hCu,Zn-SOD的工业化生产提供依据。
- 张月娟张琨万一
- 关键词：超氧化物歧化酶响应面法发酵
- 聚乙二醇化重组人Cu,Zn-SOD改构体制备工艺的优化及其半衰期测定
- 2014年
- 目的优化聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化重组人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)改构体(rmhCu,Zn-SOD)的制备工艺,以期延长其在体内的半衰期。方法以相对分子质量5 000的甲氧基聚乙二醇乙酸-羟基琥珀酰亚胺酯(mPEG-SPA)作为修饰剂,对rmhCu,Zn-SOD蛋白进行化学修饰,并对mPEG-SPA与rmhCu,Zn-SOD的摩尔比、反应缓冲液、反应温度、反应方式及反应时间进行优化;利用硫酸铵沉淀、凝胶过滤色谱法对PEG化rmhCu,Zn-SOD进行分离纯化,并检测其在小鼠体内的半衰期。结果 PEG化rmhCu,Zn-SOD的最佳制备工艺为mPEG-SPA与rmhCu,Zn-SOD的摩尔比1.5∶1,缓冲液为pH 8.5的磷酸盐缓冲液,反应液混匀后4℃静置反应1 h;纯化的修饰产物的纯度约为90%,残余酶活力为(84.3±2.3)%,蛋白修饰率为(65.4±1.9)%;与未修饰的rmhCu,Zn-SOD相比,PEG化rmhCu,Zn-SOD的半衰期延长了约7倍。结论优化了PEG化rmhCu,Zn-SOD的制备工艺;PEG化修饰有效延长了该改构体蛋白在体内的半衰期。
- 张琨张月娟万一王增禄
- 关键词：改构体聚乙二醇化学修饰半衰期
