江苏省科技支撑计划项目(BE2008306-2)
- 作品数：10 被引量：33H指数：3
- 相关作者：王根林崔群维刘延鑫李大齐郭宁更多>>
- 相关机构：南京农业大学江苏农牧科技职业学院中国农业大学更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目国家科技支撑计划山东省农业科学院高技术自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 奶牛围产期外周血T淋巴细胞亚群动态及细胞因子IL-2、IL-4基因转录水平分析被引量：4
- 2011年
- 通过检测奶牛CD3+、CD4+和CD8+淋巴细胞亚群的动态及细胞因子IL-2、IL-4在分娩前后21d内的基因转录水平的变化,以探讨此阶段奶牛免疫机能受损的机理。应用流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞亚群的动态变化及实时荧光定量检测细胞因子IL-2、IL-4mRNA的表达量。结果表明:血液中CD3+淋巴细胞的比例在产前21d内占(50.8±4.61)%,产后14d内降低到(39.21±4.98)%,两者差异极显著(P<0.01);CD4+淋巴细胞在产前21d内保持较高水平,达(21.38±0.65)%,产后21d内维持在(6.89±0.32)%的较低水平,且与产前差异显著(P<0.05);CD8+淋巴细胞的比例在产犊前逐渐升高,到产犊时达到最高水平(16.90±2.02)%,差异显著(P<0.05);CD4+/CD8+淋巴细胞的比率在产前>1,产后<1。IL-2mRNA的表达量在产后0～14d内下调,之后上升。IL-4mRNA的表达量分娩时期达到最高,随后下降,至第7天降到最低。奶牛在围产期阶段尤其是分娩前后14d内机体处于免疫抑制状态,可能是由于自身的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的亚群的数量和比例发生改变及细胞因子IL-2、IL-4mRNA表达量下调引起的。
- 崔群维郭宁周璇王振云王雅春王根林
- 关键词：淋巴细胞亚群细胞因子免疫抑制实时荧光定量
- 奶牛HSP70 基因表达及其连锁微卫星标记与耐热性状的相关性被引量：14
- 2010年
- 为了研究奶牛HSP70基因的mRNA表达规律和其紧密连锁的3个微卫星标记与耐热性状的相关性,文中在日平均温湿度指数(THI)为86.2(高温期)、70.9(临界高温期)和56.8(适温期)时分别采集10头处于同一泌乳阶段的同龄健康奶牛的尾静脉血,采用实时荧光定量RT-PCR技术分析不同条件下奶牛HSP70基因在外周血淋巴细胞的mRNA表达水平。结果表明:随THI升高,HSP70mRNA表达量呈上升趋势,高温期奶牛的外周血淋巴细胞HSP70mRNA表达丰度极显著高于临界高温期和适温期(P<0.01),且与奶牛的耐热指标具有一定的遗传相关,表明HSP70基因可以作为奶牛热应激反应的候选基因。选取23号染色体上与HSP70紧密连锁的3个微卫星标记BMS468、BM1258和BM1815,用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析其在160头荷斯坦奶牛的遗传变异情况,利用最小二乘法拟合线性模型初步探索了这3个微卫星座位与奶牛耐热指标的关系。相关分析表明:耐热系数、红细胞钾含量及高温期日产奶量下降率的最有利基因型在BMS468基因座和BM1815基因座上,分别为134bp/128bp(P<0.05)和186bp/148bp(P<0.05);BM1258基因座上,最有利基因型101bp/99bp的高温期日产奶量下降率最低(P<0.05)。
- 刘延鑫李大齐崔群维史红霞王根林
- 关键词：奶牛HSP70耐热性微卫星标记实时荧光定量RT-PCR
- 妊娠奶牛PAPPA和PAG mRNA表达规律的研究
- 2011年
- [目的]分析PAPPA(妊娠相关血浆蛋白A)和PAG(妊娠相关糖蛋白)mRNA在不同妊娠时期奶牛外周血的表达规律。[方法]提取奶牛空怀期和妊娠30 d、60 d、90 d、150 d和240 d血浆中游离RNA,RT-PCR扩增PAPPA和PAG的基因,分析其在妊娠期的相对表达水平,并研究其表达规律。[结果]PAG基因在空怀组和妊娠牛均有表达,在牛妊娠240 d时相对表达水平达到高峰;PAPPA从妊娠30 d时表达水平开始升高,并在妊娠150 d时达到最高水平。[结论]本研究为深入探讨奶牛PAPPA和PAG基因调控规律和早期妊娠诊断提供了参考。
- 郭宁李莲周璇崔群维王根林
- 关键词：奶牛PAG基因表达
- 不同季节荷斯坦牛3个微卫星座位与GSH-Px、SOD和Na^+/K^+-ATP酶活性及日产奶量的关系被引量：2
- 2010年
- 选择分别与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和Na+/K+-ATP酶基因紧密连锁的3个微卫星座位BMS2258、SOD1和BM723,采用PCR及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析其在130头荷斯坦牛中的遗传变异,计算了3个微卫星座位的多态信息含量、有效等位基因数和遗传杂合度,并利用最小二乘法拟合线性模型初步探索了它们与荷斯坦牛夏、秋季GSH-Px、SOD、Na+/K+-ATP酶活性及日产奶量的关系。结果表明,3个微卫星座位与其紧密连锁基因的酶活性及日产奶量均存在显著相关(P<0.05)。BMS2258座位182bp/164bp的GSH-Px活性和日产奶量对应的最小二乘均值较高;SOD1座位148bp/146bp对应的SOD活性的最小二乘均值较高,148bp/148bp对应的日产奶量最小二乘均值较高;BMS2258座位161bp/111bp对应的Na+/K+-ATP酶活性和日产奶量的最小二乘均值较高,它们是各自座位上的最有利基因型。
- 李大齐刘延鑫张军民高红彬王根林
- 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶日产奶量微卫星
- 谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长、增殖及HSP70 mRNA表达的影响被引量：2
- 2015年
- 研究旨在分析谷氨酰胺（Gln）对基础状态乳腺上皮细胞生长、增殖及热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。取对数生长期的奶牛乳腺上皮细胞用于试验,细胞在含有不同浓度（0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0和16.0mmol·L-1）Gln的DMEM培养液中培养24 h,收取细胞及培养液;细胞在含8 mmol·L-1Gln的DMEM培养液中培养不同时间（0,3,6,12,24,48,72 h）后,收取细胞及细胞培养液。采用MTT法检测细胞存活率,比色法检测LDH活性,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测细胞内热休克转录因子1（HSF-1）和HSP70的表达水平。结果显示：Gln能促进奶牛乳腺上皮细胞生长增殖,Gln浓度为2.0 mmol·L-1时细胞存活率最高,4.0～8.0mmol·L-1时仍维持较高水平;细胞内HSP70与HSF-1的表达趋势一致,8.0 mmol·L-1的Gln诱导24 h,二者表达量均达峰值,分别为细胞活性最佳剂量2.0 mmol·L-1表达量的8.49倍（P〈0.01）和5.90倍（P〈0.01）,表明Gln能促进奶牛乳腺上皮细胞的生长、增殖,并通过启动HSF-1 mRNA的转录活性诱导基础状态乳腺上皮细胞高表达HSP70 mRNA。
- 张响英史红霞狄和双王根林
- 关键词：谷氨酰胺乳腺上皮细胞HSP70奶牛
- 转化生长因子β1对奶牛乳腺组织细胞凋亡及HSP70蛋白表达的影响被引量：3
- 2009年
- 应用乳酸脱氢酶（LDH）活力测定、透射电镜、免疫组化和Caspase-3活性分析等技术，检测转化生长因子β1（TGF—β1）对奶牛乳腺组织细胞活性、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。用10ng·mL^-1TGF—β1处理乳腺组织48h，分别在不同时间点收集组织和培养液检测各指标，以0h不加TGF—β1作为对照组。结果显示，随TGF—β1作用时间的延长组织细胞活率逐渐降低，24h和48h组显著低于对照组（P〈0．05），LDH活性逐渐升高，6、12、24和48h组极显著高于对照组（P〈0．01）。处理12、24和48h组织DNA发生断裂；Caspase-3活性在24h达到高峰，并极显著高于对照组（P〈0．01）；上皮细胞逐渐由腺泡脱落，腺泡塌陷，但间质结构基本完整；超微结构观察显示，48h时上皮细胞呈现染色质凝集、线粒体肿胀等明显凋亡特征，而成纤维细胞胞浆致密、线粒体丰富，结构较完整、处理3～12h后组织过表达HSP70，且均显著高于对照组（P〈0．05）。结果提示：TGF—β1以促进上皮细胞凋亡的方式促进奶牛乳腺发生退化。
- 狄和双杨媛媛王利刚崔群维程凯宁黄静燕王根林
- 关键词：乳腺组织细胞凋亡
- 热应激诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡及其对HSP70基因表达的影响被引量：6
- 2017年
- 为探讨热应激对乳腺上皮细胞凋亡的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的乳腺上皮细胞分别置于39℃和41℃热处理1 h(以37℃正常培养的细胞为对照),在37℃恢复培养0、6、12 h后收集细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,比色法分析Caspase-3活性,荧光定量PCR检测HSP70基因的表达水平。结果表明,39℃热应激组细胞生长抑制率和死亡率高峰期均发生在热修复6 h,细胞死亡率为15.42%,而41℃热应激组发生在热修复12 h,细胞死亡率高达23.18%;高温处理后,Caspase-3活性呈上升趋势;39℃热应激组在热恢复6 h,HSP70基因表达量显著高于对照组,41℃热应激组在热恢复0、6、12 h,HSP70基因的表达量分别为对照组的3.53倍、5.61倍和2.93倍。综上可知,高温应激激活了Caspase-3活性,从而诱导乳腺上皮细胞凋亡,并随高温强度的增加而作用增强,同时高温诱导了HSP70基因过表达,协助细胞获得热耐受性。
- 张响英唐现文陈静波李腾腾
- 关键词：乳腺上皮细胞热应激细胞凋亡HSP70基因
- 荷斯坦牛血红细胞Na^+-K^+-ATP酶活力与其耐热性的相关性研究被引量：3
- 2009年
- [目的]为探讨Na+-K+-ATP酶在荷斯坦牛热应激过程中的作用。[方法]本研究比较测定了329头荷斯坦牛在非热应激期和热应激期的体温、红细胞K+和红细胞Na+-K+-ATP酶活力的变化。[结果]显示,试验牛群红细胞Na+-K+-ATP酶活力呈正态分布;不同胎次、产犊季节、泌乳期、场次牛Na+-K+-ATP酶活力差异不显著(P>0.05);不同性别牛Na+-K+-ATP酶活力差异极显著(P<0.01)。在热应激期,同一泌乳期牛红细胞Na+-K+-ATP酶活力与产奶量下降率成负相关;荷斯坦牛的体温明显升高,产奶量明显下降,红细胞K+无显著变化,红细胞Na+-K+-ATP酶活力明显下降,与非热应激期相比只有红细胞K+差异不显著(P>0.05),其余都差异极显著(P<0.01);红细胞Na+-K+-ATP酶与体温成负相关,与产奶量成正相关,与红细胞K+的相关性不显著。[结论]在热应激期,荷斯坦牛红细胞Na+-K+-ATP酶活力与耐热性成正相关,红细胞Na+-K+-ATP酶活力高的荷斯坦牛,耐热性好。
- 王泽英黄金明王长法刘延鑫李大齐仲跻峰王根林
- 关键词：荷斯坦牛NA^+-K^+-ATP酶耐热性
- 公牛HSP基因多态性与其精液品质及后裔性能的相关分析被引量：1
- 2011年
- 以142头公牛为研究对象,以HSP为耐热性状的候选基因,分别扩增125和233 bp 2个片段,采用PCR-SSCP方法检测HSP基因多态性,并对PCR产物测序和序列分析。结果表明:HSPA8存在T3358C转换突变,该突变使缬氨酸(Val)变为异亮氨酸(Ile),产生2种基因型AA和AB,频率分别为0.577 5和0.422 5;HSPA1A发现A6201C和T6202A颠换突变,其中T6202A突变使苯丙氨酸(Phe)变为异亮氨酸(Ile),产生了5种基因型AA、AB、BB、AC和BC,频率分别为0.345 1、0.493 0、0.084 5、0.035 2和0.042 2。应用SPSS17.0软件采用最小二乘拟合线性模型,分析基因座位不同标记基因型与后裔测定性能和精液品质的相关性,结果表明:1)在HSPA8,AA基因型个体产量育种值显著高于AB型(P<0.05);在HSPA1A,BB基因型个体产量育种值显著高于AC型(P<0.05),AB基因型个体蛋白育种值显著高于AC型(P<0.05)。2)在HSPA8,精子密度、精子活力和顶体完整率AA均显著高于AB(P<0.05),而精子畸形率AA显著低于AB(P<0.05);在HSPA1A,精子密度BC极显著低于AA(P<0.01),精子活力AC极显著低于AB(P<0.01),而精子畸形率AB极显著高于AC(P<0.01)。
- 廖旭东崔群维周璇王振云郭宁刘延鑫王雅春王根林
- 关键词：公牛热应激精液品质
- 荷斯坦牛红细胞Na^＋-K^＋-ATP酶的研究进展被引量：1
- 2009年
- 作者对荷斯坦牛红细胞Na+-K+-ATP酶的分子结构和基本特征、分布、作用机制、调控机制、生理功能、影响因素及其与热应激的关系进行了综述。
- 王泽英黄金明王长法李秋玲仲跻峰王根林
- 关键词：荷斯坦牛NA^+-K^+-ATP酶热应激
