国家自然科学基金(81202562)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王升启张秀娟王学军黄海谢佩雯更多>>
- 相关机构：军事医学科学院天津中医药大学河南中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- Gaussia分泌型萤光素酶的研究进展及其应用被引量：2
- 2013年
- Gaussia分泌型萤光素酶是近年发现的一种来源于海洋桡脚类动物Gaussia princeps的新型分泌型萤光素酶,是目前已知的可自然分泌的最小萤光素酶,因其分子小、灵敏度高、半衰期短和可高效分泌,而成为一种理想的报告基因,广泛应用于体内外研究。我们就Gaussia分泌型萤光素酶的发光原理、荧光特性及其应用等进行简要综述。
- 张秀娟黄海谢佩雯王学军王升启
- 关键词：报告基因荧光特性
- 新型小发卡RNA慢病毒表达载体的构建及抗乙型肝炎病毒应用评价
- 2015年
- 目的:设计用于表达新型小发卡RNA(sh RNA)的慢病毒载体,并考察其用于抗乙型肝炎病毒(HBV)的可行性。方法:对慢病毒载体骨架SapⅠ位点进行突变,并将用于表达新型sh RNA的结构亚克隆到改造后的慢病毒载体;设计靶向HBV保守序列的sh RNA并克隆到该慢病毒载体,包装含有sh RNA序列的重组慢病毒并定量,考察单个及多个sh RNA结构串联对慢病毒滴度的影响;将重组慢病毒感染HBV稳定转染肝细胞系Hep G2.CW(MOI=3),用杀稻瘟菌素筛选稳定克隆1周后,将其重新消化,并以1×105/孔接种于24孔板,于铺板96 h后取细胞上清检测HBs Ag、HBe Ag表达水平和HBV DNA的含量。结果:构建了一种用于表达新型sh RNA的慢病毒载体,并通过设计靶向HBV保守序列的sh RNA实现了HBV复制的高效抑制;发现多个sh RNA串联效果优于单个sh RNA。结论:构建的新型sh RNA慢病毒表达载体可作为防治慢性病毒感染如HBV感染的潜在有效手段之一,值得进一步研究。
- 张婷玉张秀娟毛莹莹胡伟王学军王升启
- 关键词：慢病毒载体乙型肝炎病毒
- 利用Gaussia萤光素酶建立乳腺癌实时定量检测动物模型
- 2013年
- 目的:建立一种基于分泌型萤光素酶的实时定量检测实验动物体内肿瘤大小的方法。方法:以分泌型Gaussia萤光素酶(Gluc)为报告基因,以嘌呤霉素为筛选基因,将两者用T2A元件连接后克隆到慢病毒载体,包装慢病毒后感染乳腺癌MCF-7细胞,经嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞MCF-7-Gluc,并检测细胞上清中Gluc活性随时间和细胞数目的变化;将MCF-7-Gluc扩大培养后经皮下注射到雌性BALB/c裸鼠前肢腋下,待肿瘤形成后,检测外周血液中Gluc活性与肿瘤体积的相关性。结果:体外实验显示稳定转染细胞MCF-7-Gluc分泌到细胞上清的Gluc活性与时间和细胞数量在一定范围内均呈现良好的线性关系,体内实验显示裸鼠血液中的Gluc活性与肿瘤体积呈正相关。结论:Gluc技术可作为一种灵活、方便、实时定量检测活体动物体内肿瘤大小的有效工具。
- 张秀娟黄海谢佩雯王学军王升启
- 关键词：乳腺癌动物模型
