公共文化服务平台

国家自然科学基金(30340029): 作品数：10 被引量：21H指数：4; 相关作者：徐军要国华杨新艳钟南山姜勇更多>>; 相关机构：广州医学院第一附属医院南方医科大学广州医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

高迁移率族蛋白B1和α平滑肌肌动蛋白在博莱霉素诱导肺纤维化中的表达被引量：5: 2009年; 目的检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在博莱霉素（BLM）致小鼠肺纤维化模型肺内的表达水平，探讨HMGB1在肺纤维化发病机制中的作用。方法取20只4．6周龄C57BL／6雄性小鼠，随机分为BLM组和生理盐水（NS）对照组，每组10只。分别向气管内灌注BLM（3mg／kg）和NS，10d后处死小鼠。应用RT—PCR法检测两组肺组织HMGB1和α—SMA的mRNA表达水平，应用免疫组织化学检测两组肺组织中HMGB1和α-SMA的蛋白表达水平。结果RT-PCR半定量和免疫组织化学半定量分析结果显示，BLM组HMGB1的mRNA和蛋白表达均较NS对照组显著增加（0．61±0．08比0．15±0．02，13．12±1．33比7．92±1．10，P均〈0．01）；BLM组α—SMA的mRNA和蛋白表达均较NS对照组显著增加（0．89±0．12比0．60±0．07，13．66±1．01比8．18±1．33，P均〈0．01）。结论在BLM诱导的肺纤维化中肺组织的HMGB1和α—SMA表达增加。肺纤维化病理过程可能与HMGB1表达增加并活化α—SMA的表达有关。; 蔡琳李理徐军; 关键词：肺纤维化博莱霉素高迁移率族蛋白B1 Α平滑肌肌动蛋白发病机制

严重急性呼吸综合征冠状病毒Spike蛋白诱发小鼠免疫损伤的实验研究被引量：3: 2008年; 目的研究严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)的Spike蛋白(S蛋白)引起免疫病理损伤的分子机制。方法采用信号转导通路发现者基因芯片筛选相关诱导免疫炎症的信号转导通路基因的表达,通过RT-PCR对基因芯片筛选基因进一步验证并观察信号分子阻断剂干预的影响;将SARS-CoV的S蛋白及信号分子阻断剂分别经气管滴注、尾静脉注射的途径感染BALB/c小鼠,通过免疫组织化学观察肺及免疫器官的病理变化。结果S蛋白诱导了与γ干扰素(IFN-γ)类似的JAK-STAT的信号通路相关基因的表达,RT-PCR证实S蛋白诱导了人支气管上皮细胞的γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)基因表达,该作用能够被JAK3抑制剂完全阻断。经气管滴注或尾静脉注射S蛋白均可引起小鼠肺损伤和脾脏损伤。JAK3抑制剂能够抑制S蛋白诱导小鼠肺内IP-10表达,减轻病理损伤。结论JAK-STAT信号转导通路的激活可能在SARS-CoV的S蛋白诱导的以IP-10为代表的炎症级联中起重要作用,该发现可为发展抗SARS病毒诱导的免疫损伤治疗提供新的策略。; 要国华杨新艳徐军; 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒 SPIKE蛋白

SARS冠状病毒S蛋白在昆虫细胞中的表达和纯化被引量：4: 2005年; For expressing the recombinant S protein in spodoptera fragiperda（Sf9） cells, the full-length cDNA of S protein was firstly amplified from plasmid pET-14b/S by means of PCR and subcloned into baculovirus transfer vector pFastBacTM 1, forming a recombinant plasmid pFastBacTM 1/S. It was then transposited with baculovirus shuttle vector （Bacmid） in the Max efficiency DH10BAC component cells by homologous recombination to construct the expression vector Bacmid/S. The Bacmid/S, after identified by PCR, was used to transfect Sf9 cells to express the target protein. The expressed recombinant S protein was analyzed by Western blot with human anti-SARS-CoV antiserum. The results showed that the recombinant S protein had been expressed correctly and efficiently in insect Sf9 cells and was purified by Ni-NTA affinity chromatography. （Western） blot showed that recombinant S protein could be recognized by human anti-SARS-CoV antiserum.; 李志杰要国华刘靖华赵善超邓鹏徐军姜勇; 关键词：SARS冠状病毒 S蛋白昆虫细胞纯化细胞受体

SARS-CoV的S蛋白引起小鼠急性肺损伤: 2009年; 目的:研究严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)的S蛋白作用于小鼠发生的免疫和病理变化,试图揭示S蛋白引起急性肺损伤的可能机制。方法:将BALB/c小鼠随机分为PBS空白对照组、S蛋白组和γ-干扰素可诱导的10kD蛋白(IP-10)组,分别经气管滴注、尾静脉注射的途径注入,观察其临床症状、死亡率;称取双肺湿重,进行HE染色和免疫荧光方法检测肺组织中IP-10的表达。结果:经气管滴注或尾静脉注射S蛋白均可导致小鼠出现呼吸急促症状,甚至死亡,肺脏湿重增加,显微镜下可见肺泡正常结构破坏,间质增厚,炎性细胞浸润,上皮细胞和血管内皮细胞的肿胀脱落,小鼠肺内气管上皮细胞和血管内皮细胞均强阳性表达IP-10。经气管滴注小鼠IP-10蛋白小鼠出现上述类似的肺损伤表现。结论:(1)SARS-CoV的S蛋白引起小鼠急性肺损伤。(2)SARS-CoV的S蛋白可诱导小鼠肺组织表达IP-10。(3)经气管滴注小鼠IP-10可引起小鼠肺损伤。; 杨新艳要国华徐军钟南山; 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒属

基于T7RNA聚合酶／启动子的细胞融合报导系统载体的构建被引量：1: 2010年; 目的：建立T7RNA聚合酶／T7启动子载体系统，作为观察细胞融合是否成功的报导系统。方法：设计并合成引物从BL21细菌中扩增T7RNA聚合酶序列，并将其克隆进入真核表达载体pRc／CMV2中，作为RNA聚合酶的供体。T7RNA聚合酶特异性识别的r17启动子人工合成，构建于荧光素酶的表达载体pGL3中，利用其荧光素酶基因作为报导基因。两质粒共转染A549细胞和VeroE6细胞，检测荧光素酶的表达。结果：共转染pRc／CMV2。T7RNAP和pGL3-T7的A549细胞和VeroE6细胞的荧光强度分别为57745±7747和43679±8616，转染质粒pGL3-T7的细胞空白对照荧光强度1034±201和1091±157，分别与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：成功构建了T7RNA聚合酶/T7启动子载体的细胞融合报导系统，可应用于细胞融合的相关实验研究中。; 刘利东朱蔚云黄金水李冰; 关键词：细胞融合 T7启动子荧光素酶

SARS-CoV的S蛋白诱导呼吸道上皮细胞合成释放IP-10的信号分子机制研究被引量：5: 2008年; 目的:研究SARS冠状病毒S蛋白诱导呼吸道上皮细胞合成释放IP-10(interferon-gamma induc-ible protein 10)的信号分子机制。方法:通过基因芯片检测SARS冠状病毒的S蛋白作用于人支气管上皮细胞16HBE后信号通路基因表达谱的变化;采纳RT-PCR、EMSA、Western blotting等方法进一步分析JAK-STAT通路中信号分子的磷酸化、IRF-1和IP-10基因表达的变化及其相应信号分子抑制剂对表达水平的影响。结果:S蛋白作用于人支气管上皮细胞16HBE诱导了JAK-STAT信号通路涉及的重要转录因子基因IRF-1的表达,该信号通路的转录因子STAT1在刺激后15 min发生磷酸化,2 h即可检出IP-10基因的表达,IP-10的表达可以完全被STAT1、JAK2抑制剂阻断。EMSA显示:支气管上皮细胞在S蛋白的作用下,其核蛋白能够特异性与ISRE和GASDNA基序相结合,而不能与NF-κB的DNA基序相结合。结论:SARS-CoV的S蛋白通过激活JAK-STAT信号转导通路诱导IP-10在宿主细胞的生成。提示病毒诱导的JAK-STAT信号通路激活在病毒感染相关的急性肺损伤发生中具有重要地位。; 要国华杨新艳姜勇徐军; 关键词：冠状病毒属 S蛋白气道上皮细胞

严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白启动急性肺损伤的可能机制被引量：3: 2005年; 目的:研究严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(CoV)S蛋白作用于呼吸道上皮及免疫细胞后对趋化因子IP-10和其他细胞因子生成的影响。方法:通过昆虫-杆状病毒表达系统表达SARS-CoV的S蛋白,并经镍亲和磁珠纯化,将重组的S蛋白分别作用于人支气管上皮细胞16HBE、外周血单个核细胞和单核细胞、肺泡单核-巨噬细胞,观察其形态学变化,并检测IP-10和其他细胞因子的变化。结果:基础状态下16HBE并不生成IP-10,S蛋白作用于人支气管上皮细胞16HBE,引起部分细胞变圆、空泡形成并裂解,12h后即可见IP-10生成达(79.97±13.81)pg/ml,呈显著量效关系。但对其他参与免疫反应的Th1/Th2细胞因子及趋化因子影响不明显。S蛋白并不诱导外周血单核细胞和单个核细胞(主要为淋巴细胞)合成释放IP-10。比较而言,干扰素-γ(IFN-γ)不仅能诱导16HBE,而能诱导免疫细胞生成IP-10。结论:①SARS-CoV可通过其S蛋白早期诱导肺上皮细胞合成释放IP-10,从而启动免疫病理过程。②SARS-CoVS蛋白诱导IP-10在宿主细胞的生成不依赖IFN-γ。; 要国华杨新艳徐军; 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒 S蛋白支气管上皮细胞

SARS相关冠状病毒Spike蛋白定点诱变: 2007年; 目的分析确定SARS-CoV Spike蛋白序列中对SARS-CoV的感染能力相关性较强的位点,并进行定点诱变。方法比对不同来源株SARS-CoV的Spike蛋白的序列,计算其相应位点的突变墒值和突变几率,结合进一步的生物信息学分析,筛选出经预测可能影响Spike蛋白与其受体结合进而导致SARS病毒对宿主细胞的膜融合侵染能力的7个位点,对各个位点用重叠延伸PCR法或直接PCR法进行人工定点诱变,获7个突变片段,之后将各片段亚克隆至克隆载体PSP72中。结果经PCR和测序确认各片段点突变成功,并正确插入克隆载体PSP72中。结论成功实施Spike蛋白的定点诱变,获得7个突变片段的重组子,这些突变体可为研究这些突变位点在Spike蛋白与受体结合中的意义,进而可为阐述Spike蛋白的结构与功能的关系、揭示Spike蛋白变异与SARS病毒侵入(染)细胞能力的相关性提供坚实的实验基础。; 刘利东涂洪斌李冰; 关键词：SARS-COV SPIKE蛋白定点诱变

SARS冠状病毒S蛋白对细胞损伤的机制研究被引量：1: 2005年; 目的研究SARS-CoV的S蛋白作用于内皮细胞后对趋化因子IP-10和其他细胞因子生成的影响,及作用于支气管上皮对外周血单个核细胞的趋化作用。方法通过昆虫-杆状病毒表达系统表达SARS-CoV的S蛋白,并经镍亲和磁珠纯化,将重组的S蛋白作用于人脐静脉内皮细胞,观察其形态学变化并检测IP-10和其他细胞因子的变化;作用于人支气管上皮细胞16HBE后观察其对外周血单个核细胞的趋化作用。结果S蛋白作用于人内皮细胞可引起细胞内出现空泡,细胞变圆有脱落,随时间延长细胞破碎溶解,IFN-γ组也可见小部分细胞脱落但未见空泡变性,脱落程度较S-PR轻。基础状态下内皮细胞并不生成IP-10,S蛋白作用12 h后即可见IP-10生成达(88.88±21.20)pg/ml,呈显著量效反应。但对其他参与免疫反应的Th1/Th2细胞因子及趋化因子影响不明显。而IFN-γ不仅能诱导内皮细胞IP-10的增高,而且能诱导其他因子的增高。S蛋白刺激上皮细胞可产生趋化因子,对单个核细胞有募集作用。结论①SARS-CoV的S蛋白可通过其S蛋白诱导内皮细胞合成释放IP-10,损害内皮细胞,从而启动或加重免疫病理过程。②SARS-CoV的S蛋白诱导IP-10在宿主细胞的生成是IFN-γ不依赖的。③SARS-CoV的S蛋白可刺激上皮细胞产生趋化因子,将单个核细胞有募集至感染部位,激活或加重进一步的肺损伤。; 杨新艳要国华徐军李志杰刘靖华钟南山; 关键词：SARS冠状病毒S蛋白细胞损伤细胞因子生成杆状病毒表达趋化作用空泡变性

严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白引起肺损伤的可能机制被引量：4: 2006年; 目的研究严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)通过微血管内皮细胞释放细胞因子/趋化因子,介导急性肺损伤的可能机制。方法广州呼吸疾病研究所2003年2月至5月确诊为 SARS 的住院患者23例,男15例,女8例,年龄27～55岁,平均(36±6)岁。用液相蛋白芯片系统测定 SARS 患者不同阶段血中的细胞因子/趋化因子水平,免疫组化方法检测 SARS 患者肺组织中γ干扰素诱导蛋白10(interferon-γ inducible protein 10,IP-10)的表达;通过昆虫-杆状病毒表达系统表达 SARS-CoV 的 S 蛋白,并经镍亲和磁珠纯化,将重组的 S 蛋白作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)观察其形态学变化并检测相应细胞因子/趋化因子的变化。结果 IP-10在健康对照组水平较低[(1200±500)ng/L],疾病早期就显著增高[(7600±2400)ng/L,P<0.01],并且在进展期[(8100±2300)ng/L,P<0.01]和疾病晚期[(8000±2800)ng/L,P<0.01]都保持显著增高的水平,直至恢复期[(1 250±450)ng/L,P>0.05]才正常,其在 SARS 患者肺组织显著表达。S 蛋白作用于人血管内皮细胞可引起细胞内出现空泡,细胞变圆有脱落,随时间延长细胞破碎溶解。基础状态下内皮细胞并不生成 IP-10,S 蛋白(5、20、40 mg/L)分别作用后可见 IP-10生成呈显著量效反应,如12 h分别为[(179±34)、(889±212)、(1676±199)ng/L,P 均<0.05]。结论 (1)SARS-CoV 感染的患者血中 IP-10活性显著增高,一直持续到恢复期,肺中 IP-10的表达增加。(2)SARS-CoV 可通过其 S蛋白诱导血管内皮细胞合成释放 IP-10,损害内皮细胞。(3)SARS-CoV 的 S 蛋白诱导 IP-10在宿主细胞的生成不依赖 IFN-γ。; 杨新艳要国华徐军钟南山; 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒内皮细胞

国家自然科学基金(30340029)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

国家自然科学基金(30340029)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈