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国家自然科学基金(30371650): 作品数：20 被引量：48H指数：5; 相关作者：刘玉峰王刚沈柱李巍樊建勇更多>>; 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学广州军区广州总医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

UVB照射前后银屑病T细胞趋化因子受体7及其基因的表达被引量：5: 2006年; 目的:探讨CC趋化因子受体7(CCR7)在寻常型银屑病(psoriasisvulgaris,PV)患者外周血T细胞上的表达及其UVB照射对其表达的影响。方法:应用流式细胞术(FCM)和RT-PCR,检测23例PV患者和12例健康人外周血T细胞上CCR7的表达。结果:通过FCM发现PV患者外周血T细胞表面CCR7的表达率为(60.5±10.4)%,显著高于健康人(31.7±2.1)%(P<0.01)。RT-PCR检测显示,PV患者中CCR7基因的表达显著高于健康人对照(P<0.01),并发现200J/m2UVB照射可明显抑制CCR7基因的表达(P<0.01)。结论:PV患者外周血中CCR7+记忆性淋巴细胞数量及分布的异常可能与疾病的炎症维持密切相关。UVB照射的治疗作用可能与影响CCR7基因的表达有关。; 樊昕王刚刘玉峰; 关键词：银屑病趋化因子受体7 逆转录聚合酶链反应 UVB

从噬菌体抗体库中筛选抗角蛋白单链抗体: 2004年; 目的　从半合成噬菌体抗体库中筛选人源性抗角蛋白单链抗体 (scFv)并进行鉴定。方法　以人表皮角蛋白为抗原 ,通过“吸附洗脱扩增”过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗角蛋白单链抗体 ,对其抗原结合活性、识别角蛋白的相对分子质量 (Mr)和序列进行分析鉴定。结果　经过筛选 ,获得 6株能与角蛋白特异性结合的阳性克隆 ,所识别角蛋白的Mr 相同 ,均在 5 6 0 0 0～ 5 70 0 0之间 ;序列分析显示 ,所获抗体克隆的可变区基因分别属于免疫球蛋白基因家族的不同亚群。; 夏汝山乔媛媛王刚陈宇萍沈柱王琰刘玉峰; 关键词：噬菌体抗体库角蛋白单链抗体

人角蛋白17的序列分析及辅助性T细胞表位预测: 2004年; 目的 :本文对角蛋白 17的序列和辅助性T细胞抗原表位进行了分析预测 ,为一定遗传背景下T细胞介导的自身免疫紊乱引发银屑病这一观点提供了研究基础。方法 :以氨基酸组成、疏水性和亲水性分析以及氨基酸替换和二级结构分析的结果为参考 ,以HLADR限制性预测方法为主 ,进行K17的辅助性T细胞表位综合预测。结果 :与HLADR7相关的T细胞辅助性表位可能在 5～ 15肽段、15 0～ 190肽段、2 70～ 30 0肽段和 315～ 35 5肽段 ;与HLADR4相关的T细胞辅助性表位可能在 1～ 10肽段、5 0～ 70肽段、110～ 170肽段、2 70～ 35 0肽段和 4 0 0～ 4 2 0肽段。结论 :本研究为下一步人工合成多肽或表达相应肽段筛选银屑病反应性辅助性T细胞表位打下了一定的理论基础。; 沈柱王刚刘玉峰菅金龙; 关键词：银屑病 T细胞表位角蛋白17

抗角蛋白Fab抗体在大肠杆菌中的表达与复性研究被引量：7: 2004年; 目的 :用大肠杆菌分别表达抗角蛋白抗体的轻链和Fd片段 ,体外复性得到Fab抗体。方法 :从已构建的质粒p3MH/Fab中 ,亚克隆抗角蛋白抗体的轻链和Fd片段基因 ,并分别插入载体pET32a中 ,构建重组质粒。以重组质粒分别转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下进行表达。SDS PAGE分析发现 ,在相对分子量 (Mr)为 2 5 0 0 0处有外源蛋白表达。轻链和Fd片段变性后等量混合于折叠液中 ,复性后形成Mr 约为4 5 0 0 0的蛋白。结果 :成功地表达抗角蛋白抗体的轻链和Fd片段 ,ELISA和Westernblot证实 ,复性产物具有与角蛋白结合的能力。结论 :获得了具有活性的抗角蛋白的Fab抗体 ,为其应用研究打下了基础 ,也表明包涵体表达基因工程抗体技术是可行的。; 樊建勇王刚李巍吴元明刘玉峰; 关键词：FAB 角蛋白复性

对一株基因工程人抗角蛋白抗体的免疫学鉴定被引量：1: 2005年; 目的对1株基因工程人抗角蛋白抗体识别抗原的特性进行鉴定。方法利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白的Fab片段的质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达出Fab片段,用ELISA鉴定抗原结合活性和特异性,用蛋白免疫印迹和竞争抑制性ELISA检测抗体所识别的角蛋白组分。结果该株基因工程人抗角蛋白抗体的结合活性和特异性良好,所识别的抗原为相对分子质量46000角蛋白,为特异性人抗角蛋白K17抗体。结论该抗体具有优良的免疫学特性,有必要对其生物学活性和临床应用前景做进一步探讨。; 卢宁王刚刘玉峰李承新李巍张海龙赵小东; 关键词：抗角蛋白抗体基因工程免疫学鉴定 FAB片段蛋白免疫印迹识别抗原

角蛋白17对银屑病患者T细胞增殖和分泌干扰素γ的影响被引量：17: 2004年; 目的检测人角蛋白17对银屑病患者T细胞增殖和细胞因子分泌的影响。方法从银屑病皮损中提取总RNA,反转录成cDNA,通过PCR方法扩增人角蛋白17基因,利用GST融合表达载体pGEX-4T-1表达相应融合蛋白;梯度离心和绵羊红细胞花环沉淀法分离纯化T细胞;直接活细胞计数和MTT法检测T细胞增殖程度,ELISA检测培养上清液中干扰素γ浓度。结果和正常人对照相比,角蛋白17可以显著促进银屑病患者T细胞的增殖,并且促进其分泌干扰素γ(P值均<0.001)。结论角蛋白17对银屑病患者T细胞功能的促进作用提示其可能是引发银屑病的重要自身抗原之一。; 沈柱王刚李巍刘玉峰; 关键词：角蛋白17 干扰素Γ T细胞增殖分泌 T细胞功能融合表达载体

基因工程人抗角蛋白抗体对角质形成细胞增殖的影响: 2004年; 目的 :研究一株基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体在无血清培养的角质形成细胞中的免疫学活性 ,观察其对角质形成细胞增殖的影响。方法 :利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的质粒转化大肠杆菌 ,异丙基 -D -硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达出Fab抗体 ,用免疫组化观察对角质形成细胞的反应性 ,免疫印迹法检测所识别的角蛋白组分及用四甲基偶氮唑蓝比色法 (MTT法 )测定对细胞增殖的影响。结果 :基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体仅识别角质形成细胞中相对分子质量为 4 6 0 0 0的角蛋白区带 ,呈现为一条很强的染色带 ;免疫组化染色呈明显胞浆阳性 ;该抗体明显抑制培养的角质形成细胞增殖 ,并且存在剂量依赖关系。结论 :特异性抗相对分子质量为 4 6 0 0 0的基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体可能是角蛋白抗体家族中影响角质形成细胞增殖的有效成分。; 卢宁王刚刘玉峰李承新李巍张海龙赵小东; 关键词：基因工程角蛋白抗体角质形成细胞

人源性抗角蛋白Fab抗体脂质体的制备: 2005年; 目的制备人源性抗角蛋白Feb抗体(HAKFA)脂质体,检测脂质体的体外释放及包裹和游离抗体的活性,探索HAKFA可行的应用途径.方法采用逆相蒸发与钙融合联合法制备HAKFA脂质体,在透射电镜下观察脂质体颗粒的性状及大小,应用紫外分光光度计检测抗体的包封率,ELISA检测包裹前后的抗体活性.结果本方法制备的脂质体呈现圆形、粒径大小较一致,约50～100nm;HAKFA脂质体包封率达到(60.3±12.7)％;HAKFA脂质体呈现缓释特性并且抗体依然保持良好的抗原结合活性.结论逆相蒸发与钙融合法为制备HAKFA脂质体较理想的方法.; 夏汝山周敏王刚管海宏刘玉峰高天文张三奇; 关键词：脂质体包封率

靶向角蛋白17基因的小干涉RNA对角质形成细胞增生与凋亡的影响被引量：5: 2006年; 目的利用RNA干涉技术诱导角蛋白17(K17)基因沉默,观察其对角质形成细胞(KC)增生和凋亡等生物学活性的影响。方法合成两条含有针对人K17mRNA序列的正义和反义寡核苷酸,退火后与表达载体psilencer3.1-H1neo相连接,经鉴定后转染人角质形成细胞系HaCaT,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(W est-ern b lot)检测转染细胞K17 mRNA与蛋白水平的改变,用流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期及凋亡情况,并通过透射电镜观察细胞的凋亡。结果成功构建了靶向人K17基因的siRNA表达载体psilencer3.1/K17,检测到瞬时转染的HaCaT细胞中K17的蛋白水平及mRNA水平均明显下降。流式细胞仪检测表明转染细胞的细胞周期发生了明显的G1期阻滞并证实凋亡的存在,电镜下观察到凋亡小体。结论对于增生活跃的角质形成细胞,K17的表达对其增生、分化和凋亡等生物学活性具有重要影响。靶向K17的siRNA能够抑制角质形成细胞增生,诱导其凋亡。; 王岩王刚刘玉峰孙林潮沈柱; 关键词：角蛋白17 角质形成细胞 RNA 银屑病

人角蛋白17及其HLA DR4、7限制性T细胞表位区的预测和表达被引量：1: 2004年; 目的 :　预测和表达人角蛋白 17HLADR4、7限制性T细胞抗原表位区。方法 :　根据相关计算机软件和互联网服务器进行表位预测。从银屑病皮损表皮中提取总RNA ,反转录成cDNA ,常规方法将目的基因插入原核表达载体pGEX - 4T - 1和真核表达载体pCR3.1,表达和纯化相应蛋白和表位肽段。结果 :　 (1)预测得到了 5个人角蛋白 17HLADR4、7限制性T细胞抗原表位区 ;(2 )表达得到了人角蛋白 17及其HLADR4、7限制性T细胞表位肽段。结论 :　人角蛋白 17及其HLADR4。; 沈柱王刚刘玉峰; 关键词：HLA DR4 T细胞表位

国家自然科学基金(30371650)

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