江苏省自然科学基金(BK2007259)
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
- 相关作者：张爱华丁桂霞黄松明陈荣华张维真更多>>
- 相关机构：南京医科大学第二附属医院南京医科大学南京医科大学附属南京儿童医院更多>>
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- 血管紧张素Ⅱ通过ROS—EGFR—JNK—AP-1信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖被引量：1
- 2008年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是否通过活性氧-表皮生长因子受体-c—Jun氨基末端激酶-活化蛋白1（ROS—EGFR—JNK-AP-1）信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖。方法体外培养人肾小球系膜细胞，用AngⅡ（100nmol／L）、葡萄糖氧化酶（GO）（1U／L）、血管紧张素受体拮抗剂洛沙坦（10μmol／L）、乙酰半胱氨酸（NAC，10μmol／L）、NADPH氧化酶抑制剂apocynin（10μmol／L）、硫酸二亚苯基碘（DPI，10Ixmol／L）、EGFR阻断剂AGl478（10Ixmol／L）处理细胞。以未处理细胞为阴性对照。应用^3H-胸腺嘧啶（^3H—TdR）掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖；荧光探针2，7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内ROS的产生；Western印迹检测EGFR和JNK活化。结果Angμ（100nmol／L）可显著促进肾小球系膜细胞ROS产生，AngⅡ刺激60min，系膜细胞产生ROS是对照组2．26倍。AngⅡ可呈时间和剂量依赖性诱导系膜细胞EGFR磷酸化，AngⅡ刺激5min，EGFR活化明显增加，至30min达到高峰，随AngⅡ刺激剂量增加，EGFR活化亦显著增强，AngⅡ（100nmol／L）刺激30min，EGFR磷酸化是对照组的3．96倍。洛沙坦、NAC以及apocynin和DPI显著抑制AngⅡ诱导的EGFR磷酸化，同时AG1478几乎完全阻断AngⅡ诱导的系膜细胞增殖；洛沙坦、NAC、apocynin、DPI和AG1478显著抑制AngⅡ诱导的JNK活化。结论ROS-EGFR-JNK-AP-1信号通路参与AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞增殖。NADPH氧化酶抑制剂和EGFR受体拮抗剂能显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞增殖，可能是一种新的治疗途径。
- 黄松明张爱华丁桂霞张维真鲍华英吴红梅陈荣华
- 关键词：系膜细胞NADPH氧化酶C-JUN氨基末端激酶
- 活性氧依赖的表皮生长因子受体磷酸化参与醛固酮诱导的系膜细胞胞外信号调节激酶活化被引量：2
- 2010年
- 目的探讨活性氧(ROS)介导的表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化在醛固酮(ALDO)诱导的肾小球系膜细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化中的作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞,应用ALDO刺激或应用不同阻断剂预处理后再加入ALDO刺激,应用荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFDA)检测细胞内ROS的产生;Western blot检测EGFR、Ki-RasA、c-Raf、丝裂原活化蛋白激酶(MEK1/2)和ERK1/2活化。结果 ALDO可呈时间依赖性和剂量依赖性的方式促进肾小球系膜细胞ROS产生,100 nmol.L-1ALDO刺激60 min,系膜细胞ROS的产生是对照组的2.54倍。ALDO可显著活化系膜细胞EGFR,ALDO刺激60 min,EGFR活性是对照组的5.50倍,盐皮质激素受体(MR)抑制剂依普利酮和抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)几乎完全阻断ALDO诱导的EGFR磷酸化。ALDO刺激系膜细胞3 h,活化的Ki-RasA、c-Raf、MEK1/2和ERK1/2表达显著增强,分别是对照组的4.05倍、3.62倍、4.52倍和3.40倍。抗氧化剂NAC和EGFR特异性抑制剂AG1478几乎完全阻断ALDO诱导的Ki-RasA、c-Raf、MEK1/2和ERK1/2活化。结论 ALDO可通过ROS依赖的EGFR磷酸化活化Ki-RasA/c-Raf/MEK/ERK信号通路。
- 冯伟静张爱华丁桂霞
- 关键词：肾小球系膜细胞醛固酮胞外信号调节激酶
- 血管紧张素Ⅱ通过NADPH氧化酶源性氧化应激促进肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1表达被引量：3
- 2009年
- 目的探讨氧化应激在血管紧张素（Ang）Ⅱ诱导的系膜细胞单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达中的作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞，应用即时定量PCR检测MCP-1表达；荧光探针2，7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内活性氧的产生；化学发光法检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性；Western blot检测p47^phox和p67phox膜转位。24只雄性C57BL／6小鼠随机分为三组：正常对照组、模型组和夹竹桃麻素治疗组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测尿中8-isoprostane和白蛋白水平。结果AngⅡ呈剂量依赖性诱导MCP-1表达，100nmoL／L AngⅡ诱导的MCP-1表达是对照组的3．56倍。AngⅡ呈时间依赖性和剂量依赖性促进系膜细胞活性氧产生。AngⅡ刺激3min，系膜细胞内活性氧产生明显增加，至60min达到高峰。1、10和100nmol/L AngⅡ刺激60min，活性氧产生分别是对照组的1．82、2．92和4．08倍。AT1R拮抗剂氯沙坦完全阻断AngⅡ诱导的活性氧产生，而AT2R拮抗剂PD123319无抑制作用。NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素和二联苯碘几乎完全阻断AngⅡ诱导的活性氧产生，而线粒体复合体Ⅰ抑制剂鱼藤酮、黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇、环氧化酶抑制剂吲哚美辛、脂氧化酶抑制剂去甲二氢化愈创木酸、细胞色素P450氧化酶抑制剂酮康唑以及一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L—NAME）对AngⅡ诱导的活性氧产生均无明显影响。AngⅡ显著刺激NADPH氧化酶活化及p47phox和p67phox膜转位。氯沙坦、乙酰半胱氨酸（NAC）、夹竹桃麻素和二联苯碘阻断AngⅡ诱导的MCP-1表达。AngⅡ灌注后尿中8-isoprostane、白蛋白排泄及肾组织中MCP-1表达分别是对照组的5．45、16．65和2．50倍；肾组织中NADPH氧化酶活性以及p47phox和p67phox膜转位分别是对照组的2．69、2．97和2．67倍。NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素�
- 陈颖张爱华黄松明丁桂霞张维真鲍华英吴红梅陈荣华
- 关键词：肾小球系膜细胞趋化因子CCL2
- 罗格列酮通过阻断磷酸肌醇-3激酶抑制醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖的作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对醛固酮诱导的肾小球系膜细胞(MC)增殖的影响及其作用机制。方法体外培养小鼠MC,应用醛固酮刺激或应用罗格列酮预处理后再应用醛固酮刺激,采用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法和细胞计数测定MC增殖;应用Western blot检测细胞周期素cyclin D1、cyclin A表达及磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)磷酸化。结果1.MC应用100 nmol/L醛固酮刺激后,其3H-TdR掺入量及细胞数分别是基础状态下的2.46倍和2.14倍;PPARγ受体激动剂罗格列酮可呈剂量依赖性抑制醛固酮诱导的MC增殖,抑制率可达80%以上。2.醛固酮刺激12 h后,MCcyclin D1和cyclin A表达。罗格列酮可呈剂量依赖性抑制醛固酮诱导的MC cyclin D1和cyclin A表达。3.醛固酮呈剂量依赖性促进MC PI3K/Akt信号通路活化,100 nmol/L醛固酮刺激60 min,磷酸化PI3K和Akt表达是对照组的3倍以上。4.PI3K抑制剂LY294002或Akt抑制剂显著抑制醛固酮诱导的细胞周期蛋白表达,其抑制率达80%以上。5.罗格列酮显著抑制醛固酮诱导的PI3K/Akt信号通路活化,10μmol/L罗格列酮几乎完全阻断醛固酮诱导的PI3K和Akt活化。结论罗格列酮通过阻断PI3K/Akt信号通路活化而抑制醛固酮诱导的MC增殖。
- 徐康康张爱华丁桂霞
- 关键词：醛固酮肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物活化受体Γ罗格列酮
- SP600125对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞转化生长因子-1和纤维连接蛋白表达的影响
- 2009年
- 目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)特异性抑制剂SP600125对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小球系膜细胞(MC)转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法体外分离、培养人MC,应用AngⅡ刺激或应用SP600125预处理后再应用AngⅡ刺激。于实验终点抽提细胞总蛋白或收集培养上清,采用Westernblot检测MCJNK、胞外信号调节激酶(ERK1/2)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性;应用ELISA法检测培养上清中TGF-β1和FN的分泌。结果SP600125可呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导的JNK活化,10μmol/LSP600125对JNK活性的抑制率为75%,而20μmol/LSP600125几乎完全阻断AngⅡ诱导的JNK活化。AngⅡ可促进MCERK1/2和p38活化,而SP600125对AngⅡ诱导的ERK1/2和p38活化无明显影响。AngⅡ显著促进MCTGF-β1和FN分泌,而SP600125则呈时间依赖性和剂量依赖性阻断AngⅡ诱导的MCTGF-β1和FN分泌,20μmol/LSP600125几乎完全抑制了AngⅡ诱导的TGF-β1和FN分泌。结论JNK特异性抑制剂SP600125可阻断AngⅡ诱导的JNK活化及TGF-β1和FN的表达,可能有一定的治疗作用。
- 徐康康张爱华丁桂霞
- 关键词：肾小球系膜细胞C-JUN氨基末端激酶
- 罗格列酮阻断醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖
- 2008年
- 目的：①探讨氧化应激在醛固酮（ALDO）诱导的肾小球系膜细胞增殖中的作用：②探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）激动剂对醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖的抑制作用。方法：体外培养小鼠肾小球系膜细胞，应用^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR）掺入法、细胞计数及流式细胞术测定系膜细胞增殖和细胞周期的变化：应用Westernblot检测细胞周期素cyclinD和cyclinA表达；应用荧光探针2，7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内活性氧的变化。结果：①PPARγ受体激动剂罗格列酮可呈剂量依赖性的抑制醛固酮诱导的系膜细胞增殖，其抑制率可达80％以上：②醛固酮显著增加S期和G2/M细胞数，该作用可被罗格列酮阻断；③罗格列酮可呈剂量依赖性的抑制醛固酮诱导的系膜细胞cyclinD和cvclinA表达：④抗氧化剂乙酰半胱氨酸（NAC）可显著抑制醛固酮诱导的系膜细胞增殖，罗格列酮可呈剂量依赖性的抑制醛固酮诱导的系膜细胞活性氧（ROS）产生。结论：氧化应激参与醛固酮诱导的系膜细胞增殖，PPARγ激动剂通过抑制氧化应激阻断醛固酮诱导的系膜细胞增殖。
- 孙艳张爱华
- 关键词：醛固酮系膜细胞氧自由基
- 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞增殖被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨活性氧(ROS)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的c-Jun氨基末端激酶(JNK)/活化蛋白(AP-1)信号通路活化及系膜细胞增殖中的作用并探讨其来源。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,应用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFDA)检测细胞内ROS的产生;化学发光法检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性;WesternBlot检测JNK活化。结果:AngⅡ呈时间依赖性和剂量依赖性促进肾小球系膜细胞ROS产生。AngⅡ刺激3min,系膜细胞内ROS产生明显增加,至60min达到高峰。AT1R血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)拮抗剂氯沙坦完全阻断了AngⅡ诱导的ROS产生。NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素和二联苯碘(DPI)几乎完全阻断AngⅡ诱导的ROS产生,而线粒体复合体Ⅰ抑制剂鱼藤酮、黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇、环氧化酶抑制剂吲哚美辛、脂氧化酶抑制剂去甲二氢化愈创木酸、细胞色素P450氧化酶抑制剂酮康唑以及一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对AngⅡ诱导的ROS产生均无明显影响。AngⅡ显著刺激NADPH氧化酶活化及p47phox和p67phox膜转位。氯沙坦、乙酰半胱氨酸(NAC)、夹竹桃麻素和DPI阻断AngⅡ诱导的JNK/AP-1活化和系膜细胞增殖。结论:NADPH氧化酶来源的ROS调控AngⅡ诱导的JNK/AP-1信号通路活化及系膜细胞增殖。NADPH氧化酶抑制剂能显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞增殖,可能具有一定的治疗作用。
- 吴红梅张爱华黄松明丁桂霞张维真鲍华英陈荣华
- 关键词：肾小球系膜细胞嘌呤核苷磷酸化酶尼克酸活性氧
- 氧化应激介导的Ras-ERK信号通路活化参与醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖被引量：3
- 2012年
- 目的探讨氧化应激介导的Ras-胞外信号调节激酶（ERKl／2）信号通路活化在醛固酮（ALDO）诱导的系膜细胞增殖中的作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞，应用^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR）掺人法和细胞计数测定系膜细胞增殖；Western印迹检测Ki．RasA、c-Raf、MEKl／2和ERKI／2活化。结果ALDO可显著促进系膜细胞增殖，抗氧化剂乙酰半胱氨酸（NAC）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖（均P〈0．01）。ALDO刺激系膜细胞3h，活化的Ki-RasA、c．Raf、MEKl／2和ERKl／2表达显著增强，分别是对照组的4．05倍、3．62倍、4．52倍和3．40倍（均P〈0．01）。抗氧化剂NAC几乎完全阻断ALDO诱导的Ki．RasA、c-Raf、MEKl／2和ERKl／2活化（均P〈0．01）。Ki．RasAsiRNA可呈浓度依赖性降低系膜细胞Ki．RasA表达，并显著抑制ALDO诱导的Ki-RasA活化及系膜细胞增殖（P〈0．01）。c-Raf抑制剂GW5074和MEKl／2抑制剂PD98059亦显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖，其抑制率均达到65％（P〈O．01）。Ki-RasAsiRNA不能降低ALDO诱导的磷酸肌醇．3激酶（P13K）磷酸化。联合应用P13K抑制剂LY294002和MEKl／2抑制剂PD98059可完全阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖（P〈O．01）。结论ALDO可通过氧化应激活化Ki-RasA-C-Raf-MEK-ERK信号通路。同时阻断ERKl／2和P13K信号通路可完全抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖。
- 赵非黄松明丁桂霞陈颖韩媛张维真张爱华
- 关键词：肾小球系膜细胞醛固酮胞外信号调节激酶
- 醛固酮通过PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路促进系膜细胞增殖被引量：5
- 2010年
- 目的 探讨氧化应激依赖的表皮生长因子受体（EGFR）活化在醛固酮（ALDO）诱导的磷酸肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路活化及系膜细胞增殖中的作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用~3H-胸腺嘧啶（~3H-TdR）掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸检测细胞内活性氧（ROS）的产生;Western印迹法检测EGFR、PI3K、Akt、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和核糖体蛋白p70S6激酶1（p70S6K1）磷酸化.结果 （1）ALDO可呈时间依赖性和剂量依赖性的方式促进肾小球系膜细胞ROS产生,100 nmol/L ALDO刺激3 min,ROS产生即显著增加,刺激60 min达到高峰;1、10和100nmol/L ALDO刺激60 min,ROS产生分别是对照组的1.50、1.70和2.14倍.抗氧化剂乙酰半胱氨酸（NAC）能阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖.（2）ALDO可呈时间依赖性和剂量依赖性的方式诱导肾小球系膜细胞EGFR磷酸化,100 nmol/L ALDO刺激5 min,EGFR磷酸化显著增强,刺激60 min达到高峰;1、10和100 nmol/L ALDO刺激60 min,EGFR磷酸化分别是对照组的2.29、3.55和5.25倍.NAC和盐皮质激素受体（MR）阻断剂依普利酮能显著抑制ALDO诱导的EGFR磷酸化.而EGFR特异性抑制剂AG1478能完全阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖.（3）100 nmol/L ALDO刺激60 min能显著增加PI3K、Akt、mTOR和p70S6K1磷酸化,其增加倍数分别为对照组的4.35、5.38、3.85和3.57倍,应用NAC和AG1478能阻断ALDO诱导的P13K、Akt、mTOR和p70S6K1磷酸化.（4）PI3K抑制剂LY294002、Akt抑制剂以及mTOR抑制剂雷帕霉素能显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖,其抑制率达到50%～55%.结论 ALDO通过氧化应激依赖的EGFR磷酸化促进肾小球系膜细胞PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路活化及细胞增殖.
- 丁桂霞张爱华黄松明潘晓勤费莉郭梅陈荣华
- 关键词：系膜细胞醛固酮活性氧表皮生长因子受体
- 醛固酮通过线粒体源性氧化应激促进表皮生长因子受体活化及肾小球系膜细胞增殖被引量：1
- 2010年
- 目的 研究活性氧（ROS）在醛固酮（ALDO）诱导的表皮生长因子受体（EGFR）信号通路活化及系膜细胞增殖中的作用并探讨ROS的来源.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用3H-胸腺嘧啶（3H-TdR）掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内ROS的产生;Western印迹法检测EGFR活化.结果 ALDO可显著促进肾小球系膜细胞增殖,应用100 nmol/L ALDO刺激系膜细胞24 h后,3H-TdR掺入量及细胞数分别是基础状态下的2.63倍和2.15倍.盐皮质激素受体（MR）阻断剂依普利酮（EPLE）几乎完全阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖（P＜0.01）,而糖皮质激素受体（GR）阻断剂RU-486对ALDO诱导的细胞增殖无显著抑制作用.ALDO明显促进肾小球系膜细胞ROS产生,100 nmol/L ALDO刺激60 min,系膜细胞内ROS释放是对照组的2.14倍,EPLE显著抑制ALDO诱导的系膜细胞ROS产生（P＜0.01）.线粒体复合体Ⅰ抑制剂鱼藤酮（ROT）几乎完全阻断ALDO诱导的ROS产生（P＜0.01）,NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素（apocynin）和二联苯碘（DPI）对ALDO诱导ROS产生的抑制率为30%～35%（P＜0.05）,而黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇、环氧化酶抑制剂吲哚美辛、脂氧化酶抑制剂去甲二氢化愈创木酸、细胞色素P450氧化酶抑制剂酮康唑以及一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯对ALDO诱导的ROS产生均无明显影响.乙酰半胱氨酸（NAC）和ROT对ALDO诱导系膜细胞增殖的抑制率为75%～80%,apocynin和DPI的抑制作用仅为25%～30%.ALD0可显著活化系膜细胞EGFR,ALDO刺激60 min,EGFR活性是对照组的4.95倍,EPLE和NAC几乎完全阻断ALDO诱导的EGFR磷酸化（P＜0.01）,而NAC和EGFR拮抗剂AG1478则阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖（P＜0.01）.结论 ALDO通过氧化应激依赖的EGFR磷酸化促进肾小球系膜细胞增殖,ALDO诱导的系膜细胞氧化应激主要来源于线粒体.
- 陈颖张爱华黄松明潘晓勤费莉郭梅陈荣华
- 关键词：肾小球系膜细胞醛固酮线粒体
