浙江省科技计划项目(2008C14082)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：陈艳丽许晓玲宋志纯唐佳聂小霞更多>>
- 相关机构：南方医科大学温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SA/mIL15双功能融合蛋白的制备及其生物学鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:制备链亲和素(SA)标记的鼠白细胞介素-15融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,并研究其生物学功能。方法:构建pET24a-SA-L-mIL15和pET21a-mIL15-L-SA重组表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,对所表达的蛋白分别采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和阴离子交换(DEAE)层析进行纯化,透析复性。MTT法检测融合蛋白对ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)分析融合蛋白对生物素化的小鼠前列腺癌(RM-1)细胞表面锚定修饰效率。结果:SA-mIL15和mIL15-SA在大肠杆菌中实现了高效表达,约占细菌总蛋白的20%。制备的SA-mIL15和mIL15-SA融合蛋白纯度达到95%,并具有双重活性,即:mIL15促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞的增殖活性和SA介导的高效结合至表面已生物素化的RM-1细胞的功能(表面锚定修饰效率均大于95%)。其中,SA-mIL15双功能融合蛋白促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞增殖活性为1×106IU/mg,mIL15-SA活性为2×105IU/mg。结论:SA/mIL15双功能融合蛋白具有双重活性,为mIL15表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研制奠定了基础。
- 陈艳丽许晓玲唐佳聂小霞宋志纯胡志明高基民
- 关键词：白细胞介素15链亲和素融合蛋白
