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siRNA沉默ASIC1a基因对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡的影响研究被引量：5: 2012年; 目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)技术诱导佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默对细胞凋亡的影响。方法:通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1asiRNA-FAM,使用Lipo-fectamine 2000转染试剂盒将ASIC1asiRNA转染入关节软骨细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及WesternBlot法检测siRNA转染效率及其对ASIC1amRNA和蛋白表达的抑制作用。同时采用An-nexin-V/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:ASIC1asiRNA能成功转入软骨细胞,转染后AA大鼠关节软骨细胞中ASIC1amRNA表达显著低于对照组(P<0.01),最大抑制率为85.4%;Western Blot结果显示,转染特异性siRNA后ASIC1a蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。Annexin-V/PI流式细胞术结果表明,与模型组相比,siRNA-3转染引起ASIC1a表达沉默后AA大鼠软骨细胞凋亡明显减少。结论:siRNA介导的AA大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达沉默模型是研究酸敏感离子通道对软骨细胞代谢影响的可靠模型,siRNA-3转染对胞外酸化刺激条件下AA大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用可能与其调节的表达有关。; 江晟陈飞虎陈寸知荣超胡伟吴繁荣葛金芳唐杰; 关键词：关节软骨细胞细胞凋亡

大鼠破骨细胞的诱导及其酸敏感离子通道的表达被引量：3: 2010年; 目的：检测酸敏感离子通道（ASICs）在大鼠破骨细胞中的表达情况，探讨其在破骨细胞中的作用。方法：采用1，25-（OH）2D3诱导大鼠骨髓单核细胞分化的破骨细胞。RT-PCR扩增ASICs基因；免疫印迹检测ASICs转录水平；免疫荧光细胞化学方法观察ASICs基因在破骨细胞中的表达和分布。结果：诱导5d后可见抗酒石酸盐酸性磷酸酶（TRAP）阳性多核细胞出现，大鼠破骨细胞在mRNA和蛋白水平均可检测到ASIC1、ASIC2和ASIC3基因的表达产物。免疫荧光细胞化学显示ASIC1和ASIC2蛋白在细胞膜中有较强的表达，而ASIC3主要定位于细胞质中，少量定位于细胞膜上。结论：大鼠骨髓单核细胞可诱导分化成破骨细胞，能表达ASICs。; 陆伟国袁凤来王玉李霞陈飞虎; 关键词：破骨细胞酸敏感离子通道

胞外酸化对体外培养大鼠关节软骨细胞增殖与凋亡及组织蛋白酶K mRNA表达的影响被引量：1: 2012年; 目的:探讨不同胞外pH环境对体外培养的大鼠关节软骨细胞增殖、凋亡的影响,以及大鼠关节软骨细胞中组织蛋白酶K的表达与胞外酸化的关系。方法:Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠关节软骨中分离软骨细胞;细胞传代培养后分为4组分别在pH 7.4、pH 6.5、pH 6.0、pH 5.5不同的胞外酸化环境下培养3h,MTT法检测软骨细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态,Annexin-V/PI双染法检测软骨细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR检测组织蛋白酶K基因的表达。结果:与pH 7.4组比较其他各组软骨细胞增殖均受到抑制,其中pH 5.5、pH 6.0与pH 7.4相比差异有重要的统计学意义(P<0.01),pH5.5和pH 6.0组可见较多的凋亡细胞,且流式细胞仪检测的凋亡率明显高于pH 7.4组(P<0.01);组织蛋白酶K的表达与酸性程度成正相关。结论:胞外酸化环境下能明显抑制体外培养软骨细胞增殖、促进软骨细胞凋亡,并且酸性环境能增加组织蛋白酶K的表达,这为类风湿关节炎中关节软骨的破坏发生机制提供了实验依据。; 荣超陈飞虎江晟胡伟葛金芳张晨晨吴繁荣; 关键词：软骨细胞

基质金属蛋白酶在类风湿关节炎发病机制中的作用研究进展被引量：12: 2011年; 类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是以对称性、多发性关节炎为主要表现的自身免疫性疾病,该病是慢性、进行性、侵蚀性疾病,主要侵犯滑膜组织,继而引起关节软骨、周围韧带及骨质的破坏。RA呈全球性分布,是造成人类丧失劳动力和致残的主要原因之一，尽管其发病机制目前尚不清楚，但人们已经发现RA的发病与遗传和环境因素有密切的关系。; 胡伟荣超陈飞虎吴繁荣刘丽萍; 关键词：关节炎类风湿基质金属蛋白酶发病机制

酸敏感离子通道与类风湿性关节炎: 酸敏感离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)是一类由胞外酸化所激活的阳离子通道,因其具有广泛的生物学功能和重要的病理学意义而备受关注。研究表明ASICs在脑缺血、癫痫、肿瘤等伴有局部组...; 陈飞虎; 关键词：酸敏感离子通道佐剂性关节炎关节软骨软骨破坏; 文献传递

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国家自然科学基金(30873080)