国家大学生创新性实验计划(200837)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 单核细胞增多性李斯特菌iap基因的克隆、表达与p60蛋白的纯化被引量：3
- 2010年
- 以单增李斯特菌基因组DNA为模板,利用自行设计的引物,通过PCR法扩增出单增李斯特菌的iap基因。在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ2个酶切位点将其克隆到pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap。经测序正确后,将iap基因克隆至表达载体pET-28a上构建表达质粒pET-28a-iap。在IPTG诱导下,携带pET-28a-iap的E.coliBL21(DE3)高效表达分子质量约为60kD的可溶性蛋白及包涵体形式的蛋白,其中可溶性蛋白占总p60蛋白含量的76.3%左右。诱导表达的可溶性蛋白通过Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在95.6%以上的重组p60蛋白,其提取率为68.3%左右。
- 吕添武海涛曹正茂王小红
- 关键词：克隆纯化
- 单核细胞增多性李斯特菌p60蛋白表达条件的优化被引量：3
- 2010年
- 在成功构建重组表达载体pET-28a-p60和获得重组宿主菌E.coliBL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60蛋白条件的优化研究。结果表明:将重组大肠杆菌培养至OD600nm达0.7～0.8左右时,加入浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),在摇床温度为25℃,转速为150r/min条件下诱导表达6h,可得到重组表达的p60蛋白占总蛋白的比例为42.32%,其中可溶性蛋白占总p60蛋白的比例为85.36%左右,为p60蛋白诱导表达的最优条件。
- 吕添曹正茂武海涛王小红
