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上海市引进海外海外高层次留学人员专项资金(20040115): 作品数：10 被引量：23H指数：3; 相关作者：赵永波沈原王乔树孙伯民赵圣杰更多>>; 相关机构：上海市第一人民医院上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>; 发文基金：上海市引进海外海外高层次留学人员专项资金国家自然科学基金上海市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

α-突触核蛋白的表达与氧化应激水平的相互影响被引量：5: 2011年; 目的探讨氧化应激与在稳定转染α-突触核蛋白(-αsynuclein)的大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)中α-突触核蛋白表达的相互影响。方法测定未转染、转染空质粒、已稳定转染野生型(WT)及突变型(A53T)α-突触核蛋白的PC12细胞的活性氧(ROS)水平,并以实时定量PCR法和免疫印迹(Western blot)法检测分析经0、50、100和250 nmol/L H2O2处理的WT型和A53T型PC12细胞α-突触核蛋白表达。结果 (1)α-突触核蛋白转染PC12细胞后,细胞内ROS水平增加,按未转染的PC12细胞、转染空质粒的PC12细胞、WT型PC12细胞、A53T型PC12细胞顺序ROS水平依次增加(P<0.05)。(2)经不同浓度H2O2处理后,WT型和A53T型PC12细胞α-突触核蛋白mRNA表达水平均无明显改变,WT型及A53T型PC12细胞不同浓度组组间差异均无统计学意义(均P>0.05);在Western blot检测中,50、100和250 nmol/L H2O2组WT型PC12细胞α-突触核蛋白表达较0 nmol/L H2O2组减少,且不同浓度组组间差异均有统计学意义(P<0.05);50、100和250nmol/L H2O2组A53T型PC12细胞α-突触核蛋白表达较0 nmol/L H2O2组增加,且不同浓度组两两比较差异亦均有统计学意义(P<0.05)。结论α-突触核蛋白可引起PC12细胞氧化应激损伤,且不同氧化应激水平对WT型和A53T型PC12细胞中的α-突触核蛋白表达有不同程度的影响。; 沈原赵永波刘功禄赵圣杰; 关键词：Α-突触核蛋白活性氧氧化应激 PC12细胞

P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白1在脑室内注射红藻氨酸癫动物模型皮质内的表达被引量：3: 2006年; 目的研究P-糖蛋白(PGP)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)在脑室内注射红藻氨酸(KA)癫动物模型皮质内的表达。方法脑室内注射KA6、24h及1周后处死动物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法,观察PGP和MRP1在皮质的表达。结果KA注射24h后PGPmRNA(1.58±0.14)和免疫阳性细胞(19.36±1.64)在皮质表达显著增加,与空白对照组(mRNA0.73±0.06,免疫阳性细胞8.21±0.79)比较差异有统计学意义(P<0.05),1周后PGPmRNA(0.92±0.09)和免疫阳性细胞(8.42±0.84)表达下降至对照组水平;注射KA后MRP1表达逐渐升高,24h后MRP1mRNA(1.72±0.15)和免疫阳性细胞(26.36±2.32)表达显著增加,与空白对照组(mRNA0.87±0.07,免疫阳性细胞10.88±0.96)比较差异有统计学意义(P<0.05),1周后MRP1mRNA(1.57±0.12)和免疫阳性细胞(24.51±2.27)表达仍高于空白对照组(P<0.05)。结论KA诱发的癫动物模型皮质内PGP、MRP1表达增强,可能参与了癫耐药的发生。; 赵永波马爱梅陈英辉王乃东呙登俊; 关键词：P糖蛋白类多药耐药相关蛋白质类

实验性自身免疫性脑脊髓炎的视神经病理改变被引量：1: 2008年; 目的研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的视神经病理改变。方法足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆和完全弗氏佐剂(CFA)混合物制作Wistar大鼠EAE模型,于发病后第6d将大鼠处死,取视神经、脑和脊髓,行HE和LFB染色,光镜和电镜下观察其病理改变。结果病理检查发现EAE模型组大鼠脑、脊髓有不同程度的炎症反应和脱髓鞘改变;均有视神经病变,光镜主要表现为炎症反应和脱髓鞘,视神经髓鞘脱失重于炎症反应;电镜主要表现为髓鞘稀疏,少突胶质细胞数量减少、胞核固缩,其周围包裹的髓鞘板层松解,轴突髓鞘分离。结论EAE大鼠存在明显的视神经病变,主要为视神经炎症反应和脱髓鞘改变。; 朱潇颖赵永波刘文文凌振芬; 关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎视神经脱髓鞘

丘脑底核高频电刺激对大鼠纹状体多巴胺代谢影响的研究被引量：3: 2006年; 目的研究丘脑底核(STN)高频电刺激(HFS)对大鼠纹状体多巴胺(DA)代谢的影响。方法给予正常大鼠一侧STN-HFS,应用微透析观察其对纹状体DA及其代谢产物的影响,应用免疫组化观察其对黑质DA能神经元的影响。结果微透析检测发现刺激侧纹状体DA代谢产物明显增高(P<0.05),DA水平无变化(P>0.05);免疫组化检测发现刺激组和对照组酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量无差异(损毁侧分别为24.00±6.81、23.43±5.49,P>0.05)。结论STN-HFS可能通过影响黑质-纹状体DA代谢发挥作用,STN-HFS对黑质DA能神经元可能无保护作用。; 赵永波王乔树孙伯民王晓平; 关键词：高频电刺激酪氨酸羟化酶微透析丘脑底核

人α-突触核蛋白基因慢病毒稳定转染PC12细胞系的建立及其凋亡检测被引量：2: 2011年; 目的构建及鉴定人野生型和突变型α-突触核蛋白（SNCA和SNCAmu）基因慢病毒表达载体，并观察在体外大鼠嗜铬细胞瘤细胞中的表达。方法在引物合成后采用PCR技术扩增目的基因，并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒[pGC—FU，含绿色荧光蛋白（GFP）基因]中，构建SNCA基因慢病毒载体表达质粒（pGC—FU—SNCA—GFP）和SNCAmu基因慢病毒载体表达质粒（pGC—FU—SNCAmu—GFP），通过酶切、测序验证后，将pGC—FU—SNCA—GFP、pGC—FU—SNCAmu—GFP质粒和包装质粒pHelper1．0、pHelper2．0共同转染大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PCI2细胞），获得稳定转染。结果通过检测标签蛋白GFP和目的蛋白，进一步验证pGC—FU—SNCA—GFP和pGC—FU—SNCAmu—GFP在靶细胞中的表达。通过噻唑蓝比色法检测稳定转染后细胞凋亡水平，稳定表达SNCA组（OE组）、SNCAmu组（OEm组）、不加慢病毒质粒的空白对照组（CON组）和加pGC—FU—GFP空载体对照组（NC组）共4组细胞，病毒转染后不同时间（1、2、3、4、5d）细胞增殖变缓（F=4．534、196．285、411．829、1282．049、3135．559，均P〈0．05）。碘化丙锭单染法检测细胞周期，CON组、NC组、OE组和OEm组G1期、G2期和M期细胞百分比差异有统计学意义（F=885．79、45．03、207．11，均P〈0．05），其中G1期细胞百分比（％）较高（CON组：59．10±0．35、NC组：68．24±0．60、OE组：71．73±0．11、OEm组：74．66±0．35）。结论人SNCA和SNCAmu基因转染到PC12细胞中，成功建立稳定表达的细胞系，并且对细胞凋亡水平和细胞周期有一定程度的改变。; 沈原赵永波刘功禄赵圣杰; 关键词：Α突触核蛋白慢病毒属转染 PC12细胞

Aβ对大鼠记忆和空间定向能力的影响及尼古丁的干预作用被引量：6: 2006年; 目的研究Aβ对大鼠记忆、空间定向能力的影响及尼古丁的干预作用。方法将Aβ1-40注入大鼠双侧基底前脑中,建立大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤模型,观察大鼠学习和空间定向能力的变化,与此同时我们通过腹腔注射烟碱受体激动剂尼古丁对此模型进行干预。结果Aβ注射组大鼠在定位航行试验中,平均逃避潜伏期明显延长,在空间探索试验中跨越原平台位置的次数明显减少,将大鼠在第5天寻找平台的方式进行分类记录,有显著差异(P<0.05)。两周组的尼古丁干预大鼠能够部分地改善由Aβ注射引起的学习记忆损伤(P<0.05,P<0.01),四周组的大鼠未显示出有统计学意义的记忆和空间定向能力的减退(P>0.05)。结论短期(2周)Aβ损伤大鼠学习记忆能力明显下降,从行为学上来评价,该模型是成功的;尼古丁在体内能够部分地改善由Aβ注射引起的学习记忆损伤。四周组的大鼠未显示出有统计学意义的记忆和空间定向能力的减退,有可能是因为Aβ随着时间的延长逐渐被代谢。; 赵永波刘文文郭春妮; 关键词：Β-淀粉样蛋白老年性痴呆学习记忆尼古丁水迷宫试验

丘脑底核高频电刺激对大鼠黑质-纹状体多巴胺代谢的影响: 2006年; 目的研究丘脑底核(STN)高频电刺激(HFS)对大鼠黑质-纹状体系统的影响。方法给予正常大鼠一侧STN-HFS,应用微透析观察其对纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物的影响,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot观察其对黑质、纹状体酪氨酸羟化酶(TH)的影响。结果刺激侧纹状体DA代谢产物明显增多(P<0.05),DA水平无变化;RT-PCR检测发现刺激侧黑质、纹状体TH mRNA水平升高;W estern b lot检测发现刺激侧黑质TH表达无变化,而纹状体TH表达明显升高(P<0.01)。结论STN-HFS可能通过影响黑质-纹状体DA代谢及其限速酶的水平发挥作用。; 赵永波王乔树孙伯民郭春妮; 关键词：帕金森病高频电刺激酪氨酸羟化酶微透析丘脑底核

F-VEP在监测EAE大鼠视神经病变中的作用被引量：1: 2010年; 目的研究闪光视觉诱发电位(F-VEP)在监测实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)视神经病变中的作用。方法制作Wistar大鼠EAE模型,以对照组大鼠F-VEP检测值确定正常参考值范围。模型组大鼠于豚鼠脊髓匀浆乳化剂免疫后不同时间点进行F-VEP检测,发病大鼠于发病后第6天行电生理检查后取视神经、脑、脊髓等通过伊红(HE)染色和LFB-焦油紫染色法进行病理检查。结果发病大鼠均出现不同程度F-VEP异常和视神经病理表现异常:F-VEP异常主要表现为P波和/或N1波潜伏期延长,最长延长分别为59.58%和35.33%;视神经病理改变主要表现为髓鞘脱失和炎性反应。F-VEP检测大鼠视神经病变的灵敏度达到100%,特异度为50%。结论 F-VEP可用于评价视觉系统损伤。; 朱潇颖宫媛媛解正高赵永波; 关键词：脑脊髓炎实验性自身免疫性视神经脱髓鞘疾病

丘脑底核高频电刺激治疗帕金森病的机制: 2007年; 目的研究丘脑底核(STN)高频电刺激(HFS)对大鼠黑质-纹状体系统的影响。方法给予大鼠一侧 STN-HFS,应用 RT-PCR 和蛋白印迹(Western blot)技术观察其对黑质-纹状体 TH 的影响。结果 RT-PCR 检测发现刺激侧黑质-纹状体 TH mRNA 增高(0.22±0.08vs 0.07±0.01,P<0.01;0.41±0.13 vs 0.17±0.09,P<0.01);Western blot 检测发现刺激侧黑质-纹状体 TH 表达明显增高(0.99±0.14 vs 0.33±0.08,P<0.01;0.87±0.16 vs 0.19±0.04,P<0.01)。结论 STN-HFS可能通过影响黑质-纹状体多巴胺代谢及其限速酶的水平发挥作用。; 赵永波王乔树孙伯民王晓平; 关键词：帕金森病电刺激疗法丘脑底核

SNCA基因过表达慢病毒质粒构建及稳定转染293T细胞系被引量：2: 2011年; 目的构建SNCA基因过表达慢病毒质粒,转染293T细胞,建立稳定转染细胞系。方法应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,并对阳性克隆进行基因测序鉴定。pGC-FU-SNCA-GFP重组质粒包装293T细胞,转染24小时后,用荧光显微镜观察标签GFP绿色荧光蛋白的表达,并用West blotting法测定目的蛋白的表达。结果成功构建了pGC-FU-SNCA-GFP慢病毒过表达质粒,获得了稳定转染的293T细胞株。结论人SNCA基因过表达慢病毒载体成功,构建和稳定转染293T细胞系的建立,为进一步体外研究α-突触核蛋白的功能奠定了基础。; 沈原赵永波; 关键词：Α-突触核蛋白转染 BLOTTING

上海市引进海外海外高层次留学人员专项资金(20040115)

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