中药生物技术省重点实验室开放基金
- 作品数：14 被引量：114H指数：5
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- 相关领域：医药卫生理学生物学更多>>
- 电喷雾离子阱质谱法研究蛋白与小分子配体间非共价结合的方法学探讨被引量：3
- 2007年
- 以小檗碱与α1-酸性糖蛋白间的非共价结合作用为例,提出了一种新的质谱滴定法。其主要假定条件是:当蛋白与小分子配体间有一定亲合力、且作用配体的摩尔量大于作用蛋白的摩尔量时,蛋白复合物总浓度与作用蛋白总浓度近似相等。通过不同摩尔量比的小檗碱对α1-酸性糖蛋白的电喷雾离子阱质谱(ESI-IT/MS)滴定实验,分析小檗碱与α1-酸性糖蛋白复合物的结合特点,并应用荧光法进行验证。结果表明应用质谱滴定法与荧光法得到的小檗碱与α1-酸性糖蛋白复合物的结合特性常数(如稳定常数、结合位点数、作用力类型)基本相同。与传统质谱滴定法相比,本文提出的ESI-IT/MS滴定法用于蛋白与小分子配体间非共价结合特性研究,所用仪器相对便宜,方法简单且适应强,在一些研究体系中可得到更准确的实验结果。
- 曹燚韩凤梅陈勇
- 关键词：荧光小檗碱Α1-酸性糖蛋白
- HPLC-MS^n法鉴定葫芦巴碱及其在大鼠体内的主要代谢产物被引量：25
- 2006年
- 目的建立快速灵敏的LC-MSn检测葫芦巴碱及其在大鼠体内代谢物的分析方法。方法以葫芦巴碱对LC-MS2色谱及质谱条件进行优化,分析其电喷雾质谱的一级电离规律和多级质谱裂解规律,以此作为葫芦巴碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据。健康大鼠尾静脉注射8 mg.kg-1葫芦巴碱,收集0~48 h的尿样,经C18小柱固相萃取分离纯化后,直接采用LC-MSn方法对尿样进行测定。结果根据生物体内药物代谢转化规律及母体药物的色谱-质谱行为规律,在尿样中鉴定出母药及其N-去甲基、N-去甲基环氧化产物,以及母药及其N-去甲基环氧化物的甘氨酸轭合物。结论本方法灵敏、快速、选择性高、专属性好,可用于葫芦巴碱的代谢产物研究。
- 陈勇沈少林陈怀侠潘军韩凤梅
- 关键词：代谢物
- 高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱分析水苏碱及其大鼠体内代谢物被引量：13
- 2006年
- 目的鉴定水苏碱在大鼠体内的代谢物.方法应用高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱（HPLC-ESI/MSn）技术研究水苏碱的一级质谱电离规律、二级质谱裂解规律及其色谱保留,以此作为水苏碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据;再将健康大鼠空腹灌胃25 mg·kg^-1水苏碱,收集0～24 h的尿样,经C18小柱固相萃取分离纯化后,应用HPLC-ESI/MS分析尿样中水苏碱代谢物.结果在大鼠尿样中发现了母药及其N-去甲基、氧化脱氢、环氧化等6种I相代谢产物及两种环氧化物的甘氨酸轭合Ⅱ相代谢产物.结论HPLC-ESI/MS法灵敏度高,快速,定性能力强,适合于水苏碱大鼠体内代谢物的分析.
- 陈怀侠沈少林韩凤梅陈勇
- 关键词：水苏碱代谢物
- 液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱法鉴定大鼠尿液中药根碱代谢物被引量：13
- 2006年
- 目的 研究药根碱在大鼠体内的主要代谢产物。方法 健康大鼠尾静脉注射12mg·kg^-1药根碱，收集0～72h的尿样，尿样经C18小柱固相萃取分离纯化后，经液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱（LC—ESI／ITMS^n）分析鉴定其中的代谢物代谢物的结构鉴定主要依据各代谢物与原药的一级质谱电离规律和二级或三级质谱裂解规律间的关联性。结果 在大鼠尿样中检测到7种Ⅰ相代谢产物（如原药的脱氢、脱甲基、羟基化代谢物）及11种Ⅱ相代谢产物（如甲基化轭合物和葡糖醛酸轭合物）。结论 本方法用于大鼠尿样中药根碱的代谢物研究不仅操作简单、快速，而且灵敏度高、专属性强。
- 韩凤梅朱明明陈怀侠陈勇
- 关键词：药根碱代谢物
- 液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱法鉴定大鼠尿液中大豆黄素的羟基化代谢产物及其硫酸酯轭合物被引量：4
- 2006年
- 目的鉴定大豆黄素在大鼠体内的羟基化及其结合形代谢产物。方法SD大鼠分别单剂量给药500mg.kg-1,收集0~24 h尿样。尿样经SPE ODS C18固相萃取柱纯化后,用LC-ESI/MSn对尿样中的代谢物分别进行选择离子监测(SIM)和多级质谱(MSn)分析。结果在大鼠尿中检测到几种尚未在国内外报道过的羟基化代谢产物及其硫酸酯轭合物。结论LC-ESI/MSn法可以快速、简捷、准确地鉴定大豆黄素在大鼠体内羟基化及其结合形代谢产物。
- 韩凤梅戈宝莹陈怀侠陈勇
- 关键词：液相色谱-质谱联用代谢产物
- 电喷雾质谱法研究药物与蛋白的结合被引量：5
- 2007年
- 以葛根素与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白间的非共价结合作用为例,提出了一种电喷雾离子阱质谱(ESI-MS)研究蛋白药物非共价结合的新的质谱滴定法。本方法的主要假定条件是:当蛋白与小分子配体间有一定亲合力、且作用配体的量浓度大于作用蛋白的量浓度时,蛋白复合物总浓度与作用蛋白总浓度近似相等。将该质谱滴定法在毛细管温度180℃;锥孔电压35V的条件下,研究了葛根与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白间的非共价结合特性,结果表明,葛根素与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白的结合常数K分别为7.59×104mol/L,8.01×104mol/L,结合位点数分别为6.8和9.4;葛根素与α1-酸性糖蛋白和人血清蛋白间的作用力主要为静电引力,所得结果与用荧光淬灭分析法所得结果基本一致。
- 韩凤梅祁春华陈勇
- 关键词：葛根素人血清白蛋白Α1-酸性糖蛋白
- 荧光猝灭法研究山豆根碱与人血清白蛋白间的相互作用被引量：4
- 2007年
- 利用荧光光谱法研究了中药有效成分山豆根碱与人血清白蛋白(HSA)间的非共价结合特性。在37℃和47℃两个作用温度下,山豆根碱与HSA间的结合常数K分别为1.5671×103L.mol-1和2.4923×103L.mol-1,结合位点数n分别为0.8309和0.8630,表明温度升高有利于两者的结合。计算了热力学参数,表明该药物与蛋白的相互作用是一个熵增加和吉布斯自由能降低的自发过程,并由此推断山豆根碱与HSA之间的作用力是以疏水相互作用为主,为研究山豆根碱的药理作用和生物学效应,以及山豆根碱对蛋白质构像的影响等提供了重要信息。
- 赵妍曹燚韩凤梅陈勇
- 关键词：人血清白蛋白荧光猝灭
- 电喷雾离子阱质谱法研究射干苷与血浆蛋白的非共价结合被引量：3
- 2007年
- 目的研究射干苷与血浆蛋白的非共价结合特性。方法采用电喷雾离子阱质谱分别测定射干苷、人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白及其所形成复合物的相对分子质量。通过结合前后的相对分子质量的变化计算复合物最大化学计量比;通过Scatchard方程拟合计算复合物结合常数K;根据反应温度和热力学常数△H、△S推测复合物间的作用力类型。结果射干苷与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白形成的非共价复合物K分别为1.914×104mol/L和5.893×104mol/L,结合倍数分别为7.8和3.3复合物间的作用力主要为静电引力。结论电喷雾离子阱质谱法应用于射干苷与蛋白质结合的研究具有灵敏度高、特异性强、分析迅速等优点。
- 曹燚韩凤梅陈勇
- 关键词：射干苷人血清白蛋白Α1-酸性糖蛋白
- 葛根素与血浆蛋白非共价结合的电喷雾离子阱质谱研究被引量：2
- 2006年
- 目的研究葛根素与人血清白蛋白和α1-酸性糖蛋白之间的非共价结合特性。方法应用电喷雾离子阱质谱分别测定葛根素、人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白及其所形成复合物的相对分子质量,通过结合前后的相对分子质量变化计算复合物化学计量比;通过Scatchard方程拟合计算复合物结合常数(K);根据热力学常数△H、△S推测复合物间的作用力类型。结果葛根素与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白形成的复合物的结合常数分别为7·59×104和8·01×104mol·L-1,最大表观化学结合计量比分别为1∶5和1∶8。葛根素与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白间的作用力主要为静电引力。结论电喷雾离子阱质谱是一种研究药物与蛋白间非共价结合的灵敏快速和准确的方法。
- 祁春华韩凤梅曹燚陈勇
- 关键词：Α1-酸性糖蛋白人血清白蛋白葛根素
- 荧光淬灭法研究绿原酸与人血清白蛋白间的相互作用
- ＜正＞本文应用荧光猝灭法阐明中药有效成分绿原酸与人血清白蛋白间的非共价结合特性。证明绿原酸可静态淬灭人血清白蛋白的内源荧光,得到作用温度为37℃和47℃时,绿原酸与人血清白蛋白间的结合常数,结合位点数,以及二者间的主要作...
- 王俊俊赵妍曹燚陈勇
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