广东省科技计划工业攻关项目(2006B36301003)
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 相关作者：郭海霞李文益黄云燕夏焱徐令更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学广东药学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 5-AZA-CdR联合EGCG对HL-60和K562的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨细胞因子INFα和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)能否诱导HL-60和K562 Xaf1表达,以及Xaf1表达诱导剂联合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有协同抗癌作用。方法(1)1000U/mlINFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K56248h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达并比较差异。(2)最佳Xaf1表达诱导剂联合EGCG作用于白血病细胞,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位和细胞凋亡的情况。结果(1)随5-AZA-CdR剂量增加,HL-60和K562Xaf1 mRNA表达增加,INFα也能诱导Xaf1表达,以5-AZA-CdR(5μmol/L)的作用最强;INFα和5-AZA-CdR均不影响XIAP mRNA的表达。(2)5-AZA-CdR和EGCG可改变HL-60和K562细胞Bcl-2(Bcl-xl)和Bax的表达,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,二者联合作用被加强。结论(1)INFα和5-AZA-CdR能诱导HL-60和K562Xaf1 mRNA的表达,且5-AZA-CdR的作用具有剂量依赖性。(2)5-AZA-CdR和EGCG在体外能诱导白血病细胞凋亡,并具有协同效应。
- 黄云燕夏焱郭海霞李文益
- 关键词：XAF1Α-干扰素BCL-2家族
- 人血管内皮细胞生长因子受体2小干扰RNA的设计及其表达载体的构建
- 2007年
- 目的寻找并探讨干扰效果强的人血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelialgrowth factor receptor2,VEGFR-2)小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),以抑制白血病细胞。方法设计人VEGFR-2siRNA,并转染HL60细胞,MTT法筛选最有效siRNA;合成VEGFR-2shRNA,并构建VEGFR-2shRNA表达载体;比较VEGFR-2shRNA表达载体转染HL60细胞后干扰的效果。结果筛选出最有效siRNA;VEGFR-2shRNA正确正向克隆入pENTR TM/U6,成功构建VEGFR-2shRNA表达载体;以其将VEGFR-2shRNA瞬时转染入HL60细胞后,细胞生长抑制率为84.9%,P<0.01;VEGFR-2蛋白表达明显减少。结论通过必要和有效的筛选机制,才能找到抑制效果相对高的siRNA靶序列;VEGFR-2shRNA表达载体可在细胞内简单、快速地克隆shRNA,VEGFR-2的表达抑制率高。
- 郭海霞薛红漫黎阳孟哲陈环李文益
- 关键词：小干扰RNAHL60细胞
- 干扰素α、5-AZA-CdR对白血病细胞HL-60和K562的作用被引量：6
- 2007年
- 【目的】探讨细胞因子干扰素α(INFα)和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)对白血病细胞HL-60和K562的作用机制。【方法】1000U/mL INFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位(Δψm)和细胞凋亡的情况。【结果】INFα和5-AZA-CdR使HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,且与5-AZA-CdR呈剂量依赖性,其中5-AZA-CdR(5μmol/L)的作用最明显;XIAP mRNA表达无变化。INFα使HL-60和K562 Bax表达增加,Bcl-2和Bcl-xl表达无改变;5-AZA-CdR降低HL-60 Bcl-2、Bcl-xl、Bax表达,增加K562 Bax表达,不影响K562 Bcl-2和Bcl-xl。INFα和5-AZA-CdR都能使线粒体膜电位降低、细胞凋亡增加。除细胞凋亡外INFα和5-AZA-CdR对HL-60和K562的Xaf1 mRNA、Bcl-2家族成员以及Δψm无协同作用。【结论】INFα和5-AZA-CdR促进HL-60和K562细胞凋亡,其作用机制可能与上调Xaf1 mRNA的表达,下调Bcl-2(Bcl-xl)/Bax和降低线粒体膜电位有关。
- 黄云燕夏焱郭海霞李文益
- 关键词：XAF1
- 血管内皮细胞生长因子受体2基因短发夹RNA介导基因沉默对白血病的抑制(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景:血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)在血管内皮细胞生长因子的信号转导中有主导效应,并在某些疾病包括白血病的病理性血管生成中起关键作用。另外,白血病细胞分泌的血管内皮细胞生长因子还诱导自身表达VEGFR2,从而维持自身存活、增殖。目的:观察表达VEGFR2短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体Lenti6/shVEGFR2在全身性NOD/SCID白血病模型鼠中的作用。设计:随机、平行对照、开放性实验。单位:中山大学附属第二医院儿科,中山大学生物工程研究中心。材料:实验于2004-05/2006-01在中山大学附属第二医院医学研究中心、中山大学生物工程研究中心完成。分别以HL60,EA·hy926细胞株作为实验用白血病细胞、人血管内皮细胞的来源。Block-iT Lentiviral RNAi Expression System(Invitrogen);human VEGFR2 Mcb(PE标记,R&D)。CD31组化试剂盒(武汉博士德公司),CD33-PE流式细胞荧光标记抗体(BD公司)。方法:①制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链。②构建pU6/shVEGFR2入门克隆。瞬时转染细胞,构建表达克隆Lenti6/shVEGFR2,与ViraPowerTM Packaging Mix共转染到293FTTM细胞中,产生携带表达克隆的慢病毒载体。③pU6/shVEGFR2入门克隆转染和Lenti6/shVEGFR2转导HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制率。④建立HL60白血病模型后观察注入人血管内皮细胞后小鼠骨髓微血管的分布。⑤将NOD/SCID小鼠20只随机分为4组,每组5只:白血病模型鼠组,白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组,白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组及白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组。检测各组小鼠的骨髓细胞CD33表达变化、骨髓微血管密度变化及外周血细胞涂片、肝、脾的肿瘤浸润情况,以了解Lenti6/shVEGFR2重组慢病毒对小鼠白血病的作用。主要观察指标:①VEGFR2siRNA鉴定结果。②pU6/shVEGF
- 郭海霞徐令陈月琴李文益
- 关键词：SHRNA慢病毒白血病基因治疗
