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国家重点基础研究发展计划(2009CB526506)

作品数:4 被引量:2H指数:1
相关作者:王宜强李洪霞张宏波赵格王斌更多>>
相关机构:山东省医学科学院青岛大学济南大学更多>>
发文基金:国家重点基础研究发展计划青岛市科技发展计划项目国家自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇角膜
  • 2篇特异
  • 2篇特异性
  • 2篇特异性免疫
  • 2篇小鼠
  • 2篇免疫
  • 1篇烟曲霉菌
  • 1篇炎性
  • 1篇炎性因子
  • 1篇眼部
  • 1篇眼部真菌感染
  • 1篇原核表达
  • 1篇原核表达载体
  • 1篇增生
  • 1篇增生机制
  • 1篇真菌感染
  • 1篇真菌性
  • 1篇真菌性角膜
  • 1篇真菌性角膜炎
  • 1篇上皮

机构

  • 3篇山东省医学科...
  • 1篇济南大学
  • 1篇青岛大学

作者

  • 3篇王宜强
  • 1篇林丹丹
  • 1篇席海杰
  • 1篇王斌
  • 1篇赵格
  • 1篇张宏波
  • 1篇李洪霞

传媒

  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇国际眼科杂志
  • 1篇Intern...
  • 1篇中华实验眼科...

年份

  • 1篇2013
  • 2篇2012
  • 1篇2011
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE的重组表达及初步活性鉴定被引量:1
2013年
目的原核表达及纯化绿脓杆菌鞭毛蛋白ngE并进行初步活性鉴定。方法分析绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE的基因序列,设计带适当酶切位点的引物,用PCR方法扩增出FlgE的编码DNA序列,与大肠杆菌表达载体pET24a同时经NdeI/Hind Ⅲ双酶切、纯化及连接后构建pET24a—FlgE原核表达质粒,挑选重组阳性质粒经DNA测序确认序列正确,转化至大肠杆菌B121中进行诱导表达条件优化,使重组质粒表达目的蛋白,采用组氨酸标签亲和层析法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE对纯化后蛋白相对分子质量进行鉴定,用试剂盒进行去内毒素化处理。在体外培养人角膜上皮细胞系细胞,加入纯化的F1gE重组蛋白,培养4h后应用实时定量PCR检测各种相关的炎性因子以反映FlgE蛋白活性。结果可用于大肠杆菌表达系统的重组pET24a—F1gE构建成功,其编码的蛋白在BL21中获得高效表达,当诱导剂异丙基一B—D一硫代吡喃半乳糖苷浓度为1mmol/L,在16、225r/min振荡培养20h,诱导目的蛋白表达量最高,经纯化、去内毒素处理和SDS—PAGE鉴定,获得纯化的重组FlgE蛋白。角膜上皮细胞用20μg/ml FlgE处理后,细胞内炎性相关分子IL-6和IL-8的表达量明显上升,而灭活的F1gE蛋白则丧失该刺激活性。结论获得纯化的重组绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE,且可刺激角膜上皮细胞上调炎性因子IL-6、IL-8的表达。
林丹丹赵格王斌王宜强
关键词:绿脓杆菌原核表达载体角膜上皮细胞炎性因子
小鼠角膜抑制白念珠菌增生机制的探讨
2011年
真菌性角膜炎(fungal keratitis,FK)是严重危害视力的感染性角膜病。近年来随着抗生素、糖皮质激素等免疫抑制剂及化疗药物的广泛应用,眼部真菌感染的发病率在我国有逐年增多的趋势,已成为我国重要的致盲性眼病。研究FK发病机制时发现,实验性白念珠菌性角膜炎无需治疗就可以痊愈,其中感染引起的特异性免疫反应发挥着重要作用[1]。
席海杰王宜强
关键词:增生机制白念珠菌感染性角膜病特异性免疫反应小鼠眼部真菌感染
T和B细胞缺陷对真菌性角膜炎发病过程的影响(英文)被引量:1
2012年
目的:探讨特异性免疫应答是否参与真菌性角膜炎(fungalkeratitis,FK)发病早期的病理过程。方法:通过角膜基质内注射1×105白色念珠菌孢子或烟曲霉菌孢子的方法在相同免疫遗传背景的Balb/c小鼠和重症联合免疫缺陷小鼠(severecombinedT/B-nullimmuno-deficiency,SCID)诱导FK。用裂隙灯监测疾病临床变化特征并依据角膜病灶面积和病变深度以及角膜表面规则性进行临床评分。在病变显著的时间点,摘除小鼠眼球用HE和PAS染色观察小鼠角膜组织的病理变化特征。用菌落形成实验检测角膜组织中活菌数量的变化,用ELISA检测小鼠血浆和角膜组织匀浆液中细胞因子IL17、IFNγ和IL10的动态变化。结果:Balb/c小鼠和SCID小鼠都可诱导出典型的FK。在白念菌性角膜炎或烟曲霉菌性角膜炎中,无论是大体临床表现和疾病分数,抑或组织病理变化和真菌负荷分析,在两种小鼠之间均无显著性差异;两种小鼠间在血浆或角膜组织中IL17及IFNγ的水平等方面也没有显着差异。但诱导两种FK的SCID小鼠中,无论角膜匀浆液抑或外周血浆,在任何时间点均检测不到IL10的表达,而同样发生角膜炎的Balb/c小鼠则在FK发病早期检测到IL10的表达。结论:在免疫遗传背景相同的条件下,小鼠中获得性免疫组分的存在与否并不影响FK的发病过程,提示小鼠中初次FK的发病与固有性免疫组分相关。
李洪霞张宏波王宜强
关键词:烟曲霉菌角膜炎SCID小鼠特异性免疫非特异性免疫
Lymphocyte infiltration and activation in iris-ciliary body and anterior chamber of mice in corneal allograft rejection
2012年
AIM: To investigate the infiltration and activation of lymphocyte in iris-ciliary body and anterior chamber after allogenic penetrating keratoplasty (PK), for further revealing the role of iris-ciliary body in corneal allograft immune rejection. METHODS: In the mice models of PK, BALB/C mice received orthotopic isografts (n =35) or C57BL/6 donor allografts (n =25). Grafts were examined daily for 3 weeks by slit-lamp microscopy and scored for opacity. The infiltration of CD4+ T lymphocyte in iris-ciliary body and anterior chamber was examined by immunohistology and the mRNA of CD80 and CD86 in both cornea graft and iris-ciliary body by RT-PCR was analyzed in allograft recipient at days 3, 6, 10 and the day when graft rejection occurred. Isograft recipients were examined as control at the corresponding time points. Transmission electron microscope was used to study the ultrastructure, especially cell infiltration, of iris-cilary body and corneal graft at day 3, 7 and the day when rejection occurred after allogenic PK. RESULTS: Rejection was observed in all the allograft recipients followed more than 10 days, at a median time of 15 days (range 12-18 days), but not in any of isografts. CD4+ T cells were first detected at day 6 after transplantation in limbus and Ciliary body, and then in the stroma of recipient, iris, anterior chamber and corneal allograft with an increased number until graft rejection occurred. CD80 and CD86 mRNA were detected under RT-PCR examination in both graft and iris-ciliary body of allograft recipient, but not in any of isograft recipient. Three days after operation, lymphocytes and monocytes macrophages were visible in iris blood vessels and the anterior chamber, and vascular endothelial cell proliferation and activation were significant under transmission electron microscopy examination. At day 7, corneal endothelial cells became thinner. Lymphocytes and mononuclear macrophages were found with great number in the anterior chamber and adhered to the corneal endothelium. Blood vessels in iri
Fu-Hua WangMin ChenTing LiuXin-Jie ZangHua-Qing GongWei-Yun Shi
关键词:LYMPHOCYTECORNEALPENETRATING
共1页<1>
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