国家自然科学基金(30470524)
- 作品数：13 被引量：65H指数：5
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- 胸段食管癌临床分期与病理TNM分期对比研究被引量：10
- 2008年
- 目的:探讨胸段食管癌临床分期的准确性并结合病理TNM分期进行对比分析。方法:58例可切除胸段食管癌,术前行钡餐造影、胸部CT扫描和腹部超声波检查,根治术后病理均为鳞状细胞癌。病理TNM分期:Ⅱa期28例占48.3%,Ⅱb期2例占3.4%,Ⅲ期27例占46.6%,Ⅳ期1例占1.7%。术前临床分期:Ⅱ期27例占46.6%,Ⅲ期28例占48.3%,Ⅳ期3例占5.2%。采用方差分析和相关性检验统计两种分期的相关性和符合性。结果:术后病理T分期与术前临床T分期的相关性不明显r=0.233,P=0.079;而术后病理N分期与术前临床N分期具有显著性相关r=0.285,P=0.030;病理TNM和临床TNM分期有显著性相关r=0.289,P=0.028。术后病理淋巴结转移者30例占51.7%,术前CT片淋巴结肿大者33例占56.9%,二者具有显著性相关r=0.388,P=0.003。病理TNM分期和临床TNM分期均呈现分期越晚转移淋巴结个数越多,同样钡餐造影的病变长度也随期别越晚,病变长度越长,且有统计学意义。临床T分期与CT片显示的肿大淋巴结个数和术后病理淋巴结转移个数均具有显著性相关r=0.289,P=0.028和r=0.298,P=0.023,然而病理T分期与淋巴结转移并未显示相关性。结论:两种分期系统有一定相关性和符合率,但仍存在较大差距,主要是病变局部T分期在早期病例的符合率较差,内窥镜超声介入可能会有所帮助。
- 祝淑钗沈文斌李娟苏景伟王玉祥李任
- 关键词：食管癌
- 慢病毒介导的RNAi沉默食管癌Eca109细胞MDC1基因表达对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响被引量：1
- 2016年
- 目的 研究抑制MDC1基因的蛋白表达对裸鼠移植瘤的影响,观察裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化。方法 根据MDC1 mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列和阴性对照序列,并与载体pSIH1-H1-copGFP形成重组质粒,RT-PCR和蛋白印迹法测定MDC1 mRNA和蛋白表达水平,筛选出阴性转染组（ECA109-N）、MDC1转染组（ECA109-M）细胞,将其接种裸鼠分为ECA109-M、ECA109-N、ECA109组,上述各组又分为^60Coγ射线照射组和未照射组。观察各组裸鼠移植瘤照射后体积变化,蛋白印迹法检测移植瘤组织中CHK1、CHK2、CHK2T68表达水平,流式细胞仪分析裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和细胞凋亡情况。多组样本均数间的比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果 成功构建pMDC1-shRNA质粒并转染ECA109细胞,获得稳定转染细胞ECA109-M。所有接种裸鼠均成活并在接种后1周左右可见裸鼠爪下形成移植瘤,各组之间肿瘤大小相近（P〉0.05）。15 Gy照射后单纯照射组和空载照射组裸鼠的肿瘤生长速度慢于未照射组（P〈0.05）,其中MDC1转染联合照射组较阴性对照组和空白组肿瘤相对生长速率降低（P〈0.05）,生长抑制率升高（P〈0.05）。MDC1转染联合照射组q值为1.36。MDC1转染联合照射组裸鼠体内CHK1和CHK2的蛋白表达水平相近（P〉0.05）,但CHK2T68磷酸化水平明显降低（P〈0.05）,各组裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和凋亡细胞比例也相近（P〉0.05）。结论 RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可有效增强细胞的放射敏感性,表现为抑制了^60Coγ射线照射后裸鼠移植瘤的生长速度。
- 刘志坤祝淑钗苏景伟李娟沈文斌
- 关键词：裸鼠移植瘤ECA109细胞
- 电离辐射对食管癌细胞周期及MDC1、53BP1蛋白表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察60Coγ射线照射后食管癌细胞周期、细胞凋亡及其相关蛋白表达的变化,为食管癌放射治疗、靶向治疗提供理论依据。方法食管癌细胞株TE-13进行不同剂量(0、1、2、5、10、15Gy)照射后,应用流式细胞术分别检测照射后1、2、12、24和48h细胞周期和凋亡指数的变化;同时采用Western blot方法检测MDC1和53BP1蛋白表达情况。结果TE-13细胞照射后12、24、48h,TE-13细胞的G0/G1期、G2/M期和S期的变化呈现明显剂量依赖性,1Gy和2Gy照射后12h,细胞G2/M期阻滞开始出现;5、10、15Gy照射后24h,细胞G2/M期阻滞最为明显,与对照组(0Gy组)相比,差异具有统计学意义(P<0.05);15Gy照射后12h、24、48h,TE-13细胞的凋亡增加非常显著(P<0.01);不同剂量照射后1、2、24h,TE-13细胞MDC1和53BP1蛋白表达未见明显变化(P>0.05)。结论TE-13细胞经不同剂量放射线照射后,细胞周期出现明显的G2/M期阻滞,细胞凋亡指数明显增加,但对MDC1和53BP1蛋白表达未见明显影响。
- 祝淑钗刘志坤王玉祥杨洁
- 关键词：电离辐射食管癌细胞周期凋亡MDC1
- 慢病毒介导沉默食管癌细胞53BP1基因表达对裸鼠移植瘤放射敏感性的研究
- 2016年
- 背景与目的:p53结合蛋白1(p53 binding protein,53BP1)在多种正常组织和肿瘤细胞中有表达,与放射线照射后细胞周期阻滞有关。体外实验证实抑制53BP1的蛋白表达可有效地消除肿瘤细胞照射后引起的周期阻滞,增加放射敏感性。但体内实验国内尚未见相关报道。该研究旨在探讨沉默食管癌细胞53BP1基因对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法:将48只BALB/c/nu裸鼠按随机数字表法分为对照组、单纯照射组、空载体组、空载体加照射组、沉默53BP1组以及沉默53BP1加照射组,每组8只,于裸鼠皮下接种相应食管癌细胞ECA109,制备裸鼠模型,给予15 Gy放射线单次照射,受照后1 h每组处死3只裸鼠,将肿瘤标本按蛋白[质]印迹法(Western blot)及流式细胞分析要求处理,Western blot检测移植瘤组织中CHK1、CHK2和磷酸化CHK2-T68的表达,流式细胞术分析裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和细胞凋亡。观察各组剩余裸鼠移植瘤照射后的生长情况,移植瘤体积变化情况。结果:所有接种裸鼠均成活并有肿瘤形成,各组之间肿瘤体积大小差异无统计学意义(F=0.67,P=0.69);单纯照射组和空载体照射组裸鼠的肿瘤生长速度慢于未照射组(P=0.02),沉默53BP1加照射组裸鼠的肿瘤生长速度最慢(P=0.03),沉默53BP1加照射组的相对生长速率较空载体加照射组和单纯照射组降低,生长抑制率增加(P=0.01)。沉默53BP1加照射组的q值为1.45;沉默53BP1加照射组裸鼠体内CHK1和CHK2的蛋白表达产物未见明显变化(P=0.71),CHK2-T68的磷酸化水平较单纯照射组和空载体照射组明显下降(P=0.03),各组裸鼠的瘤组织中细胞周期分布和凋亡率差异无统计学意义(P=0.45)。结论:体内研究显示沉默53BP1基因可以提高食管癌放射敏感性。
- 刘志坤张魏丽祝淑钗苏景伟李娟沈文斌
- 关键词：食管癌移植瘤RNA干扰
- CHK1和CHK2在食管癌组织中的表达被引量：10
- 2006年
- 目的观察CHK1和CHK2在食管癌和癌旁不典型增生组织中的表达及其与食管癌单纯放疗疗效的关系。方法采用WesternBlotting方法检测33例胃镜活检标本诊断为食管鳞癌以及12例癌旁不典型增生组织中CHK1和CHK2蛋白表达,分析单纯放疗的疗效及预后相关因素。结果33例食管癌组织和12例癌旁不典型增生组织中CHK1和CHK2蛋白表达量均无明显差别(P>0.05)。33例食管癌病人单纯放疗后1年生存率为61.44%,中位生存期11.5个月;单因素分析显示年龄、食管造影X线病变长度、CT扫描显示病变长度、临床T分期、N分期、近期疗效以及临床分期均与食管癌放疗预后有关(P<0.05);COX多因素分析仅临床分期为独立预后因素;而食管癌组织中CHK1和CHK2表达对预后无明显影响(P>0.05)。结论CHK1和CHK2不能作为判断食管癌放疗预后的指标,而临床分期则是影响食管癌单纯放疗疗效的主要因素。
- 王玉祥祝淑钗王鑫封巍李娟沈文斌
- 关键词：食管癌细胞周期检测点激酶放疗
- 细胞周期检测点激酶CHK1、CHK2与放射敏感性被引量：5
- 2007年
- 细胞周期与恶性肿瘤的发生发展密切相关,目前靶向药物与放射治疗结合已成为放射治疗及放射生物的一大发展趋势,以细胞周期检测点为靶向的放射增敏研究为放射生物发展的一项重要内容。文章就此进行综述。
- 王玉祥祝淑钗
- 关键词：放射生物学细胞周期
- 53BP1介导DNA双链断裂后信号传导机制的研究进展
- 2008年
- 杨洁祝淑钗王玉祥
- 关键词：DNA信号传导
- CHK1和CHK2 shRNA转染对食管癌细胞照射后G_2期阻滞的影响被引量：19
- 2006年
- 目的观察RNA干扰细胞周期检测点激酶CHK1和CHK2表达对食管癌细胞照射后G2期阻滞的影响。方法CHK1和CHK2基因各选择4段序列分别设计合成短发卡状RNA (shRNA),分别与pENTRTM／U6质粒连接后转染Eca109食管癌细胞。采用Western blotting检测CHK1和CHK2蛋白表达,RT-PCR检测其mRNA表达,流式细胞仪检测5 Gy照射后细胞周期变化,克隆法检测5 Gy照射后细胞存活率。结果CHK1和CHK2基因各成功建立4个序列的shRNA连接质粒,转染Eca109细胞后均使其蛋白表达降低。用抑制效果最好的CHK1和CHK2 shRNA转染Eca109细胞后,其mRNA表达下降;在转染后72 h,子一代细胞CHK1和CHK2蛋白仍明显降低,并使5 Gy照射后1 h的CHK2-T68磷酸化水平降低,而对CHK1-S345磷酸化水平无明显影响。CHK1 shRNA转染的Eca109细胞在5 Gy照射后12 h时,明显减轻G2期阻滞程度;转染后72 h和5 Gy照射后12 h,子一代Eca109细胞G2期阻滞仍明显低于单纯5 Gy照射组;而CHK2 shRNA转染不影响照射后G2期阻滞。CHK1和CHK2 shRNA转染可降低5 Gy照射后Eca109细胞存活率。结论shRNA转染对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制效应至少可以持续3 d,且可传递给子代细胞;CHK1 shRNA转染可以减轻Eca109细胞照射后G2期阻滞,增加放射敏感性。
- 王玉祥祝淑钗封巍李娟苏景伟李任
- 关键词：食管癌RNA干扰细胞周期CHK1CHK2
- RNA干扰53BP1基因表达对食管癌放射敏感性的影响被引量：4
- 2012年
- 背景与目的:细胞周期检测点激酶53BP1在细胞周期调控方面发挥着重要的作用,对体细胞的正常生长没有明显的调节作用,但在DNA损伤发生后被激活,引起细胞周期阻滞。本研究利用RNA干扰技术降低食管癌细胞ECA109细胞53BP1基因表达,观察其对放射线照射后细胞周期和放射敏感性的影响。方法:针对53BP1 mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列(siRNAl、siRNA2和siRNA3)和阴性对照序列,与载体pSIH1-H1-copGFP连接形成重组质粒,瞬时转染细胞,实时PCR(real-time PCR)和Western blot检测53BP1的表达,筛选有效干扰序列,与慢病毒包装质粒混合物共同转染293T细胞,收集病毒液,感染ECA109细胞,获得稳定转染细胞系,命名为ECA109/B,转染空载体组命名为ECA109/N。采用real-time PCR和Western blot测定53BP1在mRNA水平和蛋白水平的表达。采用MTT、流式细胞术和克隆形成实验检测RNA干扰53BP1基因对ECA109细胞放射敏感性的影响。结果:成功构建p53BP1-shRNA质粒,3对干扰序列对人53BP1基因的表达在mRNA和蛋白水平显著低于阴性对照组和空白对照组,尤以siRNA1组效果最明显,取干扰效果最好的siRNA1,利用慢病毒包装系统,共同转染293T细胞,收集病毒液,感染ECA109细胞,荧光显微镜下挑取阳性克隆,扩大培养,获得稳定转染细胞株ECA109/B,53BP1基因在mRNA和蛋白表达水平亦低于对照组;MTT结果表明53BP1低表达对细胞的增殖无明显影响,用流式细胞术分析显示5 Gy射线照射后,ECA109/B的G2/M期比例明显低于阴性对照组和空白对照组;克隆形成实验的结果显示ECA109、ECA109/N、ECA109/B细胞的D0值分别为3.06、2.90和2.07 Gy;SF2值分别为0.91、0.89和0.79;Dq值分别为1.59、1.47和1.21,可见ECA109/N、ECA109放射敏感性未见明显差异,而ECA109/B细胞的放射敏感性高于ECA109/N、ECA109。结论:RNA干扰技术可以有效地抑制食管癌细胞ECA109中53BP1基因的表达,从而增强ECA109细胞的放射
- 刘志坤祝淑钗杨洁苏景伟李娟王玉祥沈文斌
- 关键词：细胞周期RNA干扰
- DNA损伤检测点介质1和p53结合蛋白1在人食管癌细胞系TE-1.TE-13.Eca109中的表达及意义被引量：3
- 2007年
- 目的研究DNA损伤检测点介质1(MDC1)和p53结合蛋白1(53BP1)在人食管癌细胞系中的表达及意义。方法采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学法、间接免疫荧光法和Western blotting检测MDC1、53BP1mRNA和蛋白在人食管癌细胞系TE-1.TE-13.Eca109的表达水平。结果RT-PCR结果显示MDC1、53BP1mRNA在所检测的人食管癌细胞系中均有表达;免疫细胞化学法、间接免疫荧光法和Western blotting均在人食管癌细胞系中检测到MDC1、53BP1的蛋白表达。结论首次证实了MDC1、53BP1在食管癌细胞系中的表达,推测MDC1、53BP1可能和食管癌细胞的放射敏感性有关。
- 刘志坤祝淑钗王玉祥
- 关键词：食管癌
