广州市科技计划项目(2010Y1-C981)
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 相关作者：李薇喻良文韦健红龚玲吴文如更多>>
- 相关机构：广州中医药大学广州医学院湖北中医药大学更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 参环毛蚓MT-2基因及启动子的克隆研究被引量：1
- 2016年
- 目的揭示参环毛蚓MT-2基因的转录调控机制,为今后采用基因工程技术改良参环毛蚓重金属富集性状奠定基础。方法根据已知的MT-2c DNA序列,设计特异引物,通过PCR扩增参环毛蚓MT-2基因的编码区基因组序列,扩增产物经测序后自行比对分析。基于该序列设计3条特异引物,采用基因步移技术克隆其上游的启动子序列,同时运用Promoter Prediction在线软件分析预测其顺式元件。结果经PCR扩增、测序后获得2 826 bp MT-2基因编码区序列,将该序列与已知MT-2 c DNA序列(登录号为KC787373.1)进行比对,发现MT-2编码区由4个外显子和4个内含子组成。基因步移技术克隆得到1 534 bp的启动子序列,经Promoter Prediction在线软件分析,结果显示该序列不仅含有TATA-box、CAAT-box等核心启动子软件,还具有3个特异响应重金属参与调控MT-2表达的MRE元件。结论参环毛蚓的MT-2基因能被重金属诱导表达,MT-2基因转录水平的金属调控是通过MT-2基因启动子区的金属调控元件MRE来实现的。
- 张秋凤李薇龚玲黄传奇陈立红
- 关键词：参环毛蚓重金属富集金属硫蛋白转录调控
- 4种重金属对参环毛蚓金属硫蛋白诱导特性的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:通过银饱和分析法研究4种重金属(Cu、Pb、Cd、Zn)对参环毛蚓金属硫蛋白(MTs)的诱导特性。方法:Cu、Pb、Cd、Zn4种重金属诱导参环毛蚓30d后提取其MTs,进行Ag饱和置换,然后使用原子吸收法测量MTs含量。结果:Cd、Pb多在内脏中诱导MTs,Cu对MTs的诱导在肌肉和内脏中都较平均,Zn则更多地在肌肉中诱导MTs。结论:4种重金属对参环毛蚓MTs存在不同的诱导特性。银饱和分析法具有简便、快速、准确的优点,可用于MTs的准确定量。
- 李维李薇吴文如王绪新
- 关键词：参环毛蚓重金属金属硫蛋白
- 重金属镉对参环毛蚓胃肠道上皮细胞超微结构损伤的研究被引量：5
- 2011年
- 目的:研究不同浓度重金属镉离子胁迫下对参环毛蚓胃肠道结构的影响。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒、HE组织切片染色、光学显微镜及透射电镜下观察参环毛蚓胃肠道超微结构损伤的变化。结果:随着镉离子浓度的增加,参环毛蚓的肠道粘膜上皮细胞有大量溶酶体增生,高尔基复合体增生、扩张呈大泡状,微绒毛、纤毛排列不整齐、紊乱,当镉离子浓度达到30mg/kg时,参环毛蚓肠粘膜上皮细胞微绒毛出现萎缩,纤毛细胞出现溃疡坏死病灶,核膜解体、核质外溢,最后导致坏死。结论:参环毛蚓胃肠道粘膜上皮细胞超微结构的受损程度,是随土壤重金属的污染量而定。在较低重金属浓度条件下,参环毛蚓肠上皮细胞是以溶酶体增生、存积一定量的重金属元素的方式来应对其毒害作用,也可视为肠上皮细胞对有毒异物的一种应答反应,为可逆性损伤;而在较高重金属浓度条件下,肠上皮细胞是以微绒毛和线粒体损伤为主,核膜解体、核质外溢,最后导致坏死,为不可逆性损伤。由此推断,参环毛蚓对重金属的高耐受性或富集作用是通过其肠上皮细胞的这种特性来实现的。
- 吴波李薇付玉梅喻良文彭杰张惠球
- 关键词：镉污染参环毛蚓超微结构
- 基于COⅠ与16S rRNA基因对广地龙的DNA分子鉴定研究被引量：19
- 2012年
- 目的:建立一种快速、准确和标准化的广地龙DNA分子标记鉴别方法。方法:测定了5个不同居群广地龙的线粒体细胞色素酶亚单位(CO)Ⅰ和16S rRNA基因序列,采用CodonCode Aligner进行序列拼接,通过下载GenBank地龙原动物的COⅠ与16S rRNA序列,采用MEGA4.1计算广地龙及其伪品地龙的种内、种间的K2P遗传距离,并基于K2P模型构建NJ和MP树。结果:COⅠ变异位点、信息位点均高于16SrRNA,COⅠ基因无插入和缺失,16S rRNA存在4个插入和缺失。COⅠ和16S rRNA序列种间遗传距离均明显大于种内,COⅠ和16S rRNA基因均能将广地龙从其他地龙或蚯蚓物种鉴别开来。结论:获得的广地龙COⅠ和16S rRNA序列可为动物性中药材地龙的分子水平鉴定提供参考,为动物性中药材DNA条形码数据库积累了相关信息数据。
- 韦健红李薇吴文如喻良文
- 关键词：地龙RRNA
- 广地龙药材DNA提取方法的优选被引量：3
- 2014年
- 目的建立一种适合于广地龙干燥药材DNA的提取方法。方法参考陈旧皮张标本的DNA提取方法,并对样品预处理、酶解条件、沉淀时间等对影响DNA质量的重要因素,进行了筛选和优化。结果按优选的方法提取的总DNA的含量和纯度完全符合引物扩增分析的要求。结论该提取方法不仅解决了地龙类动物干燥药材DNA提取的难题,而且操作简便实用、DNA提取效率高,所得DNA的质量也满足后期DNA分子鉴定。
- 马梅李薇龚玲卢瑞珊韦健红
- 关键词：DNA提取PCR
- 金属硫蛋白在参环毛蚓不同组织中的表达研究被引量：1
- 2012年
- 目的:研究金属硫蛋白(MT)在参环毛蚓不同组织中的表达。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,进行HE组织切片染色和免疫组化反应,并在显微镜下观察MT在参环毛蚓体内的分布。结果:在参环毛蚓表皮层和肌肉层均未发现明显的MT表达,而在其肠道的黏膜下腺细胞质之间均有明显的棕黄色斑点,且随着镉浓度的增加,MT的表达越来越强。结论:MT主要在参环毛蚓的肠道中表达,参环毛蚓对重金属的富集是通过肠上皮细胞来完成。
- 吴波李薇江庆萍喻良文张惠球
- 关键词：参环毛蚓免疫组化金属硫蛋白
- 参环毛蚓细胞原代培养灭菌方法的研究被引量：3
- 2011年
- 【目的】选择最佳灭菌方法,建立参环毛蚓细胞原代培养实验体系。【方法】通过4因素和3水平的正交试验法考察不同浓度比例抗生素组合液对参环毛蚓细胞的灭菌效果,比较不同抗生素种类和浓度对参环毛蚓细胞原代培养的影响。【结果】以抗生素组合液200 U/mL青霉素钠+400μg/mL硫酸链霉素+300 U/mL硫酸庆大霉素+5μg/mL两性霉素B对组织块的灭菌效果最佳,10 d污染率为0%,且细胞能保持较好活性,并贴壁生长。【结论】组合式灭菌法是参环毛蚓细胞原代培养的最佳有效灭菌方法,且操作简捷易行。
- 林小桦李薇侯雪芹李巧容韦健红李维
- 关键词：参环毛蚓细胞培养灭菌
- 参环毛蚓肠上皮细胞重金属镉离子的耐受性研究
- 2014年
- 【目的】观察参环毛蚓肠上皮细胞(IEC)对重金属镉离子(Cd2+)的耐受能力,探讨其耐受特性与广地龙药材重金属超标的相关性。【方法】采用不同浓度Cd2+对参环毛蚓IEC进行胁迫处理,分别利用台盼蓝染色法和噻唑蓝法测定细胞死亡率和细胞活力,并借助显微镜观察与比较参环毛蚓IEC胁迫处理前后的形态变化。【结果】IEC对Cd2+的耐受特性主要表现为:①未经孵育时IEC可耐受Cd2+的最高浓度为8μmol/mL;②胁迫处理24 h后IEC可耐受Cd2+的最高浓度为6.25×10-2μmol/mL;③胁迫处理48 h时,IEC可耐受Cd2+的最高浓度为3.125×10-2μmol/mL,上述3个浓度分别是《中华人民共和国药典》(2010年版)中地龙项下镉限量指标的2 997.33、23.33和11.66倍;④IEC对Cd2+的耐受性在一定的时间范围内与剂量呈负相关。【结论】参环毛蚓IEC对重金属Cd2+具有较高的耐受性。Cd2+对IEC的毒性作用不是接触性的损伤,而有可能是产生于细胞代谢过程中。
- 卢瑞珊李薇李菁龚玲马梅
- 关键词：参环毛蚓肠上皮细胞镉离子耐受性
