长江学者和创新团队发展计划(PCSIRT1227)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
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- 贵州齿兰环斑病毒的分子鉴定被引量：7
- 2014年
- 为有效地控制贵州兰花的病毒，将经ELISA方法检测为齿兰环斑病毒（ORSV）阳性的蝴蝶兰样品摩擦接种至其枯斑寄主苋色藜进行纯化，RT-PCR 克隆并连接至 pMD18-T 载体后测序，用 DNA-MAN7．0和MEGA5．0软件进行核苷酸序列分析。结果表明：成功克隆该病毒CP基因，其序列长度为477 bp，编码158个氨基酸残基；序列同源性分析显示，该分离物的CP基因与已报道的11种ORSV各地分离物序列同源性高达96％～99％，而与同属其他3种病毒CP基因同源性均低于70％。证明，贵州蝴蝶兰上感染的病毒为 ORSV。
- 万晴姣李欲轲马骏乙引洪鲲
- 关键词：齿兰环斑病毒外壳蛋白分子鉴定
- 乙醇提取及重结晶法制备辣椒总碱被引量：2
- 2014年
- 为了建立从辣椒中提取并通过重结晶获得高纯度辣椒总碱的方法,以花溪朝天椒干粉为原料,采用单因素试验考察了有机溶剂提取法中乙醇浓度和固液比等对提取率的影响,摸索了后续纯化过程中碱溶解-乙酯萃取辣椒碱的最适pH和辣椒碱的结晶条件。结果表明:用95%乙醇、1:10(m/V)的固液比、80℃回流2 h,可达到3.7 mg/g(辣椒总碱/辣椒粉)的提取率;在pH 9.0时用乙酸乙酯萃取辣椒碱的NaOH皂化液可获得较高的辣椒碱纯度和回收率;在实验条件下,该萃取物在甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿及石油醚等溶剂中均未结晶,而在乙醚中于-20℃重结晶3次得到纯度为96.4%(HPLC法测定)的辣椒总碱,达到美国药典24版(USP24)中的相关要求。
- 龚记熠王希杨立昌乙引洪鲲
- 关键词：重结晶HPLC
- 齿兰环斑病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2019年
- 采用RT-PCR法从感染齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)贵州分离物的苋色藜叶片中扩增出病毒的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列。测序结果显示,该保守片段长516bp,编码171个氨基酸残基。构建了该片段的原核表达载体pET32a-ORSV RdRp并转化BL21(DE3)菌株,在25℃以0.4mmol·L^(-1)IPTG诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为36 kDa,与预测相符合。将该重组蛋白作为抗原免疫BABL/C小鼠,制备的多克隆抗体效价达1∶102 400。间接ELISA结果表明,该多抗具有较强的特异性,能检测到ORSV感染的病叶汁液中的RdRp,而与其它感染4种同属或不同属病毒的病叶汁液不发生血清学交叉反应,本实验为进一步研究RdRp的结构和功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定基础。
- 万晴姣刘倩刘倩龚记熠张宇斌张宇斌洪鲲
- 关键词：齿兰环斑病毒RDRP原核表达多克隆抗体
- 辣椒轻斑驳病毒cp基因的原核表达及抗血清制备
- 2017年
- 辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)属于烟草花叶病毒属,是辣椒的重要病毒种类之一。将PMMoV的外壳蛋白(cp)基因克隆至原核表达载体pET32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组PMMoV CP蛋白以可溶形式表达,纯化后获得分子量约35 kDa的融合CP蛋白。以该重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备了PMMoV CP特异性抗血清。Western blot检测结果表明该抗血清与重组CP蛋白发生强烈的免疫反应,间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)结果显示该抗血清针对重组CP蛋白的效价达1∶25 600,针对PMMoV病汁液的效价达1∶4 000,检测灵敏度为1∶3 200,且该抗血清不与PMMoV同属或不同属的其它6种病毒汁液发生免疫反应,具有较好的特异性。利用该抗血清对42份田间辣椒病样进行检测,阳性率达38%,与进口商品化试剂盒检测结果一致,说明该抗血清可用于PMMoV的ELISA诊断。
- 洪鲲郑兴华郑兴华龚记熠乙引万晴姣
- 关键词：辣椒轻斑驳病毒外壳蛋白原核表达抗血清
- 马铃薯X病毒外壳蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2017年
- 采用RT-PCR技术从感染马铃薯X病毒贵州分离物PVX-GZ的普通烟叶片中扩增出该病毒的外壳蛋白基因CP。测序结果表明,该CP基因全长714 bp,编码237个氨基酸残基。构建原核表达载体p ET32a(+)-CP,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在25℃条件下以0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-Dthivgalactopyranoside,简称IPTG)诱导表达重组蛋白基因;SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为45 ku;以该重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备的抗体效价达1∶12 800;间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunsorbent assay,简称ELISA)检测显示,该多抗能与PVX病叶汁发生特异性免疫反应,而与其他5种同属或不同属病毒叶汁无血清学交叉反应。结果为病毒血清学检测试剂盒的研发奠定了基础。
- 万晴姣李欲轲姚东校姚东校洪鲲
- 关键词：马铃薯X病毒外壳蛋白原核表达多克隆抗体CP基因RT-PCR技术
- 茅台酒厂生态功能区4种优势树种光合特征比较被引量：1
- 2014年
- 以茅台酒厂生态功能区4种优势树种为材料,通过光合作用系统仪测定夏、冬两季光合作用日变化,进而评价树种对环境的适应性。结果表明,各树种上午的净光合速率(Pn)高于下午,暗呼吸速率(Rd)和光能利用率(LUE)无明显变化规律;对Pn日均值而言,在夏季,青冈栎显著高于箬竹、复羽叶栾树和构树,而在冬季,复羽叶栾树显著高于青冈栎、箬竹和构树;从夏冬两季总的Pn来看,青冈栎最高(6.90μmol/(m2·s)),构树最低(2.34μmol/(m2·s));复羽叶栾树的总Rd显著高于青冈栎、箬竹和构树,而青冈栎的总LUE最低。根据几个光合生理参数指标,该地区几种优势树种的适应能力表现为青冈栎>复羽叶栾树>箬竹>构树。
- 张习敏申刚陈玲张宇斌乙引
- 关键词：光合作用优势树种生态系统自然植被
- 辣椒三种病毒的多重RT-PCR同步检测被引量：2
- 2017年
- 本研究根据辣椒轻斑驳病毒(PMMo V)、烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白(CP)编码序列设计了3对PCR检测引物,并初步建立了同步检测以上3种辣椒病毒的多重RT-PCR方法。以被感染了3种病毒的叶片的总RNA作为模板,可同时扩增到324 bp(TMV)、220 bp(PMMo V)和112 bp(CMV)的3个目标条带,在电泳图上清晰可辨。测序结果表明所扩增产物确为待检病毒靶序列。除阳性对照外,该多重RT-PCR体系不对ORSV、PVX和PVY等同属或不同属的其它病毒发生反应;该体系可检测到104倍稀释的病毒c DNA模板。同时,以建立的三重RT-PCR法对10份田间辣椒病样进行检测,其结果与单重RT-PCR结果一致,说明该法检测结果可靠,可用于PMMo V、TMV和CMV 3种辣椒病毒的同步检测。
- 丁超李欲轲刘倩万晴姣乙引洪鲲
- 关键词：辣椒病毒检测多重RT-PCR
- 建兰花叶病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2017年
- 采用RT-PCR技术扩增出建兰花叶病毒贵州分离物(CyMV-GZ)的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列。测序结果表明:该RdRp基因序列长735 bp,编码245个氨基酸残基。构建原核表达载体pET32a(+)-RdRp,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃以0.3 mmol·L^(-1) IPTG诱导表达分子量约49 kDa重组蛋白。以该重组蛋白为抗原免疫小鼠,制备的抗体效价达1∶204 800。间接ELISA检测显示该多抗与CyMV病叶汁发生特异性免疫反应,而与其他6种同属或不同属病毒叶汁无血清学交叉反应。本实验为进一步研究RdRp的功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定了基础。
- 万晴姣吴正强李欲轲乙引龚记熠刘倩洪鲲
- 关键词：建兰花叶病毒RDRP原核表达多克隆抗体
