国家自然科学基金(30470757)
- 作品数：12 被引量：38H指数：4
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- 支架蛋白IQGAP1-细胞黏附和迁移的关键纽带被引量：1
- 2007年
- 支架蛋白IQGAP1发现能与许多重要的细胞活动紧密相关,如黏附和迁移。研究发现在损伤修复、组织发展、肿瘤转移等过程中,IQGAP1的表达和功能有明显改变。同时作为Rho GTPase信号的主要效应因子,IQGAP1能传递细胞外信号至黏附素复合体、细胞骨架以及细胞核。通过上述信号通路,IQ-GAP1协助细胞完成一系列重要生理病理活动。
- 汪永平吴人亮
- 关键词：细胞黏附细胞迁移
- β-连环素及相关蛋白在脂多糖致急性肺损伤小鼠气道上皮的表达被引量：4
- 2007年
- 目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)时β-连环素(-βcate-nin,-βcat)在气道上皮细胞的表达变化及其意义。方法在建立LPS气管注射致小鼠急性肺损伤模型基础上,应用免疫组织化学染色检测-βcat、糖原合成酶激酶3-β(GSK3-β)在气道上皮的表达;应用Western blot检测肺组织内蛋白激酶C(PKC)、GSK3-β、磷酸化GSK3-β(P-GSK3-β)以及-βcat蛋白的表达。结果免疫检测显示,与正常组小鼠相比,LPS致急性肺损伤的小鼠气道上皮中,胞膜上-βcat及胞质内GSK3-β蛋白含量均明显降低(均P<0.05);Western blot检测显示,肺组织内PKC、P-GSK3-β及-βcat蛋白含量均较正常组小鼠明显升高(均P<0.05),而GSK3-β蛋白含量显著下降(P<0.05)。结论由LPS所致的小鼠ALI,一方面引起胞膜上行使连接功能的-βcat含量显著下降;另一方面可能通过PKC激活、GSK3-β磷酸化失活,导致胞质内-βcat含量的增加,使-βcat转入核内并与转录因子结合,启动Wnt途径靶基因转录,从而在气道上皮的损伤修复中发挥重要作用。
- 洪渊智李娜萍吴人亮刘明阁马燕
- 关键词：急性肺损伤Β-连环素WNT信号途径蛋白激酶C糖原合成酶激酶3
- 糖原合成酶激酶3的调节与功能被引量：13
- 2006年
- 糖原合成酶激酶3(glycogensynthasekinase3,GSK3)是一种丝/苏氨酸磷酸激酶,它涉及多条信号传导途径,是许多细胞学过程和疾病的关键因素。磷酸化,蛋白复合物形成以及亚细胞定位可精细调节GSK3的活性水平,从而控制其在细胞结构、生长、运动性以及凋亡等方面的作用。文章综述了其分子生物学特征和调节、在细胞学过程中的功能及与疾病的关系。
- 李建莎吴人亮
- 关键词：糖原合成酶激酶3凋亡
- IQGAP1对甲醛致小鼠气道上皮损伤修复作用被引量：1
- 2008年
- 目的探讨包含IQ序列的三磷酸鸟苷酶(GTP)激活蛋白1(IQGAP1)和细胞分裂周期42蛋白(Cdc42)在气道上皮细胞损伤修复不同阶段的作用。方法选用健康昆明种小鼠24只,5 mg/m3气态甲醛,染毒4 h/d,分别染毒3,7和60 d后处死,采用免疫组织化学染色、蛋白印迹(Western blot)检测和免疫荧光共聚焦成像方法,观察IQ-GAP1和Cdc42蛋白在染毒小鼠气道上皮细胞损伤修复过程中的表达和定位变化。结果IQGAP1在染毒3和7 d时表达明显增强(P<0.01),60 d时恢复至对照组水平;Cdc42蛋白在染毒3 d时表达明显减弱(P<0.01),7 d时表达有所恢复。对照组中IQGAP1主要定位于气道上皮细胞的胞膜处,而Cdc42蛋白弥散分布于气道上皮细胞(AECs)胞质中;3 d和7 d时共同定位于细胞极化前缘;60 d时其定位与对照组相似。结论Cdc42蛋白和IQGAP1在气道上皮细胞损伤修复过程中的表达及定位呈动态变化,提示其在这一过程中发挥着重要作用。
- 葛荣朱晓蔚李娜萍吴人亮
- 关键词：气态甲醛气道上皮
- APC蛋白、GSK3β在吸烟小鼠气道上皮损伤修复中的动态变化被引量：5
- 2006年
- 为了探讨结肠腺瘤性息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)蛋白、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)在吸烟致气道上皮细胞(airway epithelial cell,AEC)损伤修复中的作用,本实验建立了吸烟导致AEC损伤修复的小鼠模型,采用HE染色、免疫组织化学染色、免疫荧光共聚焦成像和Western blot方法,观察损伤修复过程中APC蛋白、GSK3β在AEC中表达及分布的动态变化。结果显示：(1)随着吸烟时间延长,AEC形态学上呈现损伤(1、4周)、修复(8周)、再损伤(12周)的变化。(2)免疫组化染色显示：AEC中APC蛋白表达在吸烟1周时较对照组明显增强,4周时较对照组明显减弱,8、12周时均较4周时增强但与对照组无差异；对照组GSK3β表达较强,吸烟组表达较对照组均减弱。Western blot检测小鼠肺组织中APC蛋白、GSK3β的表达变化与免疫组化结果一致,磷酸化GSK3β(p-GSK3β)在吸烟组的表达较对照组均有不同程度增高,尤以吸烟1周时明显。(3)荧光共聚焦成像显示：对照组APC蛋白在AEC胞质内均匀分布,吸烟1、8周时APC蛋白定位发生改变,呈簇状聚集于AEC腔面和侧面质膜下；GSK3β在对照组和吸烟组AEC胞质内均匀分布,无定化改变。由上述结果可见,吸烟致小鼠AEC损伤修复过程中APC蛋白表达及在胞质内分布呈动态变化,同时伴有GSK3β表达下调和磷酸化水平增高,提示二者可能通过参与修复过程中细胞迁移、分裂增殖等活动,在气道上皮损伤修复过程中发挥重要作用。
- 刘明阁李娜萍吴人亮马燕洪渊智田丹朱敏
- 关键词：糖原合成酶激酶3Β吸烟气道上皮
- 支架蛋白IQGAP1参与气道上皮细胞损伤修复过程(英文)
- 2008年
- 气道上皮损伤修复过程包括细胞延伸、迁移和增殖。IQGAP1（IQ domain GTPase-activating protein1）是一个在许多细胞生命活动中非常有意义的蛋白，但其在肺上皮细胞中的作用尚未阐述清楚。本文采用目前广泛应用的刮伤气道上皮细胞的体外模型来研究IQGAP1的功能。结果显示，IQGAP1在小鼠、大鼠、猪和人气道上皮细胞中有丰富表达。它与微管骨架共定位，可被微管解聚剂nocodazole破坏。刮伤6-9h后，IQGAP1 mRNA及蛋白表达上调。过表达外源性IQGAP1导致β-catenin核转位，从而活化Tcf／Lef信号。此外，刮伤还影响IQGAP1与β-catenin、结肠腺瘤病（adenomatous polyposis coli，APC）蛋白及细胞质连接蛋白-170（cytoplasmic linker protein-170，CLIP-170）之间的相互作用。通过小于扰RNA（small interference RNA，siRNA）沉默IQGAP1表达则明显延迟损伤愈合。结果提示，IQGAP1信号参与气道上皮细胞损伤修复过程。
- 汪永平王芳王满香朱敏马燕吴人亮
- 关键词：IQGAP1气道上皮细胞
- 细胞质连接蛋白-170在小鼠气道上皮损伤修复过程中的动态变化
- 2007年
- 目的观察细胞质连接蛋白-170(cytoplasmic linker protein-170,CLIP-170)在小鼠气道上皮损伤与修复过程中的表达及分布变化。方法36只小鼠分为:①博莱霉素(BLM)刺激组30只,经气管插管灌注5 mg/kg体重BLM复制小鼠气道上皮损伤模型,于实验第1、4、7、14、28天分别处死6只;②正常对照组6只,同等条件下气管插管灌注生理盐水,于实验第7天处死。观察各组小鼠气道上皮的病理变化;免疫组织化学SP法染色观察CLIP-170在小鼠气道上皮损伤修复过程中的表达和分布变化;Western blot检测各组小鼠肺组织CLIP-170蛋白水平的变化;免疫荧光双标记和共聚焦显微镜技术观察CLIP-170与微管蛋白的共定位关系。结果与对照组比较,CLIP-170的表达在气道上皮急性损伤后有明显上升趋势(P<0.01),随修复进程其表达有所下调,但差异无显著性意义(P>0.05),在肺纤维化时再次增加(P<0.01)。CLIP-170定位于气道上皮细胞胞质内,与微管蛋白有共定位关系。结论CLIP-170在气道上皮损伤后表达增强且与微管蛋白共定位,在小鼠肺气道上皮损伤后修复过程中可能起重要作用。
- 马燕李娜萍吴人亮刘明阁洪渊智朱敏田丹
- 关键词：气道上皮
- GSK3β在几种气道上皮损伤模型中的表达
- 2007年
- 目的观察糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)在气道上皮细胞(airway epithelialcells,AECs)损伤修复中的变化。方法利用吸烟/香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)、脂多糖(lipopolysacchor-id,LPS)和博来霉素(bleomycin,BLM)刺激分别建立几种体内、外气道上皮损伤模型,采用免疫细胞荧光、共聚焦成像和Western blot方法,观察GSK3β在几种不同损伤模型中的表达变化。结果①荧光共聚焦成像:GS3β在对照组小鼠AECs胞质内呈均匀分布的红色荧光颗粒,而吸烟、LPS和BLM三种体内模型中AEC胞质内红色荧光均明显减弱;免疫细胞荧光:GSK3β在对照组AECs胞质内呈强阳性均匀分布的红色荧光颗粒,而CSE、LPS、BLM刺激后的三种体外模型GSK3β在胞质内红色荧光均明显减弱。②Western blot:在体内模型中,吸烟组、LPS刺激组及BLM刺激组GSK3β表达均低于对照组,其中吸烟1w、LPS刺激1d、BLM刺激7d时表达最低(P≤0.05);而P-GSK3β均高于对照组,其中吸烟1w、LPS刺激7d和14d达到高峰(P<0.05)。在体外模型中,以上三种刺激均可导致抑制性磷酸化GSK3β的水平升高并呈浓度依赖性(P<0.05),而GSK3β表达则完全相反,随着浓度的升高趋势越明显(P<0.05)。结论吸烟/CSE,LPS、BLM刺激致AEC损伤修复过程中伴有GSK3β表达的活性改变,提示其在损伤修复中发挥重要作用。
- 朱敏马燕李娜萍李建莎汪永平王满香王芳吴人亮
- 关键词：GSK3Β气道上皮
- GSK3在人、鼠、猪的肺组织及培养的猪支气管上皮细胞中的表达被引量：6
- 2005年
- 目的探讨GSK3在动物肺组织及培养的猪支气管上皮细胞中的表达。方法用免疫组化,免疫细胞荧光法检测GSK3在人、大鼠、小鼠和猪的肺组织及培养的猪支气管上皮细胞中的表达。结果GSK3α和β广泛表达于人、鼠和猪的肺组织中,定位于胞浆。它们在几种动物肺组织中的表达分布大致相似,主要见于各级支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、粘膜平滑肌细胞和粘膜下腺体。但GSK3α在软骨细胞中表达明显强于GSK3β;几种哺乳动物肺组织中均未检测到GSK3的磷酸化。免疫荧光检测培养的猪支气管上皮细胞中有丰富的GSK3α、β的表达,磷酸化的GSK3信号弱。结论GSK3α、β丰富表达于不同种属哺乳动物肺组织的支气管上皮、腺体以及肺泡上皮,提示其可能在肺组织的生理功能和病理发生机制中起着重要作用。
- 田丹王曦陈文书吴人亮
- 关键词：GSK3肺组织
- 糖原合酶激酶3β和腺瘤性结肠息肉病蛋白在气道上皮细胞机械损伤修复过程的时空分布被引量：7
- 2007年
- 为了探讨糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)和腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposis coli, APC)蛋白在气道上皮细胞(airway epithelial cells,AECs)损伤和修复中的作用,我们采用机械划线损伤的方法建立体外气道上皮损伤修复模型,采用Western blot、免疫荧光双标共聚焦成像和免疫沉淀的方法观察损伤修复过程中APC蛋白和GSK3β在AECs中表达及分布的动态变化。结果显示:(1)用Western blot方法观察到划线损伤0．5 h后即有GSK3β磷酸化增强(P< 0．05),6 h达到高峰(P<0．05),持续到12 h(P<0．05),24 h开始下降,而GSK3β总量大致保持一致。(2)在免疫荧光双标共聚焦成像实验中,划线损伤0 h组APC蛋白主要表达于胞浆,而划线损伤6 h后APC蛋白主要聚集于损伤前沿区的迁移活跃细胞。(3)免疫共沉淀的实验结果显示,划线损伤0 h时GSK3B和APC蛋白能共同沉淀,但在划线损伤6 h之后,两者发生了分离。以上结果表明:划线损伤后AECs立即启动修复过程,此时GSK3B的活性被抑制,促使APC蛋白游离出来;游离出来的APC蛋白则与微管正极结合,增加了微管的稳定性,从而调节细胞骨架运动,促进气道上皮的损伤修复。
- 朱敏李建莎田丹马燕李娜萍吴人亮
- 关键词：糖原合酶激酶3Β气道上皮细胞
