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猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2014年; 以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)作为抗原免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后,通过聚乙二醇方法进行融合,利用有限稀释法在HAT培养基上筛选杂交瘤细胞,共获得12株既能稳定生长并可以分泌特异性抗TGEV的单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为8D2、4H4、5D6、7H10、4C3、9G1、3A2、8G1、5G6、2D7、4D6、6B10。间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光结果表明,获得的12株单抗能特异性识别TGEV,通过间接ELISA做病原检测,显示12株单抗与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PrV)不发生交叉反应。经抗体亚类鉴定,该12株单克隆抗体均为IgG2b。12株抗TGEV的单抗制备成功,为猪传染性胃肠炎病原特性研究和病原快速检测提供了物质基础。; 张煜迎于洁唐丽杰李一经; 关键词：TGEV 间接ELISA BLOT 间接免疫荧光

双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV被引量：9: 2015年; 用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为1:800包被37℃1 h加4℃12 h,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:2 000作用45 min,以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为5×103.67TCID50/m L,并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品,结果显示,ELISA阳性检出率为39.6%,而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点,可用于PEDV快速检测。; 李一经刘博姜艳平崔文唐丽杰乔薪瑗刘敏; 关键词：猪流行性腹泻病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA

PEDV地方流行毒株S1基因的遗传变异分析及HLJ-2012株免疫原性检测被引量：5: 2014年; 为探讨猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）再次爆发原因，对现阶段黑龙江省和内蒙古自治区的10株猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）流行毒株S1基因进行扩增、克隆和序列测定，通过序列比对分析其遗传演化特点。选择其中一株毒株进行中和试验，对其免疫原性做初步分析。结果表明，10株PEDV的S1基因与参考毒株相比，核苷酸同源性为86.8%-99.7%；且S1基因均存在点突变、碱基插入及缺失的情况；构建的系统发育树表明PEDV毒株在S1基因水平上共分为两个群，本试验中的10株均处在G1群，与2011-2012年3株其他地区毒株CH/SDQD/2011、CH/HBQHD/2011和HuN亲缘关系较近，而与G2群中的经典毒株CV777及我国以往报道过的LJB/03等亲缘关系较远；通过中和试验，判断出新发毒株HLJ-2012对传统毒株LJB/03具有一定的中和效应，中和效价为1？？53.83。; 李一经张博唐丽杰姜艳平陈佩佩; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S1基因

猪传染性胃肠炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：9: 2013年; 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的快速检测方法,本研究以抗TGEV N蛋白单克隆抗体(MAb)为包被抗体,纯化的抗TGEV N蛋白多克隆抗体(PcAb)为检测抗体建立了TGEV双抗体夹心ELISA方法,优化其反应条件为:抗TGEV N蛋白MAb包被浓度为0.4μg/mL,抗TGEV N蛋白PcAb和酶标二抗的工作浓度分别为3.5μg/mL和1∶5 000,以P/N>2,同时OD490nm≥0.316作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,与猪流行性腹泻病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪轮状病毒等无交叉反应。对22份临床猪粪便样品RT-PCR的阳性检出率为31.8%;ELISA的阳性检出率为22.7%,二者符合率达81.8%,结果表明本研究建立的双抗体夹心ELISA方法检测TGEV具有较高的特异性和敏感性,可以用于TGEV的病原学检测。; 屈月葛俊伟唐丽杰乔薪瑗姜艳平尹光昕李一经; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体高免血清

猪腹泻相关病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：8: 2014年; 为建立同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRV)的多重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的PEDV S基因、TGEV S基因和PRV VP6基因序列设计合成引物,利用这3对引物对同一样品中的PEDV、TGEV、PRV进行多重RT-PCR扩增,结果显示,该方法可以同时扩增PEDV(682 bp)、TGEV(480 bp)和PRV(297 bp)的特异性DNA片段,而对猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的PCR扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,该多重RT-PCR方法对PEDV、TGEV和PRV的最低检出量分别为3.3×103拷贝/μL、3.2×103拷贝/μL和2.8×103拷贝/μL。利用建立的多重RT-PCR检测方法和单项RT-PCR对20份临床病料进行检测,结果显示,两者的总符合率为100%。结果表明建立的多重RT-PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可以用于这3种病毒的同时检测和疾病的鉴别诊断。; 吴洋杜彩虹张博唐丽杰乔薪瑗姜艳平李一经; 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪轮状病毒

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国家高技术研究发展计划(2012AA101304-3)