北京市科技新星计划(2008B53)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：孙晓艳刘惠玲付小兵李美蓉伍志强更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院中国医学科学院输血研究所更多>>
- 发文基金：北京市科技新星计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 碱性成纤维细胞生长因子对表皮细胞中端粒酶反转录酶表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察表皮细胞去分化过程中人端粒酶反转录酶(hTERT)的表达差异及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法采用bFGF诱导表皮细胞去分化形成表皮前体干细胞,免疫细胞化学染色法检测bFGF诱导培养后表皮细胞表型的改变,并用流式细胞法、免疫荧光染色及TRAP-银染法检测bFGF诱导培养后表皮细胞中hTERT的表达差异。以同等条件下未经bF-GF处理的人表皮细胞为对照组,同期分离培养的人在体表皮干细胞为阳性对照组。结果免疫细胞化学染色显示,bFGF诱导培养后表皮细胞中β1-integrin、CK19、CK14表达明显增强,而CK10表达明显降低。流式细胞仪检测显示,bFGF诱导后实验组、对照组及阳性对照组hTERT阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的98.41%、0.77%及99.76%。TRAP-银染法检测显示实验组hTERT表达活性明显上调,且与阳性对照组比较无显著差异。间接免疫荧光染色显示实验组去分化来源表皮干细胞和在体表皮干细胞中的hTERT分布存在着亚细胞位点差异。结论 bFGF可诱导表皮细胞去分化并重新获得表皮干细胞的表型,这一过程不但可引起hTERT的表达及活性改变,而且能从亚细胞水平上诱导其发生位点迁移。
- 孙晓艳刘惠玲付小兵
- 关键词：去分化成纤维细胞生长因子2
- 6-氨基己酸激活人表皮干细胞中Oct4基因的表达被引量：1
- 2011年
- 目的摸索并建立表皮干细胞Oct4基因的非转基因诱导方法。方法采用RT-PCR方法 ,检测经6-氨基己酸刺激48h后表皮干细胞Oct4基因的转录水平。结果 6-氨基己酸能有效激发表皮干细胞Oct4基因的转录。结论 RT-PCR方法检测表皮干细胞Oct4基因转录水平变化的准确度高、重复性好,实验步骤简单,是初步筛选诱导基因转录表达小分子化合物的实用方法 。
- 刘惠玲伍明俊陈美霞李美蓉伍志强赵亚力韩为东孙晓艳
- 关键词：6-氨基己酸表皮干细胞OCT4
- 去分化来源表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的差异分析被引量：3
- 2010年
- 目的:比较去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的异同点。方法:采用碱性成纤维细胞诱导因子(bFGF)诱导表皮细胞去分化形成表皮干细胞;由人包皮分离、培养在体表皮干细胞。采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、细胞染色体核型检测技术及逆转录一聚合酶链式反应法(RT-PCR)观察去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞之间细胞表面标志蛋白表达、细胞亚群及染色体核型等方面的差异。结果:免疫细胞化学染色结果表明,去分化来源的表皮干细胞能够表达表皮干细胞及其亚群特异性的表面标志蛋白,如β1整合素、角蛋白19(CK19)、CK14等,而CK10的表达为阴性。流式细胞技术检测结果显示去分化来源的表皮干细胞及在体表皮干细胞中a6’CD71一、a6’。CD71+及CD71表达阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的22.8%、68.14%、0及45.39%、33.11%、0.02%。细胞染色体核型检测分析结果显示去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞的染色体均为23对、46条,核型正常。此外,RT-PCR检测结果表明去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞中β1整合素、CK19、CK14及CK10的mRNA表达水平差异无显著性。结论:去分化来源的表皮干细胞和在体表皮干细胞之间存在着细胞亚群的分布差异,提示其具有更强的增殖能力;二者在细胞核型和表面标志蛋白表达等方面具有相似性。去分化来源的表皮干细胞可以作为表皮干细胞的替代细胞应用于皮肤重建与再生的相关研究。
- 孙晓艳付小兵刘惠玲
- 关键词：表皮干细胞去分化免疫细胞化学流式细胞检测
- bFGF诱导表皮细胞去分化形成短暂扩充细胞被引量：3
- 2010年
- 目的探索一条非转基因的途径诱导表皮细胞去分化形成表皮前体干细胞。方法采用bFGF诱导表皮细胞去分化形成表皮前体干细胞,免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法以及免疫荧光染色技术检测bFGF诱导培养后表皮细胞的表型及功能改变。同期分离培养的人在体表皮干细胞作为本次实验的阳性对照。结果免疫细胞化学染色表明bFGF诱导培养后,实验组细胞中β1-integrin、CK19、CK14的表达增强,而CK10的表达明显降低。流式细胞技术检测显示bFGF诱导后实验组、对照组及阳性对照组中α6+CD71-、α6+CD71+及CD71表达阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的13.24%、58.26%、23.12%,0.12%、3.06%、51.50%及37.49%、45.13%、5.86%。RT-PCR检测结果显示,实验组中β1-integrin、CK19、CK14的mRNA转录水平明显上调,而CK10的mRNA表达则明显下降。虽然β1-integrin、CK19和CK10的表达在实验组和阳性对照组中没有显著性的差异(P>0.05),但CK14在实验组中的表达则显著性增高达1.4倍左右(P<0.05)。此外,免疫荧光染色结果显示端粒酶逆转录酶在去分化来源表皮干细胞和在体表皮干细胞中存在着亚细胞位点分布差异。结论 bFGF能够诱导表皮细胞去分化并且从新获得干细胞的潜能。虽然这些去分化来源的表皮干细胞在形态和功能上更加接近短暂扩增细胞,但是该方法期待能为表皮细胞去分化理论的深入认识以及探询一条高效、安全的iPS细胞制备途径提供实验参考。
- 孙晓艳刘惠玲付小兵
- 关键词：表皮干细胞去分化IPS细胞免疫细胞化学流式细胞检测
