国家自然科学基金(30860326)
- 作品数：10 被引量：21H指数：3
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- 相关机构：广西医科大学右江民族医学院蚌埠医学院更多>>
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- 体内阿霉素干预富集肝癌干细胞的初步研究被引量：1
- 2013年
- 目的建立肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,以癌干细胞的耐药特性为建立富集肝癌干细胞的切入点,在机体环境下进行构建体内肝癌干细胞的富集模式。方法将BEL-7404人肝癌细胞株的细胞悬液注射裸鼠两侧腋窝皮下,建立皮下移植瘤模型,经阿霉素干预后原代取材,分别以单个细胞克隆形成实验、平板克隆形成实验和悬浮球形成实验,对亲本细胞及经阿霉素干预后的BEL-7404肝癌细胞进行癌干细胞相关细胞学特性的检测。结果每一代裸鼠皮下移植瘤模型成瘤率为100%,亲本细胞与经体内阿霉素干预后的第一代BEL-7404肝癌细胞的单细胞克隆形成率比较没有明显差异(P>0.05),而体内干预第二代细胞的单细胞克隆形成率均明显高于亲本细胞和经干预后的第一代细胞(P<0.05),体内干预第一代细胞平板克隆形成率均明显低于亲本细胞和第二代细胞(P<0.05)。亲本细胞及经体内阿霉素干预后的BEL-7404肝癌细胞在干细胞培养基中培养均未见有细胞悬浮球形成。结论经低剂量阿霉素体内干预可作为富集肝癌干细胞的手段之一。
- 区泳芳邝晓聪罗殿中蔡捷陶璐陈相宜佘佐亚姚金光
- 关键词：肝肿瘤癌干细胞皮下移植瘤模型阿霉素
- 人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞来源的实验研究
- 2009年
- 目的观察人舌癌裸鼠皮下移植瘤模型中肿瘤新生血管内皮细胞的来源。方法通过皮下移植人舌癌Tca8113-M1细胞建立人舌癌裸鼠移植肿瘤模型，并于肿瘤生长至直径1cm时切除肿瘤，对移植瘤进行病理组织学观察，利用免疫组织化学方法检测移植瘤内新生血管内皮细胞的来源，抗体为鼠抗人单克隆抗体CD34和大鼠抗小鼠单克隆抗体CD34；并进行微血管密度（microvessel density，MVD）计数及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达检测。结果右腋窝皮下接种人舌癌Tca8113-M1细胞2周后，6只裸鼠的肿瘤直径都达到1cm以上，切片HE染色可见肿瘤组织病理形态为鳞状上皮细胞癌，MVD平均值为10．72±2．12，其中肿瘤新生血管内皮细胞大鼠抗小鼠CD34免疫组化结果是阳性，而鼠抗人CD34阴性。VEGF在6例移植瘤标本中均阳性表达，平均阳性率为（67±5．6）％。结论人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞主要来源于宿主裸鼠，并且可能与肿瘤细胞分泌的VFGE诱导有关。
- 朱名毅姚金光黄英华蔡捷邝晓聪
- 关键词：舌癌血管内皮细胞
- 舌癌淋巴道转移模型中分离并建立舌癌细胞永生化细胞系被引量：5
- 2009年
- 目的:在建立舌癌Tca8113淋巴道转移裸鼠模型的基础上,建立永生化的舌癌细胞系,并进一步探讨舌癌转移淋巴结组织中同源癌细胞相关标记物的表达情况,为舌癌干细胞研究提供基本的研究模型。方法:采用癌细胞足垫注射法建立淋巴道转移模型,4周后取淋巴结进行原代细胞培养并分离、纯化舌癌细胞进行连续传代培养、进行永生化细胞系的生物学特性鉴定。结果:在淋巴道转移模型中,HE染色与EMA免疫组化染色发现淋巴结有散在或灶性鳞状上皮癌细胞转移。进而取转移模型裸鼠的淋巴结组织进行原代细胞培养,经分离和纯化以及连续传代而建立舌癌永生化细胞系,命名为Tca8113-Ml,目前传代100余代,时间近2年,生长稳定,倍增时间为22.51h,染色体众数58,保持人染色体形态,细胞形态与Tca8113细胞相似。Tca8113-Ml在裸鼠体内的成瘤率为100%,裸鼠腋窝皮下成瘤的组织切片显示为典型的鳞状上皮细胞癌。结论:在舌癌淋巴道转移模型中,可分离培养与建立永生化的舌癌细胞系。
- 蔡捷姚金光黄英华朱名毅邹维艳李小平邝晓聪
- 关键词：舌癌永生化细胞系淋巴结转移
- 舌癌耐药细胞株的建立及癌干细胞特性的实验观察被引量：2
- 2012年
- 目的建立舌癌耐药细胞株,并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性。方法以低浓度阿霉素持续增量诱导法建立TCA-8113舌癌耐药细胞株,并对亲代与舌癌耐药细胞株进行癌细胞基本特性、癌干细胞相关细胞学特性的检测,分别以计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间以及用MTT法测定耐药倍数,并进行单个细胞成克隆实验、平板克隆形成实验和悬浮球形成实验。结果 TCA-8113舌癌耐药细胞为"铺路石"状上皮样生长方式,但其中异形细胞略多,耐药倍数为22倍;生长曲线提示其增殖速度明显低于亲本TCA-8113舌癌细胞,且倍增时间增加,但在细胞周期中各期细胞比例未见明显改变;TCA-8113舌癌耐药细胞克隆形成率、单个细胞培养成株率均明显低于其亲本TCA-8113舌癌细胞(P﹤0.05)。结论低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成舌癌耐药细胞株,但舌癌耐药细胞株的癌干细胞特征并不明显。
- 陈相宜邝晓聪蔡捷陶璐
- 关键词：舌癌耐药细胞癌干细胞
- ADAM15在舌鳞癌组织中的表达及意义被引量：5
- 2013年
- 收集病理确诊舌鳞癌患者49例,用免疫组化法检测去整合素-金属蛋白酶15(adamalysin15,ADAM15)在原发灶组织中的表达,发现ADAM15蛋白在舌鳞癌伴有淋巴结转移组织中的表达明显高于无淋巴结转移组织(P<0.05),ADAM15蛋白表达与淋巴结转移呈正相关(P=0.018),与舌癌分化程度及临床分期无相关性。
- 黄敏邝晓聪姚金光关艳
- 关键词：舌鳞状细胞癌淋巴结转移
- 肝癌耐药细胞株的建立及癌干细胞的特性被引量：5
- 2012年
- 目的建立肝癌耐药细胞株,并观察耐药细胞株癌干细胞的相关生物学特性。方法采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法诱导建立耐药BEL-7404人肝癌细胞株,并对亲代与耐药肝癌细胞株进行癌细胞基本特性、癌干细胞相关细胞学特性进行检测,用计数法检测癌细胞生长曲线、倍增时间与MTT法测耐药倍数;单个细胞成株培养、平板克隆形成实验、"球囊"细胞培养实验。结果耐药BEL-7404人肝癌细胞与亲本细胞相似,呈上皮样生长方式,但其中梭状细胞略多,耐药倍数为292倍;生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本BEL-7404人肝癌细胞,且倍增时间增加;耐药BEL-7404肝癌细胞克隆形成率、"球囊"细胞形成率均明显低于其亲本BEL-7404人肝癌细胞。结论低浓度阿霉素持续增量法可诱导形成耐药肝癌细胞株,但耐药肝癌细胞株的癌干细胞特征并不明显。
- 陶璐蔡捷邝晓聪陈相宜
- 关键词：肝肿瘤耐药性癌干细胞
- 人骨髓间充质干细胞体内移植安全性评价的初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的:在建立人骨髓间充质干细胞移植裸鼠模型的基础上,从人骨髓间充质干细胞分布与分化的角度初步探讨移植安全性。方法:选取7例人骨髓标本,采用密度梯度离心差速贴壁法分离与纯化和传代培养人骨髓间充质干细胞,静脉注射人骨髓间充质干细胞移植裸鼠模型,分别于第1周和第4周取材,在受鼠脑、肝、脾、肺、心、肾、肌肉、空肠等脏器组织进行大体与镜下形态学观察,并利用RT-PCR检测人ALu基因与CD45基因在不同脏器组织中的表达,以判断人源性供体细胞的植入与分化情况;此外还检测第4代人骨髓间充质干细胞的成瘤性。结果:分别于第1周和第4周对移植裸鼠取材,在受鼠脑、肝、脾、肺、心、肾、肌肉、空肠等脏器组织均未发现肉眼可见的植入细胞增殖肿块与异常生长物,组织切片行常规HE染色也未发现人源性细胞集落;人源性供体细胞可在肺、肝、脾、肾、肌肉、心、肠、脑等多种脏器或组织中均有不同程度的分布和表达ALu基因,而淋巴细胞分化的CD45基因在肺、心、肾、肌肉、空肠中均有阳性表达。第4代人骨髓间充质干细胞无显著成瘤性。结论:人骨髓间充质干细胞体内移植无显著成瘤性且对各脏器无明显形态学损伤,而且有一定植入分化能力,提示人骨髓间充质干细胞移植安全系数有一定保证。
- 李军芳邝晓聪韦瑛蔡捷朱明毅黄英华李小平邹维艳温冠媚
- 关键词：人骨髓间充质干细胞安全性
- 不同体外环境下舌癌干细胞标志CD44及ESA和CXCR4的表达
- 2012年
- 背景:细胞生存的微环境与蛋白的表达密切相关,在不同的环境中癌干细胞标志的表达可能存在差异。目的:探讨癌干细胞标志CD44、ESA、CXCR4的表达是否会在不同的细胞生存环境中发生改变。方法:选取舌癌TCA8113细胞系,分别建立干细胞培养基、常规标准培养基以及在标准培养基中添加阿霉素的3种体外培养微环境,采用免疫组化及流式细胞术,检测不同培养环境中3种标志在舌癌细胞中的表达。结果与结论:免疫组化法检测显示,在所有培养环境中CD44、ESA强阳性表达,CXCR4在干细胞培养基环境中弱阳性表达,其余为阳性表达;流式细胞术检测CD44与ESA在所有培养环境中均高水平表达;与常规标准培养基环境比较,在干细胞培养基的微环境中CXCR4极低水平表达,将舌癌细胞从干细胞培养基转回常规标准培养基后,CXCR4的表达回升;在阿霉素干预的培养环境中,CXCR4表达水平升高。结果表明舌癌干细胞标志在不同体外微环境下的表达存在差异,需结合体内环境与肿瘤组织的表达情况来寻找癌干细胞标志。并且不同微环境模式可能富集不同性质的癌干细胞。
- 黄英华姚金光邝晓聪蔡捷解继胜李俊陈海波杨永荣
- 关键词：舌癌癌干细胞TCA8113
- 舌癌单细胞培养建系与癌干细胞相关标志的检测被引量：3
- 2013年
- 目的以舌癌Tca8113M1细胞系单细胞培养建系为基础,观察Tca8113M1细胞系中舌癌干细胞存在的现象及其相关标志的变化规律。方法选取Tca8113M1细胞系,以有限稀释法进行体外单细胞培养并建立细胞亚系,在证实其成瘤性的基础上,进一步采用流式细胞术检测癌干细胞相关标志CD44、CD184、细胞外可溶性抗原(ESA)的表达情况,着重观察单个细胞培养形成细胞克隆的形态与时间。结果以有限稀释法获取192个Tca8113M1舌癌单个细胞,在96孔板中进行体外培养,获取12个细胞亚系(获取比例为6.25%),均有高成瘤性。癌干细胞相关标志CD44与ESA均为高水平表达,而CD184表达则在12个细胞系之间有差异。在单个细胞培养中,形成完全克隆、部分克隆与旁克隆3种形态,12个细胞亚系均源于单个细胞形成的完全克隆,均可进行连续传代与扩增,而部分克隆与旁克隆则在后续培养中逐渐衰老与消亡。结论 Tca8113M1细胞系中可能存在癌干细胞,而单细胞培养可形成完全克隆并建立细胞亚系,是进行舌癌干细胞后续研究重要的细胞培养模式。
- 姚金光解继胜李俊韦星杨永荣陈海波
- 关键词：单细胞有限稀释法
- ADAM15在舌癌耐药细胞系Tca8113/ADM表达的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的研究舌癌阿霉素(adriamycin,ADM)耐药细胞系Tca8113/ADM及其亲本细胞系Tca8113肿瘤转移相关蛋白去整合素-金属蛋白酶15(adamalysin15,ADAM15)的表达水平,从肿瘤耐药的角度对舌癌的耐药与ADAM15的关系进行初步探讨。方法用蛋白免疫印迹技术检测Tca8113/ADM及Tca8113亲本细胞系的ADAM15蛋白表达水平。结果 ADAM15在Tca8113亲本细胞系和Tca8113/ADM细胞系的表达分别为0.244±0.231和1.217±0.494,两者差异具有统计学意义(P=0.001)。结论肿瘤转移相关蛋白ADAM15在Tca8113/ADM细胞系的表达高于其在亲本细胞的表达,提示舌癌的阿霉素耐药细胞系的转移性可能比其亲本细胞更强。
- 黄敏邝晓聪姚金光关艳
- 关键词：舌癌耐药蛋白免疫印迹法
