黑龙江省“十一五”科技攻关项目(GAO7B401)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：王利张兰威秦兰霞更多>>
- 相关机构：黑龙江省完达山乳业股份有限公司哈尔滨工业大学东北农业大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省“十一五”科技攻关项目国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 玉米谷氨酰胺转胺酶基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2010年
- 从玉米嫩叶中提取总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出玉米谷氨酰胺转胺酶(TGase)全长基因,回收目的片段并测序,该基因编码区全长1605bp,编码535个氨基酸残基,分子量为60.9kD,与GenBank(登录号:AJ421525)上已发表的序列同源性为100%。按正确的阅读框架将玉米TGase基因片段定向克隆到表达载体pET-28a上,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,1mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,经凝胶分析软件测得蛋白表达量约占总蛋白的15%,以His-Tag抗体作为一抗,采用Western-blot方法检测目的蛋白,结果证明所表达的特异蛋白是带有His-Tag的重组融合蛋白,利用Ni2+-NTA琼脂糖树脂亲和层析柱纯化目的蛋白,SDS-PAGE鉴定为单一条带,测得纯化后的TGase酶活力达到16U/mg。
- 秦兰霞王利张兰威
- 关键词：大肠杆菌谷氨酰胺转胺酶酶活
