国家自然科学基金(30640012)
- 作品数：6 被引量：17H指数：2
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- 血管紧张素Ⅱ对人肺微血管内皮细胞核因子-κB的活化作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在不同时间点对人肺微血管内皮细胞(HPMEC)核因子-κB(NF-κB)的活化作用。方法采用原代培养的HPMEC,分别以浓度为10-8、10-7、10-6、10-5mol.L-1的AngⅡ刺激HPMEC0、0.5、1、2、4 h,用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)观察NF-κB对DNA的结合活性。结果各浓度组AngⅡ均能活化HPMEC中NF-κB;与0 h比较,AngⅡ10-8mol.L-1组在4 h表现出明显的NF-κB活化作用(P<0.05),AngⅡ10-7mol.L-1组在1 h开始活化NF-κB(P<0.05),随后各时间点的效应逐渐增强;AngⅡ10-6mol.L-1组在1 h开始活化NF-κB(与0 h比较,P<0.05),2 h时达到高峰(与1 h比较,P<0.05),4 h活化水平下降(与2 h比较,P<0.05);AngⅡ10-5mol.L-1组在0.5 h即明显活化NF-κB(与0 h比较,P<0.05),随后各时间点NF-κB活化效应逐渐减弱。结论AngⅡ刺激HPMEC后能引起NF-κB活性增加,这可能是AngⅡ促炎作用的重要环节。
- 王连邱海波杨毅丁惠民刘玲李红鹏
- 关键词：人肺微血管内皮细胞核因子-ΚB
- 血管紧张素Ⅱ诱导急性肺损伤大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体表达调控的研究被引量：6
- 2008年
- 目的探讨静脉注射血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）阻断药氯沙坦对大鼠肺组织AT2R表达的影响及AT2R与急性肺损伤（ALI）的相关性。方法24只SD大鼠被随机分为4组，每组6只。正常对照组和AngⅡ组：持续皮下注射生理盐水或AngⅡ1μg·kg^-1·min^-1 72h；AngⅡ＋氯沙坦组：注射AngⅡ前24h及注射过程中给予氯沙坦10mg·kg^-1·d^-1灌胃，连用4d；氯沙坦组：仅用氯沙坦10mg·kg^-1·d^-1灌胃，连用4d。给药后活杀大鼠，分别用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测肺组织AT2R的mRNA和蛋白表达，并行组织损伤病理评分。结果AngⅡ组肺组织病理评分[（3．33±1．14）分]明显高于正常对照组[（0．73±0．09）分]；AngⅡ＋氯沙坦组评分降至（1．98±0．30）分，而氯沙坦组为（0．95±0．20）分，各组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。AngⅡ组AT2R mRNA表达[（47．90±9．88）％]明显低于正常对照组[（86．33±5．90）％]；AngⅡ＋氯沙坦组AT2R mRNA表达上调[（90．63±19．66）％]，而氯沙坦组为（68．65±4．88）％，各组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。正常对照组肺组织AT2R蛋白表达为（78．80±41．26）％，AngⅡ组为（68．98±23．93）％，AngⅡ＋氯沙坦组为（68．13±23．23）％，氯沙坦组为（70．15±17．16）％，各组间比较差异均无统计学意义。结论AngⅡ可以诱导大鼠ALI并下调AT2R mRNA在肺组织中的表达，此时应用氯沙坦可上调AT2R mRNA表达，改善肺损伤；AT2R可能在ALI中发挥肺保护作用。
- 朱英邱海波杨毅刘玲赵明明陈秋华郭涛
- 关键词：受体阻断药
- 血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体途径在介导大鼠肺部炎症反应中的作用被引量：8
- 2007年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)-血管紧张素Ⅱ1型受体(ATR1)途径在介导大鼠肺部炎症反应和急性肺损伤中的作用。方法清洁级SD大鼠24只,随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+氯沙坦组和氯沙坦组。光镜观察肺组织病理改变并测定肺湿/干重比(W/D)。凝胶迁移率改变电泳(EMSA)测定肺组织核因子-κB(NF-κB)活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆血管性血友病因子(vWT)的含量,比色法测定髓过氧化物酶(MPO)和丙二醛(MDA)含量。结果AngⅡ可致肺泡间隔增宽、出血及大量炎性细胞浸润等急性肺损伤病理改变,氯沙坦可缓解由AngⅡ所致的肺组织病理损伤。AngⅡ组肺W/D、NF-κB活性、TNF-αmRNA表达、MPO、MDA及vWF含量均明显高于其余3组(P<0.05),对照组与AngⅡ+氯沙坦组和氯沙坦组的肺W/D、NF-κB活性、TNF-αmRNA表达、MPO、MDA及vWF含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论AngⅡ可激活肺部炎症反应并导致急性肺损伤,AngⅡ在肺部的促炎作用主要是通过其1型受体介导的。
- 刘玲邱海波杨毅丁惠民王连
- 关键词：炎症急性肺损伤
- 血管紧张素Ⅱ在急性肺损伤大鼠循环及肺组织中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的研究大鼠急性肺损伤时循环及肺组织血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）含量的变化，探讨AngⅡ在急性肺损伤发病中的作用。方法清洁级SD大鼠30只，随机分为正常对照组（n=6）和模型组（n=24），模型组又按注射脂多糖（12S）后3、6、9、12h四个时间点分成4组，每组6只。分别于静脉注射IPS后各分组时间点观察大鼠一般情况、血压、动脉血气分析、肺组织湿质量／干质量（W／D）比值、肺组织病理改变，放免法测定血浆及肺组织AngⅡ的含量的变化，所有观察指标采用单因素方差分析与正常对照组比较。结果与正常对照组比较，pH值和动脉血氧分压显著降低（P〈0．05），而二氧化碳分压及肺W／D比值均显著高于对照组（P〈0．05），病理形态学积分分析显示肺组织受损（P〈0．01）。ALI大鼠血浆及肺组织AngⅡ均升高（P〈0．05），其中血浆AngⅡ在9h时点达峰值，而组织AngⅡ浓度在各观察时间点持续上升。结论ALI时肺组织和血中AngⅡ大量释放，提示ALI时伴有全身及肺局部肾索一血管紧张素系统的激活。
- 赵明明邱海波杨毅刘玲郭涛
- 关键词：脂多糖急性肺损伤肾素-血管紧张素系统血管紧张素
- 血管紧张素-Ⅱ活化肺微血管内皮细胞核因子-κB的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对肺微血管内皮细胞（HPMEC）核因子-κB（NF-κB）的活性的影响，以及经典途径在AngⅡ介导的NF-κB活化过程中的作用。方法本实验分为：AngⅡ组：10^-6mol／L AngⅡ分别刺激HPMEC0、0．5、1、2、4h；氯沙坦组：10^-6mol／L氯沙坦（AugⅡ1型受体阻滞剂）预先处理HPMEC1h，再予相同10^-6mol／L AugⅡ刺激细胞2h，提取胞浆蛋白和胞核蛋白。凝胶电泳迁移率分析实验（EMSA）观察细胞中NF-κB的DNA结合活性。Western印迹检测细胞浆中抑制因子κBα（IκBα）的含量。结果AugⅡ刺激HPMEC0．5h后细胞中NF-κB活性明显上升（144．5±16．1），在2h达到峰值（270．1±27．2），4h（215．1±17．8）较2h有所下降，但仍高于0h水平，以上各时间点与AngⅡ刺激细胞0h（100．0±25．1）相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。与AngⅡ刺激HPMEC 0h IκBα含量（44．4％±2．1％）相比，0．5h后IκBα含量即开始明显下降（38．9％±3．6％，P〈0．05），2h后IκBα含量下降最为明显（32．6％±2．3％，P〈0．05），4h细胞中IκBα含量较2h有所上升，但仍然明显低于AugⅡ刺激0h细胞中IκBα的含量（40．1％±4．7％，P〈0．05）。氯沙坦组NF-κB活性（115．4±10．7）和IκBα含量（43．6％±3．7％）与AugⅡ组0h相比无明显差异。氯沙坦组中NF-κB活性明显低于AngⅡ组2h，氯沙坦组中IκBα的含量亦明显高于AngⅡ组2h。结论AngⅡ能通过AT1介导HPMEC中NF-κB活化。经典途径参与了AugⅡ诱导的HPMEC中NF-κB活化过程。
- 丁惠民邱海波王连刘玲李红鹏
- 关键词：人肺微血管内皮细胞核因子-ΚB
- 脂多糖刺激下的人肺微血管内皮细胞血管紧张素Ⅱ受体1放射受体分析法的建立被引量：1
- 2007年
- 目的建立一种脂多糖（LPS）刺激下人肺微血管内皮细胞（HPMEC）血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（ATR1）与其配体AngⅡ结合的放射配体结合分析法（RLBA）。方法体外培养的HPMEC接种于24孔培养板,当细胞达到80%-90%融合,饥饿24 h后用浓度为100 ng/ml的LPS刺激8 h,用0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.62、.0 fmol 8个不同剂量的放射性配体125I-AngⅡ（TL表示其放射性）在板孔中与ATR1结合（存在或不存在5μg AngⅡ）,然后γ计数仪计数,测定ATR1的总结合（TB）与非特异性结合（NSB）,TL减去TB得游离放射配体（F）,TB减去NSB得ATR1的特异性结合（B）。由TB与TL作图得ATR1饱和曲线;由B/F与B作图得出Scatchart曲线。结果随放射性配体125I-AngⅡ加入量的增加,NSB也相应逐渐增加,且由直线相关与回归分析得到NSB与加入125I-AngⅡ剂量呈直线关系（r2=0.9929）;Scatchart作图得B/F与B也呈直线关系,其相关系数r2=0.9514。HPMEC上仅存在单一亲和力的AngⅡ受体,反应亲和力的Kd值为109 pmol/5×10^5细胞,从Scatchart曲线与X轴截距得到ATR1的最大结合位点Bmax为29 pmol/5×10^5细胞;ATR1饱和曲线分为两段,前段斜率较大,随125I-AngⅡ加入量的增加TB增加明显;后端曲线较为平坦,TB随125I-AngⅡ的增加变化不明显,125I-AngⅡ在1600 pmol/5×10^5细胞与2000 pmol/5×10^5细胞之间TB的增加与NBS增加基本相当,能使ATR1饱和的125I-AngⅡ剂量为1600 pmol/5×10^5细胞。结论本实验建立的RLBA方法能得到ATR1的Kd与Bmax两个基本参数,可用于LPS刺激下HPMEC的ATR1功能研究。
- 李红鹏邱海波许德义刘玲王连丁惠民杨毅周韶霞
- 关键词：人肺微血管内皮细胞脂多糖
