中国博士后科学基金(20060400780)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：梁远红周燕陈泗林林曙光刘烈更多>>
- 相关机构：武汉大学广东省人民医院广东省心血管病研究所更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 反义基因治疗对H9C2心肌细胞β_1受体表达的影响
- 2008年
- 目的观察阳离子脂质体介导的β1受体反义基因对H9C2心肌细胞β1受体mRNA及受体蛋白表达的影响,寻求最佳转染比率。方法H9C-2心肌细胞,用去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)刺激24h后转染β1受体反义寡核苷酸(β1 antisense oligonucleotide,β1-AS-ODN),脂质体与β1-AS-ODN的混合摩尔比为2.0、2.5和3.0,分别转染18h、24h和36h;在倒置荧光显微镜下观察心肌细胞的形态;用免疫印迹技术测定心肌细胞β1受体蛋白的时间表达曲线。实验分为4组:NE组、NE加β1受体反向寡核苷酸(β1 inverse oligonucleotides,β1-IN-ODN)组、NE加β1-AS-ODN组、心肌细胞组,用半定量逆转录多聚酶链反应检测心肌细胞β1受体mRNA的表达。结果β1-AS-ODN分布在心肌细胞的胞浆及细胞核中,转染24h效率达70%,此后平缓降低;NE组的心肌细胞β1受体蛋白显著升高;与NE组相比,脂质体与β1-AS-ODN的混合摩尔比2.0、2.5,和3.0的心肌细胞β1受体蛋白显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.05);与心肌细胞组比较,NE组和β1-IN-ODN组的心肌细胞β1受体mRNA和受体蛋白显著升高(P<0.01);与NE组相比,NE加AS-ODN组的心肌细胞β1受体mRNA和受体蛋白显著降低(P<0.01)。结论阳离子脂质体与β1-AS-ODN比率为2.5转染24h效果最好,其机制可能是通过激活核糖核酸酶H降解靶mRNA,在转录和翻译水平抑制目的基因表达。
- 林纯莹陈泗林梁远红周燕余细勇
- 关键词：Β1受体反义寡核苷酸心肌细胞
- P38丝裂原活化蛋白激酶短发夹RNA对H9C-2心肌细胞基因表达的影响
- 2012年
- 目的探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的短发夹环RNA(shRNA)质粒对H9C-2心肌细胞增殖变化的影响并探讨其发生机制。方法构建3种P38MAPK shRNA质粒并测序鉴定,将其转染入H9C-2心肌细胞中,应用RT-PCR和Western blotting检测心脏细胞P38MAPK mRNA和蛋白的表达。结果P38MAPK shRNA质粒分布在心肌细胞的胞浆及细胞核中,与心肌细胞组比较,AngⅡ组和shRNA阴性组的P38MAPK mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.01,P<0.01);与AngⅡ组比较,shRNA1、shRNA2和shRNA3组的P38MAPK mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。结论 P38MAPK shRNA质粒成功转染心肌细胞,P38MAPK shRNA3质粒能最有效地抑制心肌细胞P38MAPK的表达。
- 梁远红周燕刘烈陈东骊林纯莹陈泗林林曙光
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶短发夹RNA心肌细胞
- 慢病毒介导的RNA干扰对醛固酮过负荷心肌梗死大鼠心脏重构的影响被引量：3
- 2013年
- 目的 观察慢病毒介导的p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）短发夹RNA（PGLV-shRNA）对醛固酮过负荷大鼠心肌梗死后心脏重构的影响并探讨其机制.方法 制作醛固酮过负荷大鼠心肌梗死模型（左室射血分数48.63±6.43）,构建PGLV-shRNA经尾静脉注射,超声评价心脏重构,检测心肌胶原容积分数（CVF）、p38 MAPK、结缔组织生长因子（CTGF） mRNA及蛋白的表达.结果 醛固酮过负荷大鼠心肌梗死后心脏收缩功能显著降低（48.63±6.43比64.62 ±7.90；P＜0.01）,伴CVF增加,p38MAPK、CTGF蛋白表达显著上调（P＜0.01）.PGLV-shRNA明显改善心肌梗死后的心脏重构,减少CVF（36.55 ±6.31比58.62±7.60；P＜0.05）、p38MAPK mRNA和蛋白、CTGF mRNA和蛋白表达（0.42±0.06比0.60 ±0.12；P＜0.05）.结论 醛固酮过负荷大鼠心肌梗死后心脏重构与p38MAPK信号通路介导的心肌细胞纤维化相关,PGLV-shRNA抑制心肌细胞纤维化,改善心肌梗死后的心脏重构.
- 梁远红周燕刘烈陈东骊陈泗林林曙光
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶慢病毒心脏重构RNA干扰
- β1受体反义基因对肾性高血压大鼠心脏β受体的影响
- 2007年
- 目的观察阳离子脂质体混合物与β1受体反义寡核苷酸(β1-AS-ODN)单次注射对两肾一夹肾性高血压大鼠血压及心脏β受体mRNA、受体密度的影响。方法用SD大鼠制作两肾一夹肾性高血压模型,将动物随机分为5组,每组18只:β1-AS-ODN组,β1-IN-ODN组,2KIC组,假手术组,SD组。于术后第4周经鼠尾静脉注射阳离子脂质体/β1-ODN的混合物(摩尔比2.0),注射剂量为0.5mg·kg^(-1),Tail-cuff法检测血压,半定量RT-PCR测定β1mRNA水平,放射免疫法测定受体密度,Western blot测定蛋白水平。数据采用one-way ANOVA分析,两两比较用Newman-Keuls法。结果与2KIC组相比,β1-AS-ODN可使血压下降维持4周(P<0.05),可以使血压最大下降39 mmHg;β1-AS-ODN组与高血压组β1受体mRNA水平无明显差异,但β1受体蛋白水平明显降低(P<0.05);与2K1C组比较,注射后第2、7、30天反义组的β1受体水平明显降低,分别为29.5%、35.5%、20.4%(P<0.01,P<0.01,P<0.05);三组β2受体水平差异无统计学意义。结论以β1受体为靶基因的反义基因治疗降压效果显著,β1反义寡核苷酸在转录后发挥作用抑制目的基因表达;β1反义寡核苷酸的降压效果与其特异性地和心脏β1受体结合相关,而与β2受体无关。
- 梁远红林曙光周燕王晋明王芳余细勇
- 关键词：Β1受体反义寡核苷酸
- P38MAPK短发夹RNA对H9C-2心肌细胞目的基因表达的影响
- 目的探讨促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的短发夹环RNA(shRNA)质粒对H9C2心肌细胞增殖变化的影响并探讨其发生机制。方法构建3种P38MAPK shRNA质粒并测序鉴定,将其转染入H9C-2心肌细胞中,应用...
- 周燕梁远红魏捷唐其柱
- 关键词：P38MAPKSHRNA心肌细胞
- 文献传递
