中国博士后科学基金(20100470976)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：李玲玲江冠民杜军张革王昊更多>>
- 相关机构：中山大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人源Nodal成熟肽的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2011年
- 目的:表达人Nodal成熟肽,免疫小鼠制备其多克隆抗体。方法:构建原核表达质粒pReceiver-hNodal,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达His6-hNodal融合蛋白,融合蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后,回收融合蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。通过间接ELISA、Westernblot和免疫细胞化学染色和间接免疫荧光等方法检测抗体的效价和特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了与预期理论值大小相符的Mr约13 000的人Nodal成熟肽的融合蛋白,通过免疫小鼠制备的多克隆抗体效价高、特异性强。结论:成功制备了抗人Nodal成熟肽多克隆抗体,为进一步深入研究Nodal在肿瘤发生发展过程中的生物学功能奠定了基础。
- 李玲玲江冠民张革王昊方瑞杜军
- 关键词：原核表达纯化多克隆抗体
- TSA通过抑制STAT1磷酸化与核转位下调人肝癌细胞HepG2内IDO的表达被引量：1
- 2011年
- 目的:研究曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)下调γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)诱导的人肝癌细胞HepG2内吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)表达的分子机制。方法:Western blot检测TSA在IFN-γ诱导的HepG2细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1(STAT1)的磷酸化和干扰素调节因子1(IRF-1)的诱导表达情况。用免疫细胞化学法检测TSA处理HepG2细胞后对IDO表达的影响。流式细胞术分析TSA处理后IFN-γ受体2表达量的变化,进一步在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对IFN-γ激活位点(γ-activated sites,GAS)、干扰素刺激应答元件(interferonstimulated response elements,ISRE)和核因子-κB(NF-κB)的激活的影响。结果:TSA以剂量依赖方式下调HepG2细胞内IFN-γ诱导的IDO表达、能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位,但是上调IFN-γ受体2受体的表达。双荧光素酶报告基因分析和Westernblot结果表明:TSA能显著抑制GAS和IRF-1的激活却不能抑制NF-κB和ISRE的激活。结论:TSA能下调IFN-γ诱导的HepG2细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关,而不是通过下调IFN-γ受体的表达来实现的。
- 李玲玲江冠民张革衣艳梅张帆杜军
- 关键词：TSASTAT1核转位肝癌IDO
- 曲古抑菌素A下调人肺腺癌细胞A549内IDO表达的分子机制
- 2011年
- 【目的】研究曲古抑菌素A(TSA)抑制γ干扰素(IFN-γ)诱导的人A549细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的分子机制。【方法】采用蛋白质免疫印迹技术检测TSA在IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1(STAT1)的磷酸化和干扰素调节因子1(IRF-1)的激活等过程中的作用,在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对γ-干扰素激活位点(GAS)、干扰素刺激应答元件(ISRE)和核因子-κB(NF-κB)的激活的影响。【结果】TSA以浓度依赖方式下调A549细胞中IFN-γ诱导的IDO表达,并能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位。双荧光素酶报告基因分析和Western blot结果表明:TSA能显著抑制GAS、ISRE和IRF-1的激活却不能抑制NF-κB的激活。【结论】TSA能下调IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关。
- 李玲玲江冠民杜军
- 关键词：TSA人肺腺癌细胞A549IDOSTAT1
