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国家自然科学基金(30730068)

作品数:23 被引量:65H指数:6
相关作者:张改平乔松林王爱萍万博鲍登克更多>>
相关机构:河南省农业科学院郑州大学河南农业大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划河南省科技攻关计划更多>>
相关领域:农业科学医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 23篇中文期刊文章

领域

  • 15篇农业科学
  • 5篇医药卫生
  • 4篇生物学

主题

  • 9篇猪繁殖
  • 9篇繁殖
  • 8篇猪繁殖与呼吸...
  • 8篇呼吸综合征
  • 8篇繁殖与呼吸综...
  • 8篇FCΓ
  • 8篇FCΓR
  • 7篇病毒
  • 6篇细胞
  • 5篇原核表达
  • 5篇受体
  • 5篇猪繁殖与呼吸...
  • 5篇呼吸综合征病...
  • 5篇繁殖与呼吸综...
  • 4篇PRRSV
  • 3篇转染
  • 3篇核表达
  • 3篇FC受体
  • 2篇蛋白
  • 2篇疫苗

机构

  • 20篇河南省农业科...
  • 10篇郑州大学
  • 5篇河南农业大学
  • 2篇吉林大学
  • 2篇河南科技学院
  • 1篇郑州牧业工程...
  • 1篇中国农业科学...
  • 1篇河南省动物免...

作者

  • 20篇张改平
  • 17篇乔松林
  • 9篇王爱萍
  • 7篇万博
  • 7篇鲍登克
  • 5篇席俊
  • 5篇刘运超
  • 5篇苗现伟
  • 5篇张利娜
  • 4篇游雷鸣
  • 4篇史平玲
  • 3篇肖治军
  • 3篇王蕊
  • 3篇蒋志政
  • 3篇邬成业
  • 3篇邓瑞广
  • 3篇冯丽丽
  • 3篇刘永晖
  • 2篇刘玺
  • 2篇张丽萍

传媒

  • 8篇河南农业科学
  • 2篇华北农学报
  • 2篇畜牧兽医学报
  • 2篇细胞与分子免...
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇第二军医大学...
  • 1篇动物医学进展
  • 1篇免疫学杂志
  • 1篇江西农业学报
  • 1篇Agricu...
  • 1篇Scienc...
  • 1篇中国动物传染...
  • 1篇中国科学:生...

年份

  • 4篇2012
  • 2篇2011
  • 10篇2010
  • 5篇2009
  • 2篇2008
23 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
猪FcγRⅠ真核表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立
2010年
本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA,并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300μg.mL-1)和G418(400μg.mL-1)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环和流式细胞术对细胞系进行鉴定。结果表明成功构建了猪FcγRⅠ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系,且表达于转染细胞表面的poFcγRⅠ受体分子能与猪IgG特异结合。本研究为进一步研究奠定了基础。
史平玲邬成业乔松林张改平王爱萍肖治军祁艳华卜丹
关键词:共转染MARC-145细胞
PRRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化被引量:4
2011年
从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T载体。基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化。SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40 kD的融合蛋白;使用1.0 mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8 h可获得最大表达量。
刘明张改平肖治军郭军庆乔松林王丽史西保刘运超游雷鸣王爱萍
关键词:猪繁殖与呼吸综合征反转录克隆WESTERN-BLOT
猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体研究进展被引量:4
2010年
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病原,对PRRSV细胞受体的研究将有助于揭示PRRSV的感染途径、复制过程、致病机理和疫病预防及控制等一系列问题,细胞受体的研究已经成为目前PRRSV研究中的重要领域。论文从硫酸乙酰肝素受体、唾液酸黏附素受体、CD163分子、波形蛋白等方面综述了PRRSV细胞受体研究进展。
李清州达龙珠鲍登克陈海燕杨春英刘毓霞乔松林
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒硫酸乙酰肝素波形蛋白
猪繁殖与呼吸综合征免疫学研究进展被引量:4
2009年
综述了近年来PRRSV感染后免疫学方面的最新研究进展。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后,机体能产生快速强烈的体液免疫反应,但早期产生的抗体不仅不能产生免疫保护,反而会通过介导抗体依赖增强作用产生危害,而具有中和作用的抗体产生缓慢。在PRRSV的免疫应答中,体液免疫和细胞免疫反应都很特别。
冯丽丽张改平乔松林张丽萍
关键词:PRRSV细胞免疫体液免疫毒力变异疫苗研究
家畜IgG Fc受体研究进展被引量:6
2010年
IgG Fc受体(Fcγreceptors,FcγRs)是一类重要的免疫细胞表面分子,对细胞反应的正向和负向调节发挥重要的免疫学功能,是治疗过敏和自身免疫性疾病理想的药物靶标。综述了FcγRs亚类的生物学特性及家畜FcγRs的研究进展,并对FcR(Fc受体)免疫学功能也进行了阐述。
史平玲王爱萍乔松林张改平邬成业鲍登克
关键词:FC受体免疫调节激活型受体
脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响被引量:12
2009年
研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞,收集细胞,提取RNA,用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平;同时收集培养上清,用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明,脂多糖浓度(1-1000ng/mL)对IL-1β、TNF-α影响显著(P%0.05);刺激时间(1-24h)对IL-1β、TNF-α影响显著(P〈0.05),且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。
冯丽丽张丽萍张改平乔松林田晓辉万博王秋霞
关键词:脂多糖猪肺泡巨噬细胞白细胞介素-1Β肿瘤坏死因子-Α
抗猪FcγRⅡb多抗阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究被引量:6
2012年
为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞,发现亚中和滴度的阳性血清能显著增强病毒对PAM的感染,但不能增强病毒对Marc-145细胞的感染;而F(ab′)2片断不能增强病毒感染;用兔抗猪FcγRⅡb多抗孵育PAM细胞,再用上述病毒与阳性血清复合物感染PAM,结果阳性血清对病毒感染的增强作用受到明显抑制。表明猪FcγRⅡb能够介导PRRSV ADE作用。
蒋志政张改平刘明阳乔松林刘永晖王蕊万博鲍登克王爱萍
关键词:阻断
猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立
2011年
为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(Porcine Fc gamma receptorⅢ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300 mg/L)和G418(400 mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流式细胞术对细胞系进行了鉴定。结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子能与猪IgG特异结合。
邬成业史平玲乔松林王爱萍郝慧芳杜晓明王林林张改平
关键词:共转染
猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量:2
2012年
为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。
王蕊张改平乔松林刘永晖蒋志政万博鲍登克王爱萍
关键词:实时荧光定量PCR
猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp7蛋白的表达与纯化被引量:2
2012年
为了解nsp7重组蛋白的免疫学活性,采用RT-PCR的方法从猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)BJ-4毒株中扩增得到nsp7基因,将基因连接到pET-28a载体并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,利用Ni-NTA进行亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析和鉴定,通过间接ELISA方法研究了重组蛋白的免疫学活性。结果表明,成功制备了nsp7重组蛋白,间接ELISA结果表明,重组蛋白具有良好的免疫活性,为建立nsp7特异性抗体的间接ELSIA检测方法及PRRS诊断试剂盒的研制奠定了基础。
刘永晖张改平乔松林刘明阳蒋志政王蕊万博鲍登克王爱萍
关键词:猪繁殖与呼吸综合症病毒原核表达
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