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国家自然科学基金(30640073)

作品数:3 被引量:1H指数:1
相关作者:刘福生柴奇苏伟朱贵东金贵善更多>>
相关机构:首都医科大学附属北京天坛医院更多>>
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相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生

主题

  • 2篇神经干
  • 2篇神经干细胞
  • 2篇细胞
  • 2篇慢病毒
  • 2篇慢病毒载体
  • 2篇干细胞
  • 2篇EGFP
  • 2篇病毒载体
  • 1篇神经干细胞治...
  • 1篇体外
  • 1篇体外实验
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  • 1篇转染效率
  • 1篇细胞治疗
  • 1篇基因
  • 1篇胶质
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  • 1篇胶质瘤细胞
  • 1篇TRANSD...

机构

  • 2篇首都医科大学...

作者

  • 2篇金贵善
  • 2篇朱贵东
  • 2篇苏伟
  • 2篇柴奇
  • 2篇刘福生

传媒

  • 2篇中华神经外科...
  • 1篇Chines...

年份

  • 2篇2009
  • 1篇2008
3 条 记 录,以下是 1-3
排序方式:
Stable EGFP Gene Expression in C6 Glioma Cell Line after Transduction with HIV-1-based Lentiviral Vector
2008年
Objective: To establish a stable C6/EGFP glioma cell transfected with the human immunodeficiency virus line for studies on glioma. Methods: The C6 glioma cell line was type I (HIV-1) based lentivirus vector containing two enhancer-promoters CMV and EF1α. Enhanced green fluorescent protein (EGFP)-positive C6 cells were sorted out by fluorescence-activated cell sort. Expression of EGFP was observed by fluorescent microscopy. EGFP gene in C6 genome was assessed by Polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing. Original and transfected cells were compared biologically and cytomorphologically. Results: Lentivirus vector transfection produced up to 40% EGFP-positive cells. After fluorescence-activated cell sort selection, a pure cell line C6/EGFP was established. PCR and DNA sequencing revealed integration of EGFP gene in C6 cell genome. Analysis of cell characteristics revealed no difference between transfected and original cells. Conclusion: A C6/EGFP cell line expressing EGFP as a marker is established, in which the EGFP gene is integrated into the genome. This cell line can be served as a promising tool for further basic research and gene therapy studies.
金贵善刘福生柴奇王建交历俊华
关键词:LENTIVIRUSEGFP
慢病毒载体VP22-EGFP的构建及其对大鼠神经干细胞转染及表达的研究被引量:1
2009年
目的研究VP22穿梭蛋白对神经干细胞(neural stem cell,NSC)转染效率的影响。方法通过酶切质粒pUIA9ep获得VP2:片段后克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的慢病毒(Lentivirus)pHIV-EGFP质粒载体上,并采用PCR及基因测序技术对VP22基因进行鉴定。病毒包装采用三质粒系统共转染293T细胞后感染经体外原代培养、扩增的SD大鼠胎脑NSC,荧光显微镜下观察EGFP在NSC中的表达,流式细胞仪检测EGFP的表达,PCR检测基因组中VP22-EGFP基因的表达,MTT法测定转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的增殖活性。结果PCR和DNA测序证实,外源基因VP22成功插入到质粒载体pHIV—EGFP的骨架结构中的启动子CMV和EGFP序列之间;荧光显微镜下均见有绿色荧光蛋白的表达;流式细胞仪测定结果:Lentivirus-EGFP及Lentivims-VP22-EGFP转染的NSC的EGFP的表达率分别为(23.1±1.8)%及(34.9±2.9)%(P〈0.01);PCR结果显示VP22整合入NSC的基因组DNA中;MTr结果显示转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的细胞生长曲线无明显改变。结论VP22能够提高慢病毒对NSC的转染效率,且不影响其生长特性。表明VP22作为一种短链蛋白可以与编码的治疗基因形成融合蛋白增强基因治疗的疗效,在基因修饰的工程化干细胞中具有良好应用前景。
金贵善刘福生柴奇苏伟朱贵东
关键词:慢病毒载体转染效率神经干细胞
VP22修饰的CD基因工程化神经干细胞治疗大鼠C6脑胶质瘤体外实验研究
2009年
目的探讨病毒蛋白VP22在胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,cD)基因工程化神经干细胞治疗大鼠C6胶质瘤中的作用。方法质粒pAdTrack-CMV-CD中PCR获取CD片段,克隆到慢病毒(1entivims)质粒pHIV-EGFP和pHIV-VP22-EGFP载体上,获得重组质粒pHIV—CD—EGFP和pHIV—VP22-CD—EGFP,采用酶切和PCR技术进行鉴定。病毒包装采用三质粒系统共同转染293T细胞。CD基因的表达采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法鉴定。Lentivirus-EGFP、lentivirus-CD-EGFP、lentivirus-VP22-EGFP和lentivirus—VP22-CD-EGFP四种慢病毒感染经体外原代培养、扩增的sD大鼠胎脑神经干细胞(Nerualstem cells,NSCs),体外与C6细胞按1:1比例共培养,并加入终浓度100mg/L的5-氟胞嘧啶(5-FC)培养3d后,MTT比色法测定细胞存活率。结果酶切和PCR证实,重组的慢病毒中含有CD基因。慢病毒lentivims-EGFP、lentivims—CD—EGFP、lentivirus—VP22-EGFP和lentivirus—VP22-CD—EGFP分别感染NSCs后与C6细胞共培养,在5-FC作用下,其细胞存活率分别为(95.57±4.83)%,(49.96±7.19)%,(94.254-4.32)%和(28.064-6.26)%。统计学处理,转染lentivirus—CD—EGFP和lentivirus—VP22-CD—EGFP组的细胞存活率明显低于其相应对照组lentivirus—EGFP和lentivirus—VP22-EGFP(P〈0.01);其中转染lentivirus-VP22-EGFP组的细胞存活率又明显低于lentivirus-EGFP组(P〈0.01)。结论VP22能够在体外增强CD基因修饰的NSCs抗C6胶质瘤疗效。
金贵善刘福生柴奇苏伟朱贵东
关键词:慢病毒载体神经干细胞C6胶质瘤细胞
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