国家自然科学基金(81100788)
- 作品数：7 被引量：12H指数：3
- 相关作者：邹多宏朱思姮张志愿蒋欣泉吴轶群更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院安徽医科大学安徽医科大学附属口腔医院更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 突变型HIF-1α慢病毒载体的构建及其在常氧条件下的抗降解作用被引量：3
- 2012年
- 目的构建点突变型低氧诱导因子-1α(HIF-1α)慢病毒载体,并检测其在常氧条件下的抗降解作用。方法根据人的HIF-1α基因(NM_001530),对其全长编码区序列进行如下定点突变:803位天冬酰胺突变成丙氨酸,564位脯氨酸突变成丙氨酸,402位脯氨酸突变成丙氨酸。设计并合成3对引物用以导入变异点。PCR扩增序列片段,然后将目的基因PCR产物连接到载体pEGFP-N1上,构建真核表达载体pEGFP-N1-mutant/HIF-1α。PacI和AscI酶切鉴定后,用LR重组系统将目的序列重组到慢病毒载体plenti6.3V5-DEST上,构建慢病毒载体Lenti-MT(突变型HIF-1α)及Lenti-WT(野生型HIF-1α)。将Lenti-MT、Lenti-WT及Lenti-LacZ(对照组)转染293T细胞后,采用qPCR检测目的基因的表达。转染后的细胞在低氧条件下(2%O2)培养48 h,然后常氧条件下培养48 h,采用Western blot检测HIF-1α蛋白在不同氧浓度条件下的表达情况。结果与WT测序结果对比表明MT已被完成。酶切结果证明已成功构建pEGFP-N1-mutant/HIF-1α。qPCR结果显示Lenti-MT组目的基因表达高于Lenti-WT组,且差异具有统计学意义。低氧条件下,HIF-1α在WT组和MT组中的蛋白表达差异无统计学意义。但常氧条件下培养48 h后,WT组目的蛋白的表达显著下降,而MT组变化不大。上述结果表明MT具有明显的抗降解作用。结论成功构建了突变型HIF-1α,慢病毒载体在常氧条件下,Lenti-MT具有显著的抗降解作用。
- 王彦梅何家才邹多宏朱思姮
- 关键词：低氧诱导因子-1Α基因突变慢病毒载体
- MicroRNA在血管形成中的调控作用
- 2013年
- 血管再生和形成对创伤愈合、缺血性疾病治疗及骨缺损修复重建等具有重要作用。小分子RNA(MicroRNAs,miRNAs)是一类小的内源性非编码RNA,通过作用于靶mRNA,促进降解或转录,抑制调控基因的表达。目前证明miRNAs在血管再生和血管性疾病中发挥重要作用。本文综述miRNAs在血管形成、聚集,特别是缺血后新生血管形成中的作用,希望为临床上miRNAs治疗缺血性疾病和骨修复重建提供新的思路。
- 邹多宏张志愿吴轶群
- 关键词：小分子RNA血管形成缺血性疾病内皮细胞
- 口腔临床医学硕士研究生就业问题的调查与分析
- 2012年
- 目的在分析近5年安徽医科大学口腔医学院口腔临床医学硕士毕业生就业状况的基础上，调查在读硕士生对未来就业的选择及心理压力的变化，了解其变化趋势，为开展硕士生就业指导提供依据。方法汇总口腔医学院近5年（2006—2010年）毕业的口腔临床医学硕士就业状况，对66名在读口腔临床医学硕士生（2008—2010级）进行了就业选择及心理压力的匿名问卷调查。结果毕业生近5年在省级三甲医院的就业率下降明显，而在市级三甲医院就业率逐年上涨。在读硕士生希望到市级三甲医院工作的人数减少，愿意到非三甲医院工作及继续读博的人数在增加。学生普遍存在心理压力且不能有效释放。结论随着口腔临床医学硕士毕业生就业形势的变化，在读硕士生对未来就业的选择及心理压力也发生了相应的变化。了解这些变化，可以有针对性地提出解决问题的有效途径；同时在口腔临床医学硕士生的培养方式及就业指导方面也需相应调整。
- 邹多宏朱思姮张凯韩伟何家才周健
- 关键词：口腔临床医学硕士研究生就业问题
- HIF-1α促进BMSCs成骨及成血管作用的体内外研究被引量：4
- 2012年
- 目的:运用基因工程技术,检测HIF-1α基因诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体内、外向成血管和成骨方向分化的作用。方法:(1)HIF-1α基因突变后,应用Lentivirus构建Lenti-LacZ、Lenti-WT、Lenti-MT。(2)分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染BMSCs,检测①细胞转染效率;②目的基因在mRNA及蛋白水平的表达;③目的基因在BMSCs细胞内的定位。(3)BMSCs成功转染目的基因后,分别在特定时间点提取总RNA和蛋白,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因对BMSCs成血管和成骨因子表达的调控作用。(4)行碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)和钙结节的表达检测。(5)检测生物支架材料-明胶海绵(GS)的结构、形态及细胞附着情况。(6)建立F344大鼠颅骨双侧直径5 mm的标准骨缺损模型,分别将细胞复合支架材料植入骨缺损区。术后8周取材,行Microfil灌注,观察血管形成,通过大体标本观察、X线及Micro-CT检查、组织学和形态学检测等观察骨修复情况,采用SPSS10.0软件包对结果进行单因素方差分析,评价修复效果。结果:当感染复数(MOI)=15时,BMSCs的转染效率最高。免疫荧光检测表明,目的基因在BMSCs细胞核内。体外常氧条件下,HIF-1α能够显著上调BMSCs的成骨和成血管因子的表达,且ALP和钙结节结果表明目的基因可诱导BMSCs骨向分化。体内实验结果显示,8周时,Lenti-WT组和Lenti-MT组对骨缺损的修复作用明显强于Lenti-LacZ组,而Lenti-MT组又优于Lenti-WT组。结论:HIF-1α基因可以显著提高BMSCs成血管和成骨活性。
- 邹多宏吴轶群张秀丽蒋欣泉黄远亮张志愿
- 关键词：HIF-1ΑBMSCS骨形成
- 点突变型HIF-1α诱导犬骨髓基质干细胞骨向分化的研究
- 2012年
- 目的:检测点突变型HIF-1α对犬骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用。方法:采用LR重组系统构建慢病毒载体Lenti-WT(wild HIF-1α)、Lenti-MT(mutant HIF-1α)及对照组Lenti-LacZ。分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染犬BMSCs,以LacZ组为对照,成功转染后,分别在0、1、4、7、14及21 d提取总RNA和蛋白质,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因在体外常氧条件下对BMSCs成骨因子表达的调控。将带有目的基因的BMSCs按2×105/孔接种至6孔板,分别于14 d和21 d,运用茜素红染色(alizarin red-S staining,ARS)检测其钙结节的表达。采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:当MOI=9时,BMSCs的转染效率达90%以上。目的基因转染后第4天,BMSCs的成骨因子在mRNA和蛋白水平表达显著提高,14～21 d时达到高峰,并维持在高表达状态(P<0.05)。ARS结果表明,目的基因在常氧条件下可诱导BMSCs向成骨方向分化。结论:体外常氧条件下,突变型HIF-1α能够稳定表达且保持高度活性,Lenti-MT可显著提高犬BMSCs的成骨活性。
- 俞建英朱思姮邹多宏
- 关键词：HIF-1ΑBMSCS骨生成
- 颌骨放射性骨坏死治疗进展被引量：5
- 2012年
- 放射治疗是头颈部肿瘤常用的辅助治疗方法 ,其往往与化学治疗同时进行,可为晚期或无法手术切除的肿瘤提供治疗可能。但放射线作用于肿瘤细胞时,可杀伤正常组织细胞,发生临床上最严重的并发症即放射性骨坏死(osteoradionecrosis,ORN)。而针对ORN,目前缺乏有效的治疗手段。本文就ORN的研究进展作一概述,希望能为今后ORN的有效治疗提供新的思路。
- 邹多宏蒋欣泉张志愿
- 关键词：放射性骨坏死高压氧
- 血管化组织工程骨研究进展
- 2012年
- 随着材料学和分子生物学的发展，运用组织工程技术修复标准骨缺损成为当前的研究热点。但在大体积骨缺损修复重建时，组织工程骨的血管化问题是制约其最终治疗效果的关键因素。骨组织工程研究中血管化问题的重要性日益彰显，而当组织工程骨的厚度超过100μm时，在体内构建能为细胞提供氧、营养及去除代谢废物的功能性血管会面临重大挑战。因此，血运重建被认为是骨组织工程继种子细胞、支架材料、细胞因子三大要素之后的第四大要素。现就血管化组织工程骨研究的最新进展综述。
- 朱思姮韩伟邹多宏
- 关键词：组织工程骨血管化骨组织工程种子细胞分子生物学
