目的对前期研究中所筛选出的能够与戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）重组衣壳蛋白颗粒P239存在特异性的相互作用的蛋白进行分析验证。方法使用pull-down、MALDI-TOF-MS、免疫共沉淀技术及免疫荧光技术对与P239有潜在相互作用的蛋白进行鉴定和进一步分析。结果MALDI-TOF-MS及免疫共沉淀技术，均表明该蛋白为热休克蛋白90（HSP90）并与P239相互作用。随后，对P239进入细胞的过程中胞内HSP90蛋白量及其分布的变化做了初步研究。发现虽然HSP90在蛋白总量上并没有发生明显的变化，但其定位却伴随着P239在胞内的迁移发生了由细胞膜向细胞核核周的转移。结论HSP90可能参与了P239入胞后的转运并介导了HEV入胞后向效应细胞器的转运，为研究HEV的感染机制及对HEV的预防和控制提供了有益的线索。
By using Western blot and immunofluorescence assays,the recombinant HEV capsid protein p239 was found specifically attached to the HepG2 cell surface and entered to the cytoplasm with the increase of incubation temperature.Pre-mixture of wild-type HEV with p239 blocked the infectivity of the virus on primary cultured human hepatocytes and HepG2 cells,indicating that p239 and HEV competed the same targeting site on these cells.These data provide evidence that p239 has a similar cell surface structure with wild-type HEV.
肝炎病毒的感染常常导致人体肝脏代谢能力变化,研究表明甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus,HAV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)和丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)的感染都会影响肝细胞对药物的代谢能力。在本研究中,通过酵母双杂交系统在人肝cDNA文库中筛选与戊型肝炎病毒重组衣壳蛋白E2结合的蛋白,发现了与细胞色素P450 2A6(CYP2A6)部分片段高度同源的蛋白序列。通过pull-down、免疫共沉淀以及特异性底物催化反应评价等方法进一步证实了CYP2A6与重组衣壳蛋白E2、p239间的相互作用,并发现与p239结合可以降低CYP2A6对其特异性底物香豆素的催化能力。上述结果提示CYP2A6可能在戊肝病毒入侵细胞后的细胞病变过程中起作用。
